产生促性腺激素的方法技术

一种宿主细胞，其特征在于其包含整合到其基因组中的编码hCG的α链的序列，和所述宿主产生重组hCG的用途。产生重组hCG的用途。产生重组hCG的用途。

【技术实现步骤摘要】
产生促性腺激素的方法
[0001]本申请是申请日为2016年4月22日、专利技术名称为“产生促性腺激素 的方法”的中国专利申请No.201680022637.8的分案申请。
[0002]本专利技术涉及用于治疗不育的促性腺激素。具体地，其涉及人绒毛膜促 性腺激素(human chorionic gonadotrophin，hCG)。
[0003]促性腺激素是一组异二聚体糖蛋白激素，其调节男性和女性中的性腺 功能。它们包括促卵泡激素(follicle stimulating hormone，FSH)，促黄体 激素(luteinising hormone，LH)和绒毛膜促性腺激素(chorionicgonadotrophin，CG)。
[0004]人绒毛膜促性腺激素(hCG)主要由妊娠过程中的人胎盘分泌，并且支 持黄体的维持。hCG包含92个氨基酸的α亚基(α链)(其也是其他糖蛋 白激素LH和FSH共有的)和hCG特有的145个氨基酸的β亚基(β链)， 所述β亚基指示激素特异性。每个亚基通过添加复杂的糖残基进行翻译 后修饰。α亚基包含在氨基酸52和78的2
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N
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连接的糖基化位点，β亚基 包含在氨基酸13和30的2
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N
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糖基化位点和在氨基酸121、127、132和 138的四个O
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连接的糖基化位点。
[0005]从妊娠妇女的尿提取的hCG[Choragon(Ferring)]已经在不育治疗中 使用多年。从尿提取的hCG的制备包括大量尿液的收集和处理。重组形 式的hCG，即Ovitrelle(Serono)也可用于不育治疗。该重组产物在中国仓 鼠卵巢(CHO)细胞中表达，并且具有与从人尿中产生的hCG不同的药 代动力学模式(pharmacokinetic profile)。
[0006]存在与hCG制剂相关的相当大的异质性，其涉及在存在的各种同种 型的量上的不同。单独的hCG同种型显示相同的氨基酸序列，但是在它 们翻译后修饰的程度上不同；特定的同种型特征为糖分枝结构的异质性以 及唾液酸(末端糖)结合量的不同，这两者都显示影响具体的同种型生物活 性。
[0007]重组hCG(“rhCG”)产品的糖基化反映在宿主细胞系中存在的糖基 转移酶范围。现有的rhCG产品Ovitrelle源自改造的中国仓鼠卵巢细胞 (CHO细胞)。在CHO来源的rhCG中的聚糖修饰范围比在源自尿液的天 然产物中发现的那些更有限。在CHO来源的rhCG中发现的减少的聚糖 异质性的例子包括缺少平分型葡糖胺和降低含量的核心岩藻糖基化和乙 酰基乳糖胺延伸。此外，CHO细胞仅能够使用α2,3连接加入唾液酸 (Kagawa等人，1988，Takeuchi等人，1988，Svensson等人，1990)。
[0008]迄今已经用于不育治疗的人尿hCG(即，从妊娠妇女的尿提取的 hCG)实际上是胎盘hCG；在(人)胎盘中产生然后在尿中排出的hCG。 该hCG从尿中提取，用作药物产品。Bousfield等人(Rev Endocr MetabDisord(2011)12:289
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302)阐述“尽管垂体促性腺激素具有α2,3
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和α2,6
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连 接的唾液酸二者，但是胎盘hCG和在中国仓鼠卵巢细胞中产生的重组促 性腺激素仅具有α2,3
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连接的唾液酸”。因此，人尿hCG(也在胎盘中产生) 仅包含α2,3
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唾液酸化(如同CHO细胞系来源的重组产物)。因此，已知 的包含hCG的药物组合物仅包含α2,3
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连接的唾液酸，而不包含α2,6
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连 接的唾液酸。
[0009]已经证明当与垂体、血清或绝经期后尿液FSH比较时，重组FSH制 剂(Organon)在具有低于4的等电点(pI)的FSH(被认为是酸性同种型)的量 上不同(Ulloa
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Aguirre等人
.1995)。与重组产物Gonal
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f(Serono)和Puregon (Organon)比较，在FSH尿制备物中的酸性同种型的量高得多(Andersen 等人.2004)。这必定反映在rFSH中更低摩尔含量的唾液酸，因为在FSH 中用硫酸盐修饰的带负电荷的聚糖的含量低。与天然FSH比较，更低的 唾液酸含量是两种商购FSH产品的特征，并且因此必定反映制备方法中 的限制(Bassett和Driebergen,2005)。已经关于来自多种来源的物质记载 了FSH的循环寿命。这些物质中的一些已经基于总分子电荷进行分离， 总分子电荷如通过它们的pI表征，其中更多的酸等同于更高的负电荷。 对于总分子电荷的主要贡献者是各FSH分子的总唾液酸含量。例如，rFSH (Organon)具有约8mol/mol的唾液酸含量，而尿来源的FSH具有更高的 唾液酸含量(de Leeuw等人.1996)。在大鼠中的相应血浆清除率是0.34和 0.14ml/min(Ulloa
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Aguirre等人.2003)。在另一个实例中，其中将重组FSH 样品分为高和低pI级分，高pI(更低唾液酸含量)级分的体内功效减少并 且其具有更短的血浆半衰期(D
’
Antonio等人.1999)。本申请人已经发现， 与FSH类似，已知的来源于CHO的重组hCG产物(例如，Ovitrelle)也 具有比尿hCG更低量的具有低于4的等电点(pI)的hCG(认为是酸性 同种型)，这也反映已知的rhCG产品比尿hCG更低的唾液酸含量。
[0010]申请人已经开发了人来源的重组hCG(即，在人细胞系中产生或表 达的重组hCG，例如，通过改造人细胞系产生)，其具有比CHO细胞系 来源的rhCG产物Ovitrelle更加酸性的模式，并且其具有更高的唾液酸含 量。该rhCG是国际专利申请号PCT/GB2010/001854(以WO 2011/042688 公开)的主题。具有α2,3和α2,6
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连接的唾液酸二者的混合物的重组hCG 通过改造人细胞系使其表达rhCG和α2,3唾液酸转移酶二者而制备。该表 达的产物是高度酸性的，具有例如19.1mol/mol的唾液酸含量[以唾液酸 摩尔数与蛋白摩尔数的比例表示]，并且携带α2,3
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和α2,6
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连接的唾液酸 二者的混合物；后者由内源性唾液酸转移酶活性提供。申请人的研究表明， 唾液酸连接的类型，α2,3
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或α2,6
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，可以具有对hCG的生物清除的巨大影 响。与CHO细胞系相反，人细胞系可以表达具有通过α2,3和α2,6连接 两者连接的唾液酸的重组hCG。
[0011]WO 2011/042688的细胞系良好地表达人来源的重组hCG。然而，该 细胞系也表达相对高水平的游离β链(游离β亚基)，并且需要纯化(以 从产物hCG中去除该游离的β链)。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.多核苷酸分子，其包含根据SEQ ID NO:1的核酸或等同物。2.多核苷酸分子，其由根据SEQ ID NO:1的核酸或通过将SEQ ID NO:1或编码hCG的α链的等同物整合到细胞的方法获得的多核苷酸组成。3.细胞，其特征在于由整合到其基因组中的编码hCG的α链的序列组成，该序列选自：根据SEQ ID NO:1的序列或等同物；并且其中所述细胞和细胞以ECACC no.96022940保藏。4.权利要求2或3的细胞，其特征在于它...

【专利技术属性】
技术研发人员：丹尼尔，
申请(专利权)人：辉凌公司，
类型：发明
国别省市：