新型OMNI-50CRISPR核酸酶制造技术

本发明专利技术提供了一种非天然存在的组合物，包括CRISPR核酸酶或核酸分子，所述CRISPR核酸酶包括与SEQ ID NO：3的氨基酸序列具有至少95％同一性的序列，所述核酸分子包括编码所述CRISPR核酸酶的序列。CRISPR核酸酶的序列。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型OMNI
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50 CRISPR核酸酶
[0001]本申请要求于2020年3月18日提交的美国临时申请号62/991,285、2020年1月10日提交的美国临时申请号62/959,672、2019年11月6日提交的美国临时申请号62/931,630、2019年9月9日提交的美国临时申请号62/897,806，以及2019年4月30日提交的美国临时申请号62/841,046的权益，以上申请的内容通过引用并入本文。
[0002]在本申请中引用了各种出版物，包括括号中引用的出版物。本申请中提及的所有出版物的公开内容在此通过引用整体并入本申请，以对本专利技术所属领域和本领域中可用于本专利技术的特征进行附加描述。
[0003]序列表引用
[0004]本申请通过引用纳入了存在于名为“20043091116
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A
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PCT_SequenceListing_AWG.txt”文件中的核苷酸序列，该文件的大小为186KB，并于2020年4月29日以操作系统与MS
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Windows兼容的IBM
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种非天然存在的组合物，包括CRISPR核酸酶或核酸分子，所述CRISPR核酸酶包括与SEQ ID NO：3的氨基酸序列具有至少95％同一性的序列，所述核酸分子包括编码所述CRISPR核酸酶的序列。2.根据权利要求1所述的组合物，还包括DNA
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靶向RNA分子或编码DNA
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靶向RNA分子的DNA多核苷酸，其中所述DNA
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靶向RNA分子包括与靶区中序列互补的核苷酸序列，其中所述DNA
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靶向RNA分子和所述CRISPR核酸酶不会天然地一起存在。3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述DNA
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靶向RNA分子包括crRNA重复序列，所述重复序列包括序列GUUUGAGAG。4.根据权利要求2或3中任一项所述的组合物，其中所述DNA
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靶向RNA分子包括tracrRNA序列，所述序列包括选自SEQ ID NO：41
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43和SEQ ID NO：149
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154的一个或多个序列。5.根据权利要求2
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4中任一项所述的组合物，其中所述DNA
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靶向RNA分子包括可与所述CRISPR核酸酶形成复合物的核苷酸序列。6.一种包括CRISPR相关系统的工程化的、非天然存在的组合物，所述CRISPR相关系统包括：一个或多个RNA分子或一种或多种核苷酸序列，所述一个或多个RNA分子包括与正向重复序列连接的向导序列部分，其中所述向导序列能够与靶序列杂交，所述一种或多种核苷酸序列编码所述一个或多个RNA分子；和CRISPR核酸酶或核酸分子，所述CRISPR核酸酶包括与SEQ ID NO：3的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述核酸分子包括编码所述CRISPR核酸酶的序列；并且其中所述一个或多个RNA分子与所述靶序列杂交，其中所述靶序列是原型间隔区邻近基序(PAM)的3
′
末端，并且所述一个或多个RNA分子与所述RNA
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引导核酸酶形成复合物。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的组合物，还包括RNA分子或DNA多核苷酸，所述RNA分子包括可与CRISPR核酸酶形成复合物的核苷酸序列(tracrRNA)，所述DNA多核苷酸包括编码可与所述CRISPR核酸酶形成复合物的RNA分子的序列。8.根据权利要求2
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7中任一项所述的组合物，还包括用于同源定向修复(HDR)的供体模板。9.根据权利要求2
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8中任一项所述的组合物，其中所述组合物能够编辑细胞基因组中的所述靶区。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的组合物，其中所述CRISPR核酸酶包括与SEQ ID NO：3的氨基酸序列具有至少95％同一性的序列，并且可与所述DNA
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靶向RNA分子中所述CRISPR核酸酶形成复合物的所述核苷酸序列包括选自SEQ ID NO：44
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52的序列。11.一种非天然存在的组合物，包括：CRISPR核酸酶或核酸分子，所述CRISPR核酸酶包括与SEQ ID NO：3的氨基酸序列具有至少95％同一性的序列，所述核酸分子包括编码所述CRISPR核酸酶的序列；和一个或多个RNA分子，或编码所述一个或多个RNA分子的一种或多种DNA多核苷酸，包括以下至少一种：(i)核酸酶
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结合RNA核苷酸序列，能够与所述CRISPR核酸酶相互作用/结合；和(ii)DNA
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靶向RNA核苷酸序列，包括与靶DNA序列中的序列互补的序列，
其中所述CRISPR核酸酶能够与所述一个或多个RNA分子复合以形成能够与所述靶DNA序列杂交的复合物。12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述CRISPR核酸酶和所述一个或多个RNA分子形成CRISPR复合物，所述CRISPR复合物能够结合所述靶DNA序列以实现所述靶DNA序列的切割。13.根据权利要求11或12中任一项所述的组合物，其中所述CRISPR核酸酶不与所述一个或多个RNA分子中的至少一个天然地一起存在。14.根据权利要求11
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13中任一项所述的组合物，其中：所述CRISPR核酸酶包括RNA结合部分和显示定点酶活性的活性部分；DNA
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靶向RNA核苷酸序列包括与靶DNA序列中的序列互补的核苷酸序列；和所述核酸酶
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结合RNA核苷酸序列包括与所述CRISPR核酸酶的所述RNA结合部分相互作用的序列。15.根据权利要求11
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14中任一项所述的组合物，其中所述核酸酶
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结合RNA核苷酸序列和所述DNA
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靶向RNA核苷酸序列在单个RNA分子(sgRNA)上，其中所述sgRNA分子可以与所述CRISPR核酸酶形成复合物并作为DNA靶向模块。16.根据权利要求15所述的非天然存在的组合物，其中所述sgRNA的长度最多为1000个碱基、900个碱基、800个碱基、700个碱基、600个碱基、500个碱基、400个碱基、300个碱基、200个碱基、100个碱基、50个碱基。17.根据权利要求1
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16中任一项所述的组合物，还包括用于同源定向修复(HDR)的供体模板。18.根据权利要求1
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17中任一项所述的组合物，其中所述CRISPR核酸酶与SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列具有至少95％同一性，或者其中包括编码所述CRISPR核酸酶的序列的所述核酸分子包括与SEQ ID NO：11
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13所示的核酸序列具有至少95％序列同一性的序列。19.根据权利要求18所述的组合物，其中所述组合物包括与SEQ ID NO：3具有至少95％同一性的CRISPR核酸酶和包括核酸酶
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结合RNA核苷酸序列的RNA分子，其中所述核苷酸结合RNA序列选自由SEQ ID NO：37
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45、87
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88、149
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154和GUUUGAGAG组成的组，并且适合与所述CRISPR核酸酶形成活性复合物。20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述CRISPR核酸酶使用选自NGG、NAG和NGA的PAM位点。21.根据权利要求1
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20中任一项所述的组合物，其中与野生型所述CRISPR核酸酶的氨基酸序列相比，所述CRISPR核酸酶包括至少1
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10、10
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20、20
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30、30
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40、40
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50、50
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60、60
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70、70
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80、80
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90、90
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100、100
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110、110
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120、120
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130、130
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140或140
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150个氨基酸取代、缺失和/或插入。22.根据权利要求21所述的组合物，其中与野生型所述CRISPR核酸酶相比，所述CRISPR核酸酶表现出至少2％、5％、7％、10％、15％、20％、25％、30％或35％增强特异性或增强活性，或与野生型所述CRISPR核酸酶相比，改变了PAM特异性。23.根据权利要求1
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22中任一项所述的组合物，其中所述CRISPR核酸酶是工程化的或非天然存在的。24.根据权利要求23所述的组合物，其中所述CRISPR核酸酶是工程化的并包括非天然
或合成氨基酸。25.根据权利要求23或24中任一项所述的组合物，其中所述CRISPR核酸酶是工程化的并包括核定位序列(NLS)、细胞穿透肽序列和/或亲和标签中的一种或多种。26.一种修饰无细胞系统或细胞基因组中靶位点处的核苷酸序列的方法，包括将权利要求1
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25任一项所述的组合物引入所述细胞。27.根据权利要求26所述的方法，其中所述细胞是真核细胞或原核细胞。28.一种修饰哺乳动物细胞基因组中靶位点处的核苷酸序列的方法，包括将以下引入所述细胞：(i)包括与SEQ ID NO：3的氨基酸序列具有至少95％同一性的CRISPR核酸酶的组合物或其中包括编码所述CRISPR核酸酶序列的所述核酸分子具有选自由SEQ ID NO：11
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13组成的组的至少95％核酸序列，和(ii)DNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：大卫，
申请(专利权)人：埃门多生物公司，
类型：发明
国别省市：