靶向B细胞成熟抗原的嵌合抗原受体制造技术

本发明专利技术提供特异性结合BCMA(B细胞成熟抗原)的嵌合抗原受体(CAR)。本发明专利技术还涉及包括这种CAR的经改造的免疫细胞、编码CAR的核酸、和制备这种CAR、改造免疫细胞、和核酸的方法。本发明专利技术还涉及这些CAR和经改造的免疫细胞用于治疗与表达BCMA的恶性细胞相关的病症(例如癌症)的治疗方法。症)的治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
靶向B细胞成熟抗原的嵌合抗原受体
专利

[0001]本专利技术涉及嵌合抗原受体(CAR)。CAR能够利用配体结合结构域的性质将免疫细胞的特异性和反应性重新定向至选定靶点。特别地，本专利技术涉及特异性结合B细胞成熟抗原的CAR(BCMA特异性CAR)。本专利技术还涉及编码BCMA特异性CAR的多核苷酸和在其表面表达BCMA特异性CAR的分离的细胞。本专利技术还涉及改造免疫细胞在其表面表达BCMA特异性CAR的方法。本专利技术特别有益于治疗B细胞淋巴瘤和白血病。本专利技术还涉及包括BCMA特异性CAR的免疫细胞(BCMA特异性CAR
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T细胞)、包括BCMA特异性CAR
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T细胞的组合物、和使用该BCMA特异性CAR
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T细胞用于治疗与表达BCMA的恶性细胞相关的病症(例如癌症)的方法。
[0002]专利技术背景
[0003]多发性骨髓瘤是以克隆浆细胞的积累为特征的恶性肿瘤(参见例如Lonial et al.,Clinical Cancer Res.,77(6):1264
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1277(2011))。MM目前的治疗方法通常会导致缓解，但几乎所有的患者最终都会复发和死亡(参见例如Rajkumar,Nature Rev.Clinical Oncol,5(8):479
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491(2011))。
[0004]经过遗传修饰以识别恶性肿瘤相关抗原的T细胞的过继转移显示出作为治疗癌症的新方法的希望(参见例如Brenner et al.,Current Opinion in Immunology,22(2):251
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257(2010)；Rosenberg et al.,Nature Reviews Cancer,8(4):299
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308(2008))。T细胞可被遗传修饰以表达嵌合抗原受体(CAR)，其是由抗原识别部分和T细胞活化结构域组成的融合蛋白(参见例如Eshhar et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90(2):720
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724(1993),and Sadelain et al.,Curr.Opin.Immunol,21(2):215
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223(2009))。
[0005]B细胞成熟抗原(BCMA、CD269或TNFRSF17)是肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族的成员。BCMA在含有t(4；16)易位的恶性人T细胞淋巴瘤中被鉴定出。该基因在B细胞谱系中选择性表达，其中在浆母细胞和抗体分泌细胞的浆细胞中表达最高。BCMA结合两种配体，分别是具有1uM亲和力的B细胞激活因子(BAFF)(也称为B淋巴细胞刺激因子(BLyS)和APOL相关白细胞表达配体(TALL
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1))和具有16nM亲和力的增殖诱导配体(APRIL)。APRIL或BAFF与BCMA的结合促进涉及NF
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κB、Elk
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1、c
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Jun N
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末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的信号级联放大，其产生细胞存活和增殖的信号。BCMA也表达于恶性B细胞和涉及B淋巴细胞的几种癌症，包括多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、和慢性淋巴细胞性白血病。在浆母细胞参与的诸如系统性红斑狼疮(SLE)和类风湿性关节炎等自身免疫性疾病中，表达BCMA的抗体生成细胞分泌攻击自身的自身抗体。
[0006]在多发性骨髓瘤的情况下，每年在美国新诊断出约24,000例新病例，这一数字占美国新诊断的血液癌的约15％。平均每年11,000人死于多发性骨髓瘤，平均5年生存率约44％，存活中位数为50
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55个月。目前多发性骨髓瘤的治疗主要集中在浆细胞凋亡和/或降低破骨细胞活性(例如，化疗、沙利度胺、来那度胺、双膦酸盐和/或蛋白酶体抑制剂如硼替佐米或卡非佐米)。然而，多发性骨髓瘤仍然是不治之症，几乎所有患者都发展出对这些药物的耐药性并最终复发。因此，多发性骨髓瘤的替代治疗，例如使用包括BCMA特异性CAR和BCMA特异性CAR
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T细胞的抗BCMA拮抗剂，将成为优异的治疗剂。
CDR2；和(iii)含有SEQ ID NO：222、225、227、253、263、272、216或214所示序列的VL CDR3。
[0012]在一些实施方案中，本文提供的BCMA特异性CAR的细胞外配体结合结构域结构域包括(a)重链可变(VH)区，其包括(i)含有SEQ ID NO：150、151或152所示序列的VH互补决定区1(CDR1)；(ii)含有153或154所示序列的VH CDR2；和(iii)含有155所示序列的VH CD3；和/或(b)轻链可变区(VL)，其包括(i)含有SEQ ID NO：209所示序列的VL CDR1；(ii)含有SEQ ID NO：221所示序列的VL CDR2，和(iii)含有SEQ ID NO：222所示序列的VL CDR2。
[0013]在一些实施方案中，本文提供的BCMA特异性CAR的细胞外配体结合结构域结构域包括(a)重链可变(VH)区，其包括(i)含有SEQ ID NO：150、151或152所示序列的VH互补决定区1(CDR1)；(ii)含有187或188所示序列的VH CDR2；和(iii)含有155所示序列的VH CD3；和/或(b)轻链可变区(VL)，其包括(i)含有SEQ ID NO：249所示序列的VL CDR1；(ii)含有SEQ ID NO：221所示序列的VL CDR2，和(iii)含有SEQ ID NO：225所示序列的VL CDR3。
[0014]在一些实施方案中，本文提供的BCMA特异性CAR的细胞外配体结合结构域结构域包括(a)重链可变(VH)区，其包括(i)含有SEQ ID NO：150、151或152所示序列的VH互补决定区1(CDR1)；(ii)含有165或166所示序列的VH CDR2；和(iii)含有155所示序列的VH CD3；和/或(b)轻链可变区(VL)，其包括(i)含有SEQ ID NO：226所示序列的VL CDR1；(ii)含有SEQ ID NO：221所示序列的VL CDR2，和(iii)含有SEQ ID NO：227所示序列的VL CDR3。
[0015]在一些实施方案中，本文提供的BCMA特异性CAR的细胞外配体结合结构域结构域包括(a)重链可变(VH)区，其包括(i)含有SEQ ID NO：156、151或157所示序列的VH互补决定区1(CDR1)；(ii)含有162或159所示序列的VH CDR2；和(iii)含有161所示序列的VH CD3；和/或(b)轻链可变区(VL)，其包括(i)含有SEQ ID NO：251所示序列的VL CDR1；(ii)含有SEQ ID NO：252所示序列的VL CDR2，和(iii)含有SEQ ID NO：253所示序列的VL CDR3。
[0016]在一些实施方案中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包含细胞外配体结合结构域、第一跨膜结构域和细胞内信号转导结构域的B细胞成熟抗原(BCMA)特异性嵌合抗原受体(CAR)，其中所述细胞外结构域包含单链Fv片段(scFv)，所述scFv包含：(a)重链可变(VH)区，其包含SEQ ID NO：33中呈现的相同的VH互补决定区(CDR)1、相同的VH CDR2和相同的VH CDR3，和轻链可变(VL)区，其包含SEQ ID NO：34中呈现的相同的VL CDR1、相同的VL CDR2和相同的VL CDR3；或(b)VH区，其包含SEQ ID NO：112中呈现的相同的VH CDR1、相同的VH CDR2和相同的VH CDR3，和VL区，其包含SEQ ID NO：38中呈现的相同的VL CDR1、相同的VL CDR2和相同的VL CDR3；其中所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3根据Kabat命名系统、Chothia命名系统或Kabat和Chothia命名系统的组合确定。2.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中所述scFv包含：VH区，其包含SEQ ID NO：33中呈现的相同的VH CDR1、相同的VH CDR2和相同的VH CDR3，和VL区，其包含SEQ ID NO：34中呈现的相同的VL CDR1、相同的VL CDR2和相同的VL CDR3。3.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中所述VH区包含SEQ ID NO：33的氨基酸序列。4.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中所述VH区包含具有一个至若干个不在CDR内的氨基酸的保守氨基酸取代的SEQ ID NO：33的氨基酸序列。5.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中所述VL包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列。6.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中所述VL包含具有一个至若干个不在CDR内的氨基酸的保守氨基酸取代的SEQ ID NO：34的氨基酸序列。7.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中VH CDR1包含SEQ ID NO：150、151或152的氨基酸序列；VH CDR2包含SEQ ID NO：153或154的氨基酸序列；VH CDR3包含SEQ ID NO：155的氨基酸序列；VL CDR1包含SEQ ID NO：209的氨基酸序列；VL CDR2包含SEQ ID NO：221的氨基酸序列；和VL CDR3包含SEQ ID NO：222的氨基酸序列。8.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中所述scFv包含：VH区，其包含SEQ ID NO：112中呈现的相同的VH CDR1、相同的VH CDR2和相同的VH CDR3，和VL区，其包含SEQ ID NO：38中呈现的相同的VL CDR1、相同的VL CDR2和相同的VL CDR3。9.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中所述VH区包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。10.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中所述VH区包含具有一个至若干个不在CDR内的氨基酸的保守氨基酸取代的SEQ ID NO：112的氨基酸序列。
11.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中所述VL包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列。12.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中所述VL包含具有一个至若干个不在CDR内的氨基酸的保守氨基酸取代的SEQ ID NO：38的氨基酸序列。13.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中VH CDR1包含SEQ ID NO：151、156或157的氨基酸序列；VH CDR2包含SEQ ID NO：158或159的氨基酸序列；VH CDR3包含SEQ ID NO：155的氨基酸序列；VL CDR1包含SEQ ID NO：209的氨基酸序列；VL CDR2包含SEQ ID NO：221的氨基酸序列；和VL CDR3包含SEQ ID NO：225的氨基酸序列。14.权利要求4、6、10或12的BCMA特异性CAR，其中氨基酸的所述一个至若干个保守氨基酸取代不会有害地改变所述BCMA特异性CAR的功能活性。15.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中所述细胞内信号转导结构域包含CD3ζ信号转导结构域和4
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1BB结构域，所述第一跨膜结构域包含CD8α链跨膜结构域，和所述BCMA特异性CAR进一步包含在所述细胞外配体结合结构域和第一跨膜结构域之间的人CD8α铰链。16.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中：(a)所述细胞内信号转导结构域包含CD3ζ信号转导结构域和/或4
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1BB结构域；和/或(b)所述第一跨膜结构域包含CD8α链跨膜结构域；和/或(c)所述细胞外配体结合结构域、第一跨膜结构域和细胞内信号转导结构域位于单个多肽上。17.权利要求1的BCMA特异性CAR，进一步包含在所述细胞外配体结合结构域和所述第一跨膜结构域之间的茎结构域；任选地其中所述茎结构域选自：人CD8α铰链、IgG1铰链和FcγRIIIα铰链。18.权利要求1的BCMA特异性CAR，进一步包含：(a)第二细胞内信号转导结构域；任选地所述第二细胞内信号转导结构域包含4
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1BB结构域；和/或(b)CD20表位；任选地所述CD20表位包含SEQ ID NO：397或SEQ ID NO：398中所示的氨基酸序列；和/或(c)另一不特异性针对BCMA的细胞外配体结合结构域。19.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中所述第一跨膜结构域包含具有SEQ ID NO：322的序列的CD8α跨膜结构域。20.权利要求1的BCMA特异性CAR，其中所述胞内信号转导结构域包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：T，
申请(专利权)人：辉瑞公司，
类型：发明
国别省市：