基于单细胞测序理性设计的多能干细胞分化自然杀伤细胞的方法及CSF1R抑制剂的应用技术

本发明专利技术提供了基于单细胞测序理性设计的多能干细胞分化自然杀伤细胞的方法及CSF1R抑制剂的应用，涉及生物技术领域。发明专利技术人根据单细胞转录组数据打开了iPSC向NK分化过程中的“黑匣子”，提供了一种iPSC分化NK的理性设计方法，理性设计了小分子抑制剂在体外多能干细胞分化NK的过程中的应用。经研究发现CSF1R抑制剂处理能够通过抑制髓系细胞的分化提高NK的比例，缩短分化所需时间，因此CSF1R抑制剂能够用于促进体外多能干细胞分化制备自然杀伤细胞中。本发明专利技术提供了一种自然杀伤细胞的制备方法，该方法简单方便，能够稳定、快速的获得高纯度自然杀伤细胞。度自然杀伤细胞。度自然杀伤细胞。

【技术实现步骤摘要】
基于单细胞测序理性设计的多能干细胞分化自然杀伤细胞的方法及CSF1R抑制剂的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是基于单细胞测序技术绘制NK分化的高分辨细胞图谱，涉及CSF1R相关抑制剂在促进体外多能干细胞分化制备自然杀伤细胞中的应用。

技术介绍

[0002]NK细胞是一种具有杀伤肿瘤细胞功能的免疫细胞。工程化改造的表达CAR的NK细胞具有靶向杀伤表达某种抗原的肿瘤细胞的能力。由于比之CAR
‑
T细胞，CAR
‑
NK细胞具有更低的细胞因子风暴，因此未来具有良好的应用前景。通过iPSC(诱导多能干细胞)单克隆分化而来的NK细胞(自然杀伤细胞)能够得到高度同质化的产品，并且可以得到充足数量的细胞以至于可以形成类似现货的产品。因此iPSC分化的NK细胞是未来现货性免疫细胞产品的理想选择。然而，iPSC分化NK细胞面临一系列挑战，首先分化的系统不够稳定，第二，分化细胞的纯度尚未精准测量，第三，分化的时间过长。尤为重要的是，目前对于iPSC分化NK细胞过程中的“黑匣子”了解的十分有限，什么关键基因、关键转本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多能干细胞分化自然杀伤细胞的理性设计方法，其特征在于，包括以下步骤：在多能干细胞分化自然杀伤细胞过程中，对分化的细胞进行单细胞测序和生物信息学分析，找到分化过程中产生的除自然杀伤细胞以外的其他细胞亚群，并通过基因表达谱找到在自然杀伤细胞中不表达而在非自然杀伤细胞中表达的基因；确定该基因在多能干细胞分化自然杀伤细胞中的作用，若通过靶向抑制所述基因消除了表达该基因的细胞，则通过在多能干细胞分化自然杀伤细胞过程中添加所述基因的抑制剂促进自然杀伤细胞的分化；所述非自然杀伤细胞为在多能干细胞分化自然杀伤细胞过程中分化得到的除自然杀伤细胞以外的细胞；所述非自然杀伤细胞包括髓系嗜中性粒细胞前体、单核细胞、树突状细胞、肥大细胞或红系细胞中的至少一种。2.CSF1R抑制剂在促进体外多能干细胞分化制备自然杀伤细胞中的应用。3.一种自然杀伤细胞的制备方法，其特征在于，将多能干细胞诱导培养得到拟胚体，然后将拟胚体培养分化得到自然杀伤细胞；所述拟胚体培养分化过程中添加CSF1R抑制剂。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述CSF1R抑制剂包括BLZ945和/或PLX3397。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，将多能干细胞诱导培养得到拟胚体的步骤包括：将多能干细胞在第一培养基中进行第一次培养；所述第一培养基包括：基础培养基、Y27632 8～12μM、BMP4 16～24ng/mL、VEGF 16～24ng/mL和SCF 32～48ng/mL。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述第一培养基包括：基...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书八页附图三页，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：