一种促进大根兰试管开花和结实的方法技术

本发明专利技术提供了一种促进大根兰试管开花和结实的方法，属于植物快繁技术领域。本发明专利技术的技术方案包括以下步骤：以大根兰无菌苗的根状茎为外植体，进行增殖培养，取增殖根状茎转移至开花诱导培养基，诱导至花苞盛开，进行人工授粉培养至结实，即可得到大根兰种子。本发明专利技术可使大根兰的整个生活史由3

【技术实现步骤摘要】
一种促进大根兰试管开花和结实的方法


[0001]本专利技术属于植物快繁
，尤其涉及一种促进大根兰试管开花和结实的方法。

技术介绍

[0002]腐生兰又称完全菌根异养型兰(Fully Mycoheterotrophic orchids)，无绿叶，不能进行光合作用制造有机物，依靠与其共生的真菌提供营养。近年来，腐生兰独特的生活方式引起了生物学家的广泛关注。同时，腐生兰具有重要的药用价值，其观赏价值也被逐渐认识。
[0003]大根兰(Cymbidium macrorhizon)为兰科兰属植物，是一种腐生兰，分布在我国四川、云南、贵州和广西的海拔400
‑
2100米左右的林下或林缘。在自然条件下，其种子萌发需要共生真菌参与，从萌发到开花结实通常需要4年以上，极为耗时，科技人员也很难跟踪研究植株的整个生活史。腐生兰试管开花结实体系的建立，将进一步促进腐生兰与其共生真菌、营养来源以及系统演化等热点问题的系统解决，并为腐生兰的资源保护及再生研究提供技术支撑，也为腐生兰试管花卉的开发提供更多可能。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种促进大根兰试管开花和结实的方法，使大根兰的整个生活史在2年内完成，为腐生兰类野生种质资源的研究、开发和可持续利用等提供技术。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0006]一种促进大根兰试管开花和结实的方法，包括以下步骤：以大根兰无菌苗的根状茎为外植体，进行增殖培养，取增殖根状茎转移至开花诱导培养基，诱导至花苞盛开，进行人工授粉培养至结实；
[0007]所述开花诱导培养基包括：花宝3号3.0g/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100mg/L、NAA 1.0
‑
2.0mg/L、椰子汁200
‑
300mL/L、蔗糖30g/L、琼脂5.6g/L、活性炭1.0g/L。
[0008]优选的是，所述根状茎外植体来源于大根兰种子萌发的无菌苗；更优选的是所述根状茎外植体长1.0
‑
2.0cm。
[0009]优选的是，所述增殖培养时，增殖培养基包括：花宝1号3.0g/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100.0mg/L、6
‑
BA 5.0
‑
10.0mg/L、KT 2.0
‑
5.0mg/L、椰子汁100
‑
200mL/L、蔗糖20g/L、琼脂5.6g/L。
[0010]更优选的是，所述增殖培养时暗培养，温度为23
±
2℃。
[0011]更优选的是，所述增殖培养时间为6个月以上，增殖倍数达到4倍以上后转移至开花诱导培养基。
[0012]优选的是，所述开花诱导培养时光/暗周期为6h:18h，温度为20
±
2℃。
[0013]优选的是，所述花苞盛开2
‑
3d后，进行人工授粉。
[0014]更优选的是，所述人工授粉包括：用镊子取出花粉块，置于同一朵花的凹槽状柱头上。
[0015]优选的是，所述人工授粉后，调整光/暗周期为12h:12h，温度为23
±
2℃。
[0016]相对于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
[0017]本专利技术提供了一种促进大根兰试管开花和结实的方法，通过对大根兰根状茎进行开花诱导培养，5个月左右即可见到根状茎向顶部伸长，向顶部伸长的根状茎过半个月可以明显看到花苞出现，花苞出现20d左右花朵盛开；花朵盛开后进行瓶内无菌人工授粉，3d后子房开始膨大，9个月左右，果荚膨大，产生的种子可直接播种。利用本专利技术的技术方案，可将大根兰的生活史由3
‑
8年缩短至2年。
附图说明
[0018]图1：本专利技术诱导大根兰根状茎分化的试管开花；
[0019]图2：本专利技术人工授粉得到了大根兰试管内结实；
[0020]图3：试管结实种子TTC染色的种子活力情况；
[0021]图4：试管结实种子无菌萌发的种子活力情况。
具体实施方式
[0022]本专利技术提供了一种促进大根兰试管开花和结实的方法，包括以下步骤：以大根兰无菌苗的根状茎为外植体，进行增殖培养，取增殖根状茎转移至开花诱导培养基，诱导至花苞盛开，进行人工授粉培养直至结实。
[0023]本专利技术开花诱导培养基包括：花宝3号3.0g/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100mg/L、NAA 1.0
‑
2.0mg/L、椰子汁200
‑
300mL/L、蔗糖30g/L、琼脂5.6g/L、活性炭1.0g/L；进一步优选开花诱导培养基中NAA 1.5mg/L，椰子汁250mL/L。花宝3号为开花肥，氮磷钾含量为10
‑
30
‑
20，作为诱导培养基成分之一，能够促进大根兰开花；NAA作为细胞生长素，亦能够诱导大根兰开花；添加活性炭，可为根状茎营造地下黑暗生长环境，保护根状茎的生长；在开花诱导培养基内添加高浓度的椰子汁和蔗糖，除促进大根兰开花外，还可进一步促进后期果荚发育，确保种子正常生长。
[0024]本专利技术优选根状茎外植体来源于大根兰种子萌发的无菌苗。进一步优选，所述根状茎外植体长1.0
‑
2.0cm；更优选长1.5cm。作为一种可实施方式，将大根兰种子直接撒播在无菌萌发培养基上培育成无菌苗，萌发培养基包括：花宝1号3.0g/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100mg/L、NAA 0.1
‑
0.5mg/L、蔗糖20g/L和琼脂5.6g/L；培养温度为23
±
2℃，暗培养，获得1.0
‑
2.0cm的根状茎外植体。
[0025]本专利技术优选增殖培养时，增殖培养基包括：花宝1号3.0g/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100.0mg/L、6
‑
BA 5.0
‑
10.0mg/L、KT 2.0
‑
5.0mg/L、椰子汁100
‑
200mL/L、蔗糖20g/L、琼脂5.6g/L；进一步优选增殖培养基中6
‑
BA 7.5mg/L、KT 3.5mg/L、椰子汁150mL/L。花宝1号氮磷钾含量为7
‑6‑
19，可满足大根兰新生根状茎在生长和增殖过程中对相关元素的需求；6
‑
BA、KT能够诱导根状茎增殖。
[0026]本专利技术优选增殖培本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种促进大根兰试管开花和结实的方法，其特征在于，包括以下步骤：以大根兰无菌苗的根状茎为外植体，进行增殖培养，取增殖根状茎转移至开花诱导培养基，诱导至花苞盛开，进行人工授粉培养至结实；所述开花诱导培养基包括：花宝3号3.0g/L、维生素B60.5mg/L、维生素B10.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100mg/L、NAA1.0
‑
2.0mg/L、椰子汁200
‑
300mL/L、蔗糖30g/L、琼脂5.6g/L、活性炭1.0g/L。2.根据权利要求1所述的促进大根兰试管开花和结实的方法，其特征在于，所述根状茎外植体来源于大根兰种子萌发的无菌苗。3.根据权利要求1或2所述的促进大根兰试管开花和结实的方法，其特征在于，所述根状茎外植体长1.0
‑
2.0cm。4.根据权利要求1所述的促进大根兰试管开花和结实的方法，其特征在于，所述增殖培养时，增殖培养基包括：花宝1号3.0g/L、维生素B60.5mg/L、维生素B10.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100.0mg/L、6
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BA 5.0
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【专利技术属性】
技术研发人员：何俊，浦秀丽，李村富，杨俊波，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：