单克隆抗体保存液制造技术

本申请涉及抗体试剂领域，具体涉及单克隆抗体保存液，主体为缓冲溶液，在缓冲溶液中，包括如下的组分：糖类、甘油、氯化钠、防腐剂、葫芦脲、非离子表面活性剂、DMSO；其中，糖类为蔗糖、葡萄糖、海藻糖中的至少一种；所述缓冲溶液为磷酸缓冲溶液、HCl

【技术实现步骤摘要】
单克隆抗体保存液


[0001]本申请涉及抗体试剂领域，更具体地说，它涉及单克隆抗体保存液。

技术介绍

[0002]单克隆抗体是一种重要的生物医药物质，其在生物科学领域具有重要的运用，在检测、治疗等领域具有重要的意义。
[0003]在试剂盒检测中，需要对抗体进行标记并与抗原结合，进而测定抗原的浓度。一般情况下，单克隆抗体需要保存于保存液中，保存液一般保存于4℃或
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20℃下，前者适用于短期保存，后者可以长期保存。
[0004]在抗体完成制备后，常常需要对抗体进行分装等操作。由于在实际使用中，单次使用的抗体量较少，因此难免需要对
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20℃下保存的抗体溶解后再进行使用，使用完毕后又要将其冻回至
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20℃下。在该过程中，抗体本身会有明显的损失。

技术实现思路

[0005]为了减少单克隆抗体保存时的因反复冻融造成的损失，本申请提供单克隆抗体保存液。
[0006]本申请中，提供了单克隆抗体保存液，主体为缓冲溶液，在缓冲溶液中，包括如下浓度的组分：其中，糖类为蔗糖、葡萄糖、海藻糖中的至少一种；所述缓冲溶液为磷酸缓冲溶液、HCl
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Tris缓冲溶液或Hepes缓冲溶液中的一种，所述缓冲溶液的pH值为6.8～7.4。
[0007]在上述单克隆抗体保存液中，首先糖类物质和甘油可以起到降低凝固点的效果，使得整体在冻融过程中，冰点较低，在更低的温度才会产生结冰现象。同时，由于甘油的加入量并不多，因此在
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20℃时，已经可以形成结冰的状态，且在上述过程中，体系内不易形成大量细小冰晶，整体热量传递过程均匀稳定，不易对抗体本身产生影响。
[0008]葫芦脲是一种新型化合物，其本体具有若干首尾相连苷脲单元，整体成环后，可以对抗体中的N端进行保护，减少保存液在结冰的过程中，抗体结构的损伤。且相较于其他包覆组分(如环糊精等)，葫芦脲结构与抗体之间的结合能力较弱，在抗体实际使用时，不需要
进行其他分离过程，抗体即可与抗原较好地结合，进而完成检测过程。
[0009]非离子表面活性剂对于上述组分，具有较好的稳定作用，可以减少物料的聚沉，提高体系的均匀度。氯化钠除了提供必要的渗透压之外，还可以形成一定的离子强度，减少抗体之间的聚沉，使抗体更加稳定。且在上述组分中，葫芦脲的水溶性较差，因此加入DMSO和非离子表面活性剂对葫芦脲进行增容后，可以使葫芦脲较为均匀地分散于体系中。此外，上述技术方案中选用糖类物质和甘油共同使用，目的也在于使糖类物质分散于保存液中之后，可以更好地对葫芦脲进行分散，葡萄糖、蔗糖、海藻糖等小分子糖类物质生物相容性较好，且增溶效果较佳，在上述方案中，可以进一步可选的，所述缓冲溶液中还包括浓度为6～10mg/mL的明胶。
[0010]通过添加一定量的明胶，可以使保存液内形成一定的有机框架结构，在保存液结冰的过程中，可以对抗体进行较好的保护效果，进一步减少抗体因反复冻融造成的损失。
[0011]可选的，所述缓冲溶液中，还包括浓度为0.2～0.4mg/mL的低聚果糖。
[0012]在上述技术方案中，通过加入低聚果糖，一方面具有更好的稳定性，减少抗体体系和葫芦脲的沉聚沉同时，起到一定的替代抗生素的作用，减少细菌病毒感染的可能习惯。同时，低聚果糖可以通过果糖的结构，强化葫芦脲对抗体的保护效果。
[0013]可选的，所述低聚果糖为蔗果三糖。
[0014]经过实验，蔗果三糖在体系中与抗体的相容性较好，对抗体后续实验的影响较小，且对于抗冻融的效果有一定的提升。更高聚合度的蔗果四糖和蔗果五塘效果均弱于蔗果三糖。
[0015]可选的，所述非离子表面活性剂为鼠李糖脂和脂肪醇聚氧乙烯醚的组合，鼠李糖脂和脂肪醇聚氧乙烯醚的质量比为1∶2～1∶3。
[0016]采用鼠李糖脂和脂肪醇聚氧乙烯醚的组合作为乳化剂，稳定性和耐冻融性均较好。其中，脂肪醇聚氧乙烯醚主要通过脂肪长链和一端的羟基产生乳化效果，其分子链具有较好的柔性，在冻结的过程中，有助于进一步减少因分子结构变化产生的变质现象。而鼠李糖脂一端为糖基，另一端为长脂肪双链，该结构同样具有较好的柔性。这两种柔性的分子可以对葫芦脲和抗体之间的结构起到更好的包覆和保护作用，减少冻融过程中的抗体损坏。
[0017]可选的，所述缓冲溶液中，还包括浓度为0.2～0.3mg/mL的超氧化物歧化酶。
[0018]超氧化物歧化酶可以减少体系中氧化反应的发生，延长保存液的保存时间。
[0019]可选的，所述缓冲溶液的浓度为30～50mmol/L。
[0020]上述浓度范围的缓冲溶液具有较好的耐冻融性，且对于抗体的相容性较好。
[0021]可选的，所述防腐剂为叠氮化钠或硫柳汞中的一种。
[0022]叠氮化钠和硫柳汞均具有较好的抗菌效果，作为防腐剂可以大幅延长抗体的保存时间。
[0023]可选的，所述葫芦脲为葫芦[6]脲。
[0024]选用葫芦[6]脲，其对于抗体的保护效果较好，且价格较为便宜，目前葫芦[6]脲已经有较为成熟稳定的合成方法，适用性较好。
[0025]综上所述，本申请包括如下至少一种有益效果：1、在本申请中，通过添加葫芦脲，并加入糖类物质和DMSO进行增容，使葫芦脲可以对抗体起到一定的保护作用，减少抗体在该保存液中时反复冻融造成的抗体损坏。
[0026]2、在本申请进一步设置中，通过添加明胶，形成的有机骨架可以对抗体进行保护，进一步减少因反复冻融造成的损失。
[0027]3、在本申请进一步设置中，通过添加低聚果糖，提高稳定性的同时，进一步强化葫芦脲对抗体的保护效果。
具体实施方式
[0028]在以下实施例中，通过配置不同的保存液，其中，对部分保存液，通过保存不同的抗体，并对抗体的效价测定，测定保存结果的有效性。
[0029]实施例1～5及对比例，一种单克隆抗体保存液，其组分如表1所示。表1、实施例1～5剂对比例1～15的组分配比
[0030]其中，糖类为蔗糖，防腐剂为叠氮化钠，葫芦脲为葫芦[6]脲，非离子表面活性剂为平平加o
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15(购买自海安石化)，缓冲溶液的体积为100mL。
[0031]单克隆抗体保存液的配置方法如下：先量取100mL事先配置好的缓冲溶液，再将其他组分加入到缓冲溶液中，一边加入一边保持搅拌，随后放置于4℃下备用。
[0032]将非离子表面活性剂替换为其他种类表面活性剂，具体如下。
[0033]对比例16，一种单克隆抗体保存液，与实施例2的区别在于，非离子表面活性剂等质量地替换为硬脂酸钠。
[0034]对比例17，一种单克隆抗体保存液，与实施例2的区别在于，非离子表面活性剂等质量地替换为十二烷基磺酸钠。
[0035]对比例18，一种单克隆抗体保存液，与实施例2的区别在于，非离子表面活性剂等
质量地替换为十二烷基二甲基苄基氯化铵。
[0036]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.单克隆抗体保存液，其特征在于，主体为缓冲溶液，在缓冲溶液中，包括如下浓度的组分：糖类
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10～30 mg/mL；甘油
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20～30 mg/mL；氯化钠
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8～10 mg/mL；防腐剂
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0.2～0.5mg/mL；葫芦脲
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0.2～0.5 mg/mL；非离子表面活性剂
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10～12mg/mL；DMSO
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5～10μL/mL；其中，糖类为蔗糖、葡萄糖、海藻糖中的至少一种；所述缓冲溶液为磷酸缓冲溶液、HCl
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Tris缓冲溶液或Hepes缓冲溶液中的一种，所述缓冲溶液的pH值为6.8～7.4。2.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑智彪，郑曙剑，
申请(专利权)人：杭州隆基生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：