检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原组合物、试剂盒及其应用制造技术

本申请公开了一种检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原组合物、试剂盒及其应用。所述抗原组合物包括第一抗原，所述第一抗原的氨基酸序列包括SEQ IDNo.3所示序列。所述抗原组合物还包括第二抗原，所述第二抗原的氨基酸序列包括SEQ ID No.2所示序列。所述抗原组合物还包括第三抗原，所述第三抗原的氨基酸序列包括SEQ ID No.1所示序列。以本发明专利技术的抗原组合物做为ELISA法的包被抗原，对临床样本血清型的检出率明显高于现有的进口试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原组合物、试剂盒及其应用
本专利技术属于动物传染病防治
，检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原组合物、试剂盒及其应用。
技术介绍
滑液囊支原体(别名：滑液支原体)感染最早报道于1954年，发病鸡群主要表现滑膜炎；滑液囊支原体的发病日龄一般在30日龄左右，病鸡出现羽毛蓬乱，精神沉郁，采食量下降，无法站立。有的鸡群在15日龄～20日龄也会发病，应该与母源抗体和垂直传播有关。滑液囊支原体的膜蛋白包含可变表面脂蛋白和血凝素蛋白，具有逃避宿主免疫应答的特性。血凝素蛋白是机体针对滑液囊支原体的主要免疫应答目标，但是滑液囊支原体每次感染过程中会在转录水平上对血凝素蛋白的表达进行调控，严重干扰了机体正常免疫应答效应的发挥，从而实现了免疫逃避。自2010年，南方的三黄鸡出现严重的滑液囊支原体感染后，北方的蛋鸡自2013年以来，也开始大规模出现滑液囊支原体的感染，成为困扰蛋鸡和种鸡的一个重要疾病。为了该病的防控，采取了较多的措施，包括鸡舍条件的改善、抗生素的使用及弱毒活疫苗的免疫等，但是都没有取得理想的效果。滑液囊支原体抗体的检测方法主要有玻片凝集法和ELISA法等，玻片凝集法相对简单，一般实验室都可以开展这项工作。但是，鸡毒支原体和滑液囊支原体存在一部分共同抗原，使用玻片凝集法时容易出现一定程度的干扰。ELISA检测方法目前有美国爱德士公司和以色列Biogal公司的产品。在实验室应用过程中，国内流行的菌株免疫的SPF鸡，以及国内发病鸡群的血清学调查过程中，使用进口的检测方法抗体阳性率低，不能有效开展疫苗的抗体评价。出现该问题的主要原因，可能是检测试剂盒的包被抗原成分单一，滑液囊支原体在感染免疫逃避过程中某些蛋白表达水平降低，造成目标蛋白的抗体弱，而导致现有商品化试剂盒在检测中出现假阴性的情况。
技术实现思路
针对现有技术中存在的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原组合物、试剂盒及其应用。本专利技术利用反向疫苗学技术，筛选滑液囊支原体独有的蛋白，并开展了蛋白的反应原性、反应特异性、有效组合对临床样本的检测试验，形成了一种用于检测滑液囊支原体抗体的有效抗原及组合，该抗原或抗原组合可以用于ELISA等抗体检测的试剂盒中，提高滑液囊支原体的检出率。一方面，本申请提供了一种用于特异性检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原组合物，包括第一抗原，所述第一抗原的氨基酸序列包括SEQIDNo.3所示序列、或与SEQIDNo.3所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上且功能与SEQIDNo.3所示序列相同或相近的序列。在上述抗原组合物中，还包括第二抗原，所述第二抗原的氨基酸序列包括SEQIDNo.2所示序列，或与SEQIDNo.2所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上且功能与SEQIDNo.2所示序列相同或相近的序列；优选的，所述第一抗原和所述第二抗原的质量比为1：(1-3)，更优选，1：(1.5-2.5)，更优选，1：2；和/或，所述抗原组合物还包括第三抗原，所述第三抗原的氨基酸序列包括SEQIDNo.1所示序列，或与SEQIDNo.1所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上且功能与SEQIDNo.1所示序列相同或相近的序列，优选的，所述抗原组合物中所述第一抗原和所述第三抗原的质量比为1：(6-16)，更优选，1：(9-13)，更优选，1：11。另一方面，本申请提供了一种用于特异性检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原，所述抗原为以上所述第一抗原、或权利要求2中所述第二抗原或所述第三抗原。另一方面，本申请提供了一种多核苷酸，其能够编码以上所述鸡滑液囊支原体抗体的抗原组合物或所述抗原。在上述多核苷酸中，编码所述第一抗原的多核苷酸序列包括SEQIDNo.6所示序列，或与SEQIDNo.6所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上的序列，或以上序列的互补序列，优选的，编码所述第二抗原的多核苷酸序列包括SEQIDNo.5所示序列，或与SEQIDNo.5所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上的序列，或以上序列的互补序列，编码所述第二抗原的多核苷酸序列包括SEQIDNo.4所示序列，或与SEQIDNo.4所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上的序列，或以上序列的互补序列。另一方面，本申请还提供了含有以上任一所述多核苷酸的表达盒、重组载体、重组菌或重组细胞。另一方面，本申请还保护以上任一所述抗原组合物、所述抗原、所述多核苷酸、或所述表达盒、重组载体、重组菌或重组细胞在制备鸡滑液囊支原体检测产品中的应用，优选的，所述鸡滑液囊支原体检测的方法为ELISA法，也可为其它方法如免疫胶体金法，优选的，所述鸡滑液囊支原体检测的靶标为鸡滑液囊支原体抗体，所述鸡滑液囊支原体抗体包括多克隆抗体或单克隆抗体，更优选的，所述多克隆抗体来自动物体液，更优选，所述多克隆抗体来自动物血液，更优选，血清。另一方面，本申请还提供了一种特异性检测鸡滑液囊支原体抗体的ELISA试剂盒，包括包被抗原，所述包被抗原为以上任一所述抗原组合物或所述第一抗原。在上述试剂盒中，当所述包被抗原为所述第一抗原时，所述第一抗原的包被浓度为0.5-3.5μg/ml，优选，1.5-2.5μg/ml，更优选，2.0μg/ml；当所述包被抗原包括所述第一抗原和所述第二抗原时，所述第一抗原的包被浓度为0.4-1.0μg/ml，优选，0.5-0.8μg/ml，更优选，0.6-0.7μg/ml，所述第二抗原的包被浓度为0.8-2.0μg/ml，优选，1.0-1.6μg/ml，更优选，1.3-1.4μg/ml，当所述包被抗原包括所述第一抗原和所述第三抗原时，所述第一抗原的包被浓度为0.5-1.2μg/ml，优选，0.6-1.0μg/ml，更优选，0.8-0.9μg/ml，所述第三抗原的包被浓度为5.5-13.2μg/ml，优选，6.6-11.0μg/ml，更优选，8.8-10.0μg/ml，当所述包被抗原包括所述第一抗原、所述第二抗原和所述第三抗原时，所述包被抗原中所述第一抗原的包被浓度为0.5-1.5μg/ml，优选，0.8-1.2μg/ml，更优选，1.0μg/ml，所述包被抗原中所述第二抗原的包被浓度为1.0-3.0μg/ml，优选，1.6-2.4μg/ml，更优选，2.0μg/ml，所述包被抗原中所述第三抗原的包被浓度为5.5-16.5μg/ml，优选，8.8-13.2μg/ml，更优选，11.0μg/ml。在上述试剂盒中，还包括用于固定所述包被抗原的固相载体(一般为聚苯乙烯、或聚氯乙烯材质，如试纸条中的PVC板或ELISA板的反应孔的内壁等)、和/或酶标二抗(所述二抗为葡萄球菌A本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于特异性检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原组合物，其特征在于，所述抗原组合物包括第一抗原，所述第一抗原的氨基酸序列包括SEQ ID No.3所示序列，或与SEQ IDNo.3所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上且功能与SEQ ID No.3所示序列相同或相近的序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于特异性检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原组合物，其特征在于，所述抗原组合物包括第一抗原，所述第一抗原的氨基酸序列包括SEQIDNo.3所示序列，或与SEQIDNo.3所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上且功能与SEQIDNo.3所示序列相同或相近的序列。


2.根据权利要求1所述的抗原组合物，其特征在于，所述抗原组合物还包括第二抗原，所述第二抗原的氨基酸序列包括SEQIDNo.2所示序列，或与SEQIDNo.2所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上且功能与SEQIDNo.2所示序列相同或相近的序列，优选的，所述抗原组合物中所述第一抗原和所述第二抗原的质量比为1：(1-3)，更优选，1：(1.5-2.5)，更优选，1：2；
和/或，所述抗原组合物还包括第三抗原，所述第三抗原的氨基酸序列包括SEQIDNo.1所示序列，或与SEQIDNo.1所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上且功能与SEQIDNo.1所示序列相同或相近的序列，
优选的，所述抗原组合物中所述第一抗原和所述第三抗原的质量比为1：(6-16)，更优选，1：(9-13)，更优选，1：11。


3.一种用于特异性检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原，其特征在于，所述抗原为权利要求1中所述第一抗原、或权利要求2中所述第二抗原或所述第三抗原。


4.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸能够编码权利要求1或2中所述抗原组合物或权利要求3所述抗原；
优选的，编码所述第一抗原的多核苷酸序列包括SEQIDNo.6所示序列，或与SEQIDNo.6所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上的序列，或以上序列的互补序列，
优选的，编码所述第二抗原的多核苷酸序列包括SEQIDNo.5所示序列，或与SEQIDNo.5所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上的序列，或以上序列的互补序列，
优选的，编码所述第三抗原的多核苷酸序列包括SEQIDNo.4所示序列，或与SEQIDNo.4所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上的序列，或以上序列的互补序列。


5.含有权利要求4所述多核苷酸的表达盒、重组载体、重组菌、或重组细胞。


6.权利要求1或2所述抗原组合物、权利要求3所述抗原、权利要求4所述多核苷酸、或权利要求5所述表达盒、重组载体、重组菌或重组细胞在制备鸡滑液囊支原体检测产品中的应用，
优选的，所述鸡滑液囊支原体检测的方法包括ELISA法，也可为其它方法如免疫胶体金法，
优选的，所述鸡滑液囊支原体检测的靶标...

【专利技术属性】
技术研发人员：李书光，沈志强，李峰，程立坤，苗立中，杨立芳，赵家磊，
申请(专利权)人：山东绿都生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37