抗HK2嵌合抗原受体(CAR)制造技术

本公开提供了特异性靶向人激肽释放酶

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗HK2嵌合抗原受体(CAR)
[0001]序列表
[0002]本申请包含已经以ASCII格式电子递交的序列表，并且据此全文以引用方式并入。所述ASCII副本创建于2020年6月30日，命名为JBI6124WOPCT1_SL.txt，并且大小为562,160字节。


[0003]本专利技术涉及包含靶向hK2的单链可变片段的靶向hK2的嵌合抗原受体(CAR)和表达CAR的工程化靶向hK2的免疫细胞。还提供了编码CAR的核酸和表达载体、包含载体的重组细胞，以及包含表达靶向hK2的CAR的工程化免疫细胞的组合物。还提供了制备CAR和工程化免疫细胞的方法，以及使用工程化免疫细胞治疗包括癌症在内的病症的方法。

技术介绍

[0004]对于男性而言，前列腺癌是第二常诊断出的癌症和第六大癌症致死原因，在全世界男性中占总新癌症病例的14％(903,500)以及总癌症死亡的6％(258,400)。基于疾病的程度、激素状态以及是否存在可检测到的转移，将前列腺癌从被诊断出到死亡的过程最恰当地分类为以下一系列临床分期：局部疾病、放射疗法或外科手术后前列腺特异性抗原(PSA)的水平升高但不存在可检测到的转移，以及在非去势或去势期的临床转移。虽然外科手术、放射或这两者的组合对于患有局部疾病的患者可能有效，但是这些患者中有相当比例会复发，如通过PSA的水平升高所证实，复发可导致转移进一步发展，特别是在高风险组中转变为该疾病的致死期。
[0005]雄激素耗竭疗法(ADT)是具有以下通常可预见到的结果的标准治疗：PSA水平下降，肿瘤不增殖的稳定期，然后是PSA水平升高并再生长为去势难治性疾病。在过去，ADT一直是转移性前列腺癌患者的护理标准。
[0006]激肽释放酶相关肽酶2(hK2、HK2)是具有对于前列腺组织和前列腺癌具有特异性的雄激素受体(AR)驱动表达的胰蛋白酶样酶。hK2被跨膜蛋白酶丝氨酸2(TMPRSS2)活化并分泌到前列腺管中，在前列腺管中hK2引发裂解精囊蛋白(精液中的细胞外基质)的级联反应，以增强精子能动性。hK2表达限制于前列腺和前列腺癌组织，然而最近已证实，通过类固醇激素对AR通路进行适当活化后，hK2在乳腺癌细胞株和原代患者样品中可检测到(美国专利公布2018/0326102)。类似于PSA，当前列腺的高度结构化组织因肥大或恶性转化而受损时，无催化活性的hK2逆行释放到血液中。
[0007]T细胞疗法利用了分离的T细胞，这些T细胞已经被基因修饰以增强它们对特定肿瘤相关抗原的特异性。基因修饰可以涉及嵌合抗原受体(CAR)或外源性T细胞受体的表达，以将新的抗原特异性提供到T细胞上。表达嵌合抗原受体的T细胞(CAR
‑
T细胞)可以诱导肿瘤免疫反应性。需要利用CAR
‑
T细胞的更好的癌症疗法。

技术实现思路

[0008]本文公开了嵌合抗原受体(CAR)(例如，靶向人激肽释放酶
‑
2(hK2)的CAR)、包含CAR的细胞、编码CAR的载体(例如，重组表达载体)，以及编码CAR的核酸分子，制备CAR、组合物、多肽、蛋白质、核酸、宿主细胞、细胞群体的方法，以及使用所公开的CAR治疗疾病(例如，癌症)的方法。
[0009]在一个方面，提供了一种嵌合抗原受体(CAR)，该嵌合抗原受体包含：
[0010](a)细胞外结构域，该细胞外结构域包含scFv并特异性地结合人激肽释放酶
‑
2(hK2)抗原，
[0011](b)跨膜结构域；和
[0012](c)细胞内信号传导结构域，该细胞内信号传导结构域任选地包括至少一个共刺激结构域。
[0013]在一些实施方案中，CAR还包含：
[0014](d)CD8a
‑
铰链区，
[0015]其中跨膜结构域包含CD8a跨膜区(CD8a
‑
TM)多肽；并且
[0016]其中细胞内信号传导结构域包括共刺激结构域和初级信号传导结构域，该共刺激结构域包含TNF受体超家族成员9(CD137)组分，该初级信号传导结构域包含T细胞表面糖蛋白CD3ζ链(CD3z)组分。
[0017]在一些实施方案中，CD8a铰链区包含与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:269、SEQ ID NO:270、SEQ ID NO:271或SEQ ID NO:272具有至少90％同一性的氨基酸序列；
[0018]跨膜结构域包含与SEQ ID NO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者
[0019]细胞内信号传导结构域包括共刺激结构域和初级信号传导结构域，该共刺激结构域具有与SEQ ID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列，该初级信号传导结构域具有与SEQ ID NO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列。
[0020]在另一方面，提供了一种嵌合抗原受体(CAR)，该嵌合抗原受体包含细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，其中细胞外抗原结合结构域包含：
[0021]具有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链互补决定区1(CDR1)、具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的重链CDR3；
[0022]具有SEQ ID NO:314的氨基酸序列的重链互补决定区1(CDR1)、具有SEQ ID NO:315的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO:311的氨基酸序列的重链CDR3；
[0023]具有SEQ ID NO:309的氨基酸序列的重链互补决定区1(CDR1)、具有SEQ ID NO:310的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO:311的氨基酸序列的重链CDR3；
[0024]具有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链互补决定区1(CDR1)、具有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的重链CDR3；
[0025]具有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的重链互补决定区1(CDR1)、具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的重链CDR3；
[0026]具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链互补决定区1(CDR1)、具有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链CDR3；
[0027]具有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的重链互补决定区1(CDR1)、具有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的重链CDR3；
[0028]具有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的重链互补决定区1(CDR1)、具有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的重链CDR3；
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合抗原受体（CAR），其包含：(a) 细胞外结构域，所述细胞外结构域特异性地结合人激肽释放酶
‑
2（hK2）抗原，(b) 跨膜结构域；和(c) 细胞内信号传导结构域，所述细胞内信号传导结构域任选地包括至少一个共刺激结构域。2.根据权利要求1所述的CAR，所述CAR还包含：(d) CD8a
‑
铰链区，其中所述跨膜结构域包含CD8a跨膜区（CD8a
‑
TM）多肽；并且其中所述细胞内信号传导结构域包括共刺激结构域和初级信号传导结构域，所述共刺激结构域包含TNF受体超家族成员9（CD137）组分，所述初级信号传导结构域包含T细胞表面糖蛋白CD3ζ链（CD3z）组分。3.根据权利要求2所述的CAR，其中所述CD8a铰链区包含与SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 269、SEQ ID NO: 270、SEQ ID NO: 271或SEQ ID NO: 272具有至少90%同一性的氨基酸序列；所述跨膜结构域包含与SEQ ID NO: 26具有至少90%同一性的氨基酸序列；并且/或者所述细胞内信号传导结构域包括共刺激结构域和初级信号传导结构域，所述共刺激结构域具有与SEQ ID NO: 27具有至少90%同一性的氨基酸序列，所述初级信号传导结构域具有与SEQ ID NO: 28具有至少90%同一性的氨基酸序列。4.一种嵌合抗原受体（CAR），其包含细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，其中所述细胞外抗原结合结构域包含：具有SEQ ID NO: 63的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 64的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 66的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 314的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 315的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 311的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 309的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 310的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 311的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 63的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 65的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 66的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 72的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 73的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 66的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 86的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 87的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 88的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 92的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 93的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 94的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 102的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 103的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 104的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 105的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 106的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 104的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 107的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 108
的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 109的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 110的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 111的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 109的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 102的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 112的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 113的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 105的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 114的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 113的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 115的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 116的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 117的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 118的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 119的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 117的氨基酸序列的重链CDR3；具有SEQ ID NO: 120的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 121的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 122的氨基酸序列的重链CDR3；或者具有SEQ ID NO: 123的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 124的氨基酸序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO: 122的氨基酸序列的重链CDR3，其中所述细胞外抗原结合结构域结合所述hK2抗原。5.一种嵌合抗原受体（CAR），其包含细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，其中所述细胞外抗原结合结构域包含：具有SEQ ID NO: 67的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 69的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 71的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 68的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 70的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 71的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 89的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 90的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 91的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 95的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 96的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 71的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 312的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 313的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 91的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 89的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 90的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 91的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 67的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 126的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 71的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 128的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 129的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 130的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 125的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 131的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 132的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 133的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 134的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 135的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 136的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 137
的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 138的氨基酸序列的轻链CDR3；或者具有SEQ ID NO: 97的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 127的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 139的氨基酸序列的轻链CDR3，其中所述细胞外抗原结合结构域结合所述hK2抗原。6.根据权利要求4所述的CAR，其中所述细胞外抗原结合结构域还包含：具有SEQ ID NO: 67的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 69的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 71的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 68的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 70的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 71的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 89的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 90的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 91的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 95的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 96的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 71的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 89的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 90的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 91的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 67的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 126的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 71的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 128的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 129的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 130的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 125的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 131的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 132的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 133的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 134的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 135的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 136的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 137的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 138的氨基酸序列的轻链CDR3；或者具有SEQ ID NO: 97的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 127的氨基酸序列的轻链CDR2和具有SEQ ID NO: 139的氨基酸序列的轻链CDR3。7.根据权利要求6所述的CAR，其中所述细胞外抗原结合结构域包含：具有SEQ ID NO: 63的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 64的氨基酸序列的重链CDR2、具有SEQ ID NO: 66的氨基酸序列的重链CDR3、以及具有SEQ ID NO: 67的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 69的氨基酸序列的轻链CDR2、具有SEQ ID NO: 71的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 63的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 65的氨基酸序列的重链CDR2、具有SEQ ID NO: 66的氨基酸序列的重链CDR3、以及具有SEQ ID NO: 68的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 70的氨基酸序列的轻链CDR2、具有SEQ ID NO: 71的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 63的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 65的氨基酸序列的重链CDR2、具有SEQ ID NO: 66的氨基酸序列的重链CDR3、以及具有SEQ ID NO: 67的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 126的氨基酸序列的轻
链CDR2、具有SEQ ID NO: 71的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 63的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 65的氨基酸序列的重链CDR2、具有SEQ ID NO: 66的氨基酸序列的重链CDR3、以及具有SEQ ID NO: 67的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 69的氨基酸序列的轻链CDR2、具有SEQ ID NO: 71的氨基酸序列的轻链CDR3；具有SEQ ID NO: 63的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQ ID NO: 65的氨基酸序列的重链CDR2、具有SEQ ID NO: 66的氨基酸序列的重链CDR3、以及具有SEQ ID NO: 67的氨基酸序列的轻链互补决定区1（CDR1）、具有...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：詹森生物科技公司，
类型：发明
国别省市：