用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条及其制备方法，所述检测试纸条包括所述试纸条包括底板、样品垫、结合垫、基膜和吸水纸，所述基膜覆盖于所述底板上，所述结合垫位于所述基膜的上样端，所述吸水纸位于所述基膜的吸附端，所述样品垫位于所述结合垫的上部；其中，所述结合垫上结合有胶体金标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体，所述基膜上分别设有检测线和质控线，所述检测线包被有抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG。本发明专利技术的非洲猪瘟病毒病原检测试纸条，可以快速、灵敏准确地检测样本，与PCR随机20份盲样符合率100％、操作简单、检测成本低，克服了国内检测非洲猪瘟病原主要依靠PCR检测的问题。主要依靠PCR检测的问题。主要依靠PCR检测的问题。

【技术实现步骤摘要】
用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条及其制备方法。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟病毒(Africa swine fevervirus，ASFV)是引起家猪和野猪发病的一种急性、和高传染性的疾病，ASFV可经过口和上呼吸道系统进入猪体，在鼻咽部或是扁桃体发生感染，病毒迅速蔓延到下颌淋巴结，通过淋巴和血液遍布全身。强毒感染时细胞变化很快，在呈现明显的刺激反应前，细胞都已死亡。弱毒感染时，刺激反应很容易观察到，细胞核变大，普遍发生有丝分裂。发病率通常在40％
‑
85％之间，死亡率因感染的毒株不同而有所差异。高致病性毒株死亡率可高达90
‑
100％；中等致病性毒株在成年动物的死亡率在20％
‑
40％之间，在幼年动物的死亡率在70％
‑
80％之间；低致病性毒株死亡率在10％
‑
30％之间。
[0003]世界动物卫生组织主要采用分子生物学方法检测非洲猪瘟病毒，主要是各种PCR的方法，包括荧光PCR、等温介导的PCR等。PCR的方法灵敏度高，特异性好，但是需要专门的PCR仪、专业的实验人员以及专门的实验室。很多时候会因为气溶胶的污染导致全部待测样品假阳性结果的出现。本专利技术的方法主要是指基于抗原抗体反应的胶体金方法，该法灵敏度仅次于PCR方法，对操作人员、操作环境和仪器设备都没有要求，特别适合于现场或基层使用。
[0004]综上所述，目前所采用检测方式，其检测的特异性差，灵敏度低，或者其存在着检测成本高，检测过程麻烦的缺陷，亟待研发一种新的胶体金检测试纸条。

技术实现思路

[0005]为此，本专利技术提供一种用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条及其制备方法。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]本专利技术实施例提供一种用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条，所述检测试纸条包括所述试纸条包括底板、样品垫、结合垫、基膜和吸水纸，所述基膜覆盖于所述底板上，所述结合垫位于所述基膜的上样端，所述吸水纸位于所述基膜的吸附端，所述样品垫位于所述结合垫的上部；
[0008]其中，所述结合垫上结合有胶体金标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体，所述基膜上分别设有检测线和质控线，所述检测线包被有抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG。
[0009]本专利技术的一个实施例中，所述抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体的杂交瘤细胞株ASFV8G10于2021年07月01日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021173，保藏地址为：中国武汉
‑
武汉大学。
[0010]本专利技术的一个实施例中，所述基膜采用硝酸纤维素薄膜。
[0011]本专利技术的一个实施例中，所述胶体金颗粒紫外扫描最大吸收峰为523nm。
[0012]本专利技术还提供一种制备所述的用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条的方法，其包括：所述方法包括：
[0013]将胶体金标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体包被到结合垫上；
[0014]在基膜的检测线上包被抗非洲猪瘟病毒蛋白p72的单克隆抗体，质控线上包被羊抗鼠IgG；
[0015]所述基膜覆盖于所述底板上，所述结合垫置于所述基膜的上样端，所述吸水纸置于所述基膜的吸附端，所述样品垫置于所述结合垫的上部，得到所述检测试纸条。
[0016]本专利技术的一个实施例中，所述结合垫的处理过程为：将结合垫在含有2％Triton X
‑
100、1％BSA、0.05％NaN3的pH7.4 0.02M PBS缓冲液中进行浸泡25
‑
35min后，烘干。
[0017]本专利技术的一个实施例中，所述样品垫的处理过程为：将样品垫浸泡于含有0.1％Triton X
‑
100、1％丙氨酸、0.05％NaN3的pH7.4 0.01M PBS缓冲液中5
‑
15min，烘干。
[0018]本专利技术的一个实施例中，所述检测线上抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体的包被浓度为0.5mg/mL。
[0019]本专利技术的一个实施例中，所述胶体金的制备方法为：
[0020]取99mL的超纯水装入250mL的圆底烧瓶，放入搅拌子，置于磁力搅拌器上，加入1％氯金酸溶液1mL，加热搅拌，待溶液沸腾后，加入1.6mL 1％柠檬酸三钠溶液，氯金酸溶液由灰色逐渐变为酒红色，颜色稳定后继续加热10min，待溶液冷却后，用微孔滤膜过滤，得到所述胶体金溶液。
[0021]本专利技术的一个实施例中，用0.l mol/L的K2CO3调节胶体金pH值为9.0，按照每1mL胶体金溶液加入6μg抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体，室温下120rpm摇30min；
[0022]加入10％牛血清白蛋白20μL，室温下120rpm摇30min，12000rpm离心20min，弃上清，用0.01MPBS溶解沉淀，即得到标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体。
[0023]本专利技术具有如下优点：
[0024]试验证明：本专利技术的非洲猪瘟病毒病原检测试纸条，可以快速、灵敏准确地检测样本，与PCR随机20份盲样符合率100％、操作简单、检测成本低，克服了国内检测非洲猪瘟病原主要依靠PCR检测的问题。
[0025]本专利技术的检测试纸条无需专业人员即可操作，尤其是适合养猪现场、基层等使用。针对猪全血的检测，避免了血清分离时因含有非洲猪瘟病毒的血液造成新的传染风险。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本专利技术的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
[0027]本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本专利技术可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本专利技术所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本专利技术所揭示的
技术实现思路
得能涵盖的范围内。
[0028]图1为本专利技术非洲猪瘟病毒杂交瘤细胞亚克隆生长趋势图；
[0029]图2为本专利技术非洲猪瘟病毒病原快速检测试纸条的结构示意图，其中，100
‑
样品垫、200
‑
结合垫、300
‑
基膜、310
‑
检测线；320
‑
质控线；400
‑
吸水纸、500
‑
底板。
[0030]图3为本专利技术非洲猪瘟病毒病原快速检测试纸条检测20份盲本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条，其特征在于，所述检测试纸条包括所述试纸条包括底板、样品垫、结合垫、基膜和吸水纸，所述基膜覆盖于所述底板上，所述结合垫位于所述基膜的上样端，所述吸水纸位于所述基膜的吸附端，所述样品垫位于所述结合垫的上部；其中，所述结合垫上结合有胶体金标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体，所述基膜上分别设有检测线和质控线，所述检测线包被有抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG。2.如权利要求1所述的用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条，其特征在于，所述抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体的杂交瘤细胞株ASFV8G10于2021年07月01日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021173，保藏地址为：中国武汉
‑
武汉大学。3.如权利要求1所述的用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条，其特征在于，所述基膜采用硝酸纤维素薄膜。4.如权利要求1所述的用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条，其特征在于，所述胶体金颗粒紫外扫描最大吸收峰为523nm。5.一种制备权利要求1所述的用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条的方法，其包括：所述方法包括：将胶体金标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体包被到结合垫上；在基膜的检测线上包被抗非洲猪瘟病毒蛋白p72的单克隆抗体，质控线上包被羊抗鼠IgG；所述基膜覆盖于所述底板上，所述结合垫置于所述基膜的上样端，所述吸水纸置于所述基膜的吸附端，所述样品垫置于所述结合垫的上部，得到所述检测试纸条。6.如权利要求5所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：于金枝，武玉香，刘捷，于智慧，谭静，沈志强，
申请(专利权)人：山东绿都生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：