包含使亚铁氰化物的氧化还原电位增大的蛋白酶的稳定剂的糖化蛋白质测定试剂、糖化蛋白质的测定方法、糖化蛋白质测定试剂的保存方法以及糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法技术

本发明专利技术提供一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含使亚铁氰化物的氧化还原电位增大的蛋白酶的稳定剂的糖化蛋白质测定试剂、糖化蛋白质的测定方法、糖化蛋白质测定试剂的保存方法以及糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法


[0001]本专利技术涉及临床检查药，涉及糖化蛋白质测定试剂、糖化蛋白质的测定方法、糖化蛋白质测定试剂的保存方法以及糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法。

技术介绍

[0002]为了进行糖尿病的诊断和管理，糖化蛋白质的测定是重要的，对于反映过去约1～2个月的平均血糖值的糖化血红蛋白(HbA1c等)、反映过去约2周的平均血糖值的糖化白蛋白(GA)以及作为血清中的糖化蛋白质的总称的果糖胺(FRA)等进行日常测定。
[0003]作为高精度、低成本、简便地测定糖化蛋白质的方法，可以举出酶法。例如专利文献1、2、3中记载了以下内容：使蛋白酶作用于糖化蛋白质，使用作用于所生成的糖化氨基酸或糖化肽的酮胺氧化酶而生成过氧化氢，进一步使用过氧化酶、Trinder
’
s试剂、4
‑
氨基安替比林进行比色定量，由此可以测定血清中的糖化蛋白质。专利文献4中记载了以下内容：使蛋白酶作用于糖化蛋白质，使用作用于所生成的糖化氨基酸或糖化肽的酮胺氧化酶，利用显色反应或氧电极测定此时的氧消耗量，由此可以测定血清中的糖化蛋白质。专利文献5、6中记载了以下内容：使蛋白酶作用于糖化血红蛋白或糖化白蛋白，使用作用于所生成的糖化氨基酸或糖化肽的酮胺氧化酶而生成过氧化氢，进一步使用过氧化酶、Trinder
’
s试剂以及4
‑
氨基安替比林进行比色定量，由此可以测定糖化血红蛋白、糖化白蛋白。
[0004]为了改善试剂的稳定性，这些糖化蛋白质测定试剂中包含蛋白酶稳定剂。例如，专利文献6中公开了将二甲基亚砜、醇、水溶性钙盐、食盐、季铵盐、或者季铵盐型阳离子表面活性剂作为蛋白酶稳定剂。另外，尽管未提及测定试剂，但专利文献7中记载了通过含有硼酸、有机硼酸、苯基硼酸作为蛋白酶抑制剂，能够改善液体洗剂中的蛋白酶的储藏稳定性。专利文献8中记载了，为了使油包水乳液中的作为酶的蛋白酶稳定，多元醇是有效的。专利文献9、10中记载了液体洗剂组合物中的肽醛、钙离子、硼组合物、多元醇以及盐酸苯并脒可以作为蛋白酶的稳定剂使用。
[0005]另一方面，在使用Trinder
’
s试剂以及4
‑
氨基安替比林等色素对过氧化氢进行比色定量的试剂中，根据试剂中或被测物中的测定成分以外的成分，Trinder
’
s试剂和4
‑
氨基安替比林可能发生非特异性的缩合显色，该显色被称为试剂空白。若该试剂空白大，则试剂空白(噪声)相对于被测物中的测定成分(信号)的比例增大，成为测定误差的原因，因此优选试剂空白低。例如专利文献11中记载了下述方法：在糖化蛋白质测定试剂中，使蛋白酶含有试剂中共存有过氧化氢酶而消除试剂中的过氧化物，由此抑制试剂空白。专利文献12中记载了，可以通过在包含亚铁氰化物以及Trinder
’
s试剂等供氢体的试剂中混配两性表面活性剂来抑制试剂空白。
[0006]现有技术文献
[0007]专利文献
[0008]专利文献1：日本特开平6
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46846号公报
[0009]专利文献2：日本特开平5
‑
192193号公报
[0010]专利文献3：国际公开第96/34977号
[0011]专利文献4：日本特开平2
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195900号公报
[0012]专利文献5：国际公开第1997/13872号
[0013]专利文献6：国际公开第2002/061119号
[0014]专利文献7：国际公开第1996/041859号
[0015]专利文献8：国际公开第1995/028092号
[0016]专利文献9：国际公开第98/13462号
[0017]专利文献10：国际公开第98/13459号
[0018]专利文献11：日本特开2004
‑
49063号公报
[0019]专利文献12：日本特开2006
‑
10711号公报

技术实现思路

[0020]专利技术所要解决的课题
[0021]如上所述，提出了各种试剂空白抑制方法的提案，但尚未公开在包含Trinder
’
s试剂、4
‑
氨基安替比林、蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物的糖化蛋白质测定试剂中充分抑制试剂空白的方法。因此，本专利技术的课题的一部分在于提供抑制了试剂空白的糖化蛋白质测定试剂、糖化蛋白质的测定方法、糖化蛋白质测定试剂的保存方法以及糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法。
[0022]用于解决课题的手段
[0023]根据本专利技术人的认知，在为了防止由胆红素等还原性物质所带来的测定误差而在糖化蛋白质测定试剂中包含亚铁氰化物时，试剂中的亚铁氰化物在保存中会被氧化成铁氰化物，可能成为试剂空白的原因。本专利技术人针对此进行了深入研究，结果发现，在包含Trinder
’
s试剂、4
‑
氨基安替比林、蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物的试剂中，通过使用将蛋白酶的稳定剂与亚铁氰化物混合后使亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的蛋白酶的稳定剂，能够显著抑制试剂空白，从而完成了本专利技术。
[0024][1]一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder
’
s试剂、4
‑
氨基安替比林、蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，其中，
[0025]至少上述Trinder
’
s试剂包含在含有Trinder
’
s试剂的部分组合物中，
[0026]至少上述4
‑
氨基安替比林包含在含有4
‑
氨基安替比林的部分组合物中，
[0027]上述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
[0028]上述氧化还原电位是包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
[0029][2]如[1]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物和上述含有4
‑
氨基安替比林的部分组合物中的至少一者进一步包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[0030][3]如[2]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder
’
s试剂的部分组
合物进一步包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[0031][4]如[1]至[3]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4
‑
氨基安替比林的部分组合物进一步包含糖化氨基酸氧化酶。
[0032][5]如[1]至本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder
’
s试剂、4
‑
氨基安替比林、蛋白酶、所述蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，其中，至少所述Trinder
’
s试剂包含在含有Trinder
’
s试剂的部分组合物中，至少所述4
‑
氨基安替比林包含在含有4
‑
氨基安替比林的部分组合物中，所述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，所述氧化还原电位是包含所述蛋白酶的稳定剂和所述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。2.如权利要求1所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物和所述含有4
‑
氨基安替比林的部分组合物中的任一者进一步包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂。3.如权利要求2所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物进一步包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂。4.如权利要求1～3中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4
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氨基安替比林的部分组合物进一步包含糖化氨基酸氧化酶。5.如权利要求2所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4
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氨基安替比林的部分组合物进一步包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂。6.如权利要求1～3和5中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物进一步包含糖化氨基酸氧化酶。7.如权利要求1～6中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物和所述含有4
‑
氨基安替比林的部分组合物中的至少一者包含所述亚铁氰化物。8.如权利要求1所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物和所述含有4
‑
氨基安替比林的部分组合物中的任一者进一步包含所述蛋白酶、所述蛋白酶的稳定剂和所述亚铁氰化物。9.如权利要求1所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4
‑
氨基安替比林的部分组合物进一步包含所述蛋白酶、所述蛋白酶的稳定剂以及所述亚铁氰化物。10.如权利要求1～9中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述蛋白酶的稳定剂的浓度为使所述蛋白酶的稳定剂与所述亚铁氰化物混合后的所述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。11.一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder
’
s试剂、4
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氨基安替比林、蛋白酶、所述蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，其中，至少所述Trinder
’
s试剂包含在含有Trinder
’
s试剂的部分组合物中，至少所述4
‑
氨基安替比林包含在含有4
‑
氨基安替比林的部分组合物中，至少所述亚铁氰化物包含在含有亚铁氰化物的部分组合物中，所述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的蛋白酶的稳定剂，所述氧化还原电位是包含所述蛋白酶的稳定剂和所述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
12.如权利要求11所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物、所述含有4
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氨基安替比林的部分组合物以及所述含有亚铁氰化物的部分组合物中的任一者进一步包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂。13.如权利要求12所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物进一步包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂。14.如权利要求11至13中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4
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氨基安替比林的部分组合物进一步包含糖化氨基酸氧化酶。15.如权利要求12所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4
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氨基安替比林的部分组合物进一步包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂。16.如权利要求11至13和15中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物进一步包含糖化氨基酸氧化酶。17.如权利要求12所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有亚铁氰化物的部分组合物进一步包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂。18.如权利要求11至17中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述蛋白酶的稳定剂的浓度为使所述蛋白酶的稳定剂与所述亚铁氰化物混合后的所述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。19.如权利要求11、12以及15中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4
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氨基安替比林的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述含有4
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氨基安替比林的部分组合物与所述含有亚铁氰化物的部分组合物混合后的所述蛋白酶的稳定剂的浓度为使所述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。20.如权利要求11至14中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物与所述含有亚铁氰化物的部分组合物混合后的所述蛋白酶的稳定剂的浓度为使所述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。21.如权利要求11、12以及17中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有亚铁氰化物的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述含有亚铁氰化物的部分组合物中的所述蛋白酶的稳定剂的浓度为使所述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。22.如权利要求1～21中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述氧化还原电位大于0.058V且为0.400V以下。23.如权利要求1～22中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述蛋白酶的稳定剂选自由1,2
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丙二醇、三亚甲基二醇、乙二醇和羧基苯基硼酸组成的组。24.如权利要求1～16、19和20中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4
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氨基安替比林的部分组合物或所述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述蛋白酶的稳定剂为1,2
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丙二醇，所述含有4
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氨基安替比林的部分组合物或所述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物中的所述1,2
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丙二醇的浓度为7.5wt/vоl％以上80wt/vol％以下。25.如权利要求11、12、17和21中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有亚铁氰化物的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述蛋白酶的稳定剂为1,2
‑
丙二醇，所述含有亚铁氰化物的部分组合物中的所述1,2
‑
丙二醇的浓度为7.5wt/vоl％以上80wt/
vol％以下。26.如权利要求1～16、19和20中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4
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氨基安替比林的部分组合物或所述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述蛋白酶的稳定剂为三亚甲基二醇，所述含有4
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氨基安替比林的部分组合物或所述含有Trinder
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s试剂的部分组合物中的所述三亚甲基二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。27.如权利要求11、12、17和21中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有亚铁氰化物的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述蛋白酶的稳定剂为三亚甲基二醇，所述含有亚铁氰化物的部分组合物中的所述三亚甲基二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。28.如权利要求1～16、19和20中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4
‑
氨基安替比林的部分组合物或所述含有Trinder
’
s试剂的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述蛋白酶的稳定剂为乙二醇，所述含有4
‑
氨基安替比林的部分组合物或所述含有Trinder
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【专利技术属性】
技术研发人员：本庄晓子，植田祐生，今野翔太，
申请(专利权)人：旭化成制药株式会社，
类型：发明
国别省市：