基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒及制备方法和应用技术

本发明专利技术提出了一种基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒，包括：微球、捕获微球试剂和检测抗体试剂，所述捕获微球试剂至少含有抗C3、C4、C1q、C1INH、C3d、C5b

【技术实现步骤摘要】
基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒及制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及一种基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒及制备方法和应用。

技术介绍

[0002]流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点，是当代最先进的细胞定量分析技术之一。光源、液流通路、信号检测传输和数据的分析系统是流式细胞仪的主要组成部分。目前临床中运用流式细胞仪进行外周血白细胞、骨髓细胞以及肿瘤细胞等的检测是临床检测的重要组成部分。
[0003]因此，亟待研发一种基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的上述问题，本专利技术提出了一种基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒，便于携带，且具备检测速度快、精度高、准确性好等优点。
[0005]第一方面，本专利技术提出了基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒，包括：微球、捕获微球试剂和检测抗体试剂，所述捕获微球试剂至少含有抗C3、C4、C1q、C1INH、C3d、C5b
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9、Properdin和Factor B特异性抗体；所述检测抗体试剂至少包括SA
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PE。
[0006]本专利技术的所述基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒，便于携带，且具备检测速度快、精度高、准确性好等优点。
[0007]第二方面，本专利技术提出了所述的基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
[0008]S101：将微球预处理；
[0009]S102：将20
×
洗涤缓冲液调节至室温，待所述缓冲液中的盐溶解后，取1ml20
×
洗涤缓冲液加入到19ml去离子水中，得到稀释后的缓冲液；
[0010]S103：向基质添加物冻干粉中加入所述稀释后的缓冲液5mL，静置13min～18min后，涡旋使其溶解；
[0011]S104：制备校准品；
[0012]S105：将基质添加物、校准品和捕获微球试剂以1：1：1的比例混合，再加入与所述捕获微球试剂等量的检测抗体，在室温下孵育1.8h～2.2h，再加入与所述捕获微球试剂等量的SA
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PE，在室温下孵育0.4h～0.6h，再加入所述捕获微球试剂20倍量的1
×
缓冲液后涡旋3s～10s，取300g～500g离心3min～7min，根据流式细胞仪的样品需求，向每管中加入150uL～300uL所述稀释后的缓冲液，涡旋8s～12s后将其重悬，进行检测。
[0013]作为本专利技术的具体实施方式，所述步骤S104包括如下步骤：
[0014]将250uL所述稀释后的缓冲液加入校准品冻干粉玻璃瓶中，使瓶壁附着的冻干粉完全溶解，此溶液浓度为10000pg/mL，将其标记为C7，静置13min～17min；
[0015]准备六只EP管，分别标记为6、5、4、3、2、1，每只管中加入75uL所述稀释后的缓冲液，逐级4倍稀释，即取25uL C7溶液到EP管6中，轻轻吹打混匀30
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40次，得到C6校准品，浓度为2500pg/mL，重复上述步骤，按照进行4倍逐级稀释，分别稀释得到C5、C4、C3、C2、C1校准品。
[0016]作为本专利技术的具体实施方式，使用所述校准品前用移液枪吸取溶液冲洗瓶壁数次。
[0017]作为本专利技术的具体实施方式，在将所述冻干粉开瓶时，瓶盖缓慢旋至半开，从瓶盖侧面两个孔隙中分别加入所述稀释后的缓冲液。
[0018]作为本专利技术的具体实施方式，在所述步骤S101中，所述预处理包括如下步骤：将所述微球涡旋25s～35s后，用移液枪吹打25次～35次，然后再涡旋25s～35s。
[0019]作为本专利技术的具体实施方式，在所述步骤S105中，孵育时的转速为400r/min～500r/min。
[0020]第三方面，本专利技术提出了所述的基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒的应用。
[0021]所述的基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒的应用，其中，检测样本为血浆或血清。具体地，所述检测样本为非溶血、脂血、黄疸血样本。
[0022]作为本专利技术的具体实施方式，所述应用还包括如下步骤：
[0023]将静脉血样本用标准试管收集，室温自然凝固30min，之后1000g离心10分钟，取分离出的血清送检；和/或，静脉血样本用EDTA抗凝采血管收集，1000g离心10分钟，取分离出的血浆送检。
具体实施方式
[0024]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，但并不构成对本专利技术的任何限制。
[0025]实施例1
[0026]实施例1提出了一种基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒，其制备方法包括如下步骤：
[0027]一、实验操作步骤：
[0028]1、实验前期准备：
[0029]1.1仪器耗材准备：50ul、200ul、1ml的移液枪，1.5ml EP管，流式管，涡旋混匀器，孵育震荡器，离心机，流式细胞仪(APC和PE通道可用)，数据分析电脑(win7及以上64位系统)
[0030]1.2试剂准备：使用之前将所有的试剂自然恢复至室温待用。
[0031][0032]1.2.1微球准备：实验前先将微球涡旋30s，用移液枪轻轻吹打30次左右，使用时再涡旋30s。
[0033]1.2.2洗涤缓冲液配制：待20
×
洗涤缓冲液恢复至室温，待所有盐溶解，取1ml 10
×
洗涤缓冲液加入到19ml去离子水中。
[0034]1.2.3基质添加物的准备：缓慢将基质添加物冻干粉玻璃瓶旋至半开，将5ml实验缓冲液加入到玻璃瓶中，静置15min，涡旋使其充分溶解。(冻干粉开瓶时，为了防止粉末飞出，瓶盖缓慢旋至半开，用1ml移液枪从瓶盖侧面裂隙孔分次加入5ml实验缓冲液)
[0035]1.2.4校准品的准备：缓慢将校准品冻干粉玻璃瓶旋至半开，将250ul实验缓冲液加入玻璃瓶中，缓慢转动瓶子，使瓶壁附着的冻干粉完全溶解，此溶液浓度为10000pg/ml，将其标记为C7，静置15min，使用前用移液枪吸取溶液冲洗瓶壁数次。(备注：冻干粉开瓶时，为了防止粉末飞出，瓶盖缓慢旋至半开，从瓶盖侧面两个孔隙中分别加入125ul实验缓冲液)
[0036]准备六只EP管，分别标记为6、5、4、3、2、1，每只管中加入75ul实验缓冲液，逐级4倍稀释，即取25ul C7溶液到EP管6中，轻轻吹打混匀30
‑
40次，得到C6校准品，浓度为2500pg/ml。
[0037]同上述方法，按照进行4倍逐级稀释，分别稀释得到C5、C4、C3、C2、C1校准品。
[0038]1.3待测样本准备
[0039]1.3.1样本：血清或血浆
[0040]1.3.2采集：...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒，其特征在于，包括：微球、捕获微球试剂和检测抗体试剂，所述捕获微球试剂至少含有抗C3、C4、C1q、C1INH、C3d、C5b
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9、Properdin和Factor B特异性抗体；所述检测抗体试剂至少包括SA
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PE。2.权利要求1所述的基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S101：将微球预处理；S102：将20
×
洗涤缓冲液调节至室温，待所述缓冲液中的盐溶解后，取1ml20
×
洗涤缓冲液加入到19ml去离子水中，得到稀释后的缓冲液；S103：向基质添加物冻干粉中加入所述稀释后的缓冲液5mL，静置13min～18min后，涡旋使其溶解；S104：制备校准品；S105：将基质添加物、校准品和捕获微球试剂以1：1：1的比例混合，再加入与所述捕获微球试剂等量的检测抗体，在室温下孵育1.8h～2.2h，再加入与所述捕获微球试剂等量的SA
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PE，在室温下孵育0.4h～0.6h，再加入所述捕获微球试剂20倍量的1
×
缓冲液后涡旋3s～10s，取300g～500g离心3min～7min，根据流式细胞仪的样品需求，向每管中加入150uL～300uL所述稀释后的缓冲液，涡旋8s～12s后将其重悬，进行检测。3.根据权利要求2所述的基于流式细胞术用于补体检测的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤S104包括如下步骤：将250uL所述稀释后的缓冲液加入校准品冻干粉玻璃瓶中，使瓶壁附着的冻干粉完全溶解，此溶液浓度为10000pg/m...

【专利技术属性】
技术研发人员：温旭，
申请(专利权)人：河北博因生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：