CRISPR-CAS9基因组编辑的供体设计策略制造技术

提供了用于使用异源多核苷酸的串联体改善植物细胞中双链断裂的同源定向修复的方法和组合物，这些串联体的侧翼是能够与指导RNA进行序列杂交的序列。在一些方面，该双链断裂由RNA指导的Cas内切核酸酶产生。该双链断裂的同源定向修复可包括并入异源多核苷酸，例如编码具有农艺学重要性的性状的基因。该双链断裂的同源定向修复可作为使用异源多核苷酸作为修复模板的模板定向修复的结果而发生。修复模板的模板定向修复的结果而发生。修复模板的模板定向修复的结果而发生。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CRISPR
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CAS9基因组编辑的供体设计策略
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年7月23日提交的美国临时专利申请序列号62/877,359的权益，其全部内容通过引用并入本文。
[0003]以电子方式递交的序列表的引用
[0004]该序列表的官方副本经由EFS
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Web作为ASCII格式的序列表以电子方式提交，文件名为7824WOPCT_SequenceListing_ST25.txt，创建于2020年7月13日且具有41,654字节大小，并与本说明书同时提交。包括在该ASCII格式的文件中的序列表是本说明书的一部分并且以其全文通过引用并入本文。


[0005]本披露涉及分子生物学领域，具体涉及用于修饰细胞基因组的组合物和方法。

技术介绍

[0006]重组DNA技术使得在靶基因组位置处插入DNA序列和/或修饰特定内源染色体序列成为可能。已经使用了采用位点特异性重组系统的位点特异性整合技术以及其他类型的重组技术来在各种生物体中产生目的基因的靶向插入本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种改变靶多核苷酸的方法，该方法包括：(a)向该靶多核苷酸提供：(i)Cas内切核酸酶，(ii)与该Cas内切核酸酶形成复合物以在该靶多核苷酸中产生双链断裂的指导RNA分子，以及(iii)多个序列单元，其中每个序列单元包含异源多核苷酸，其中每个序列单元的侧翼是一组第一侧翼序列，该组中的每个第一侧翼序列能够与(a)(ii)的指导RNA杂交；(b)用(a)(ii)的复合物切割(a)(iii)的多个序列单元，释放该异源多核苷酸；(c)与提供(a)(iii)的多个序列单元之前的该靶多核苷酸的序列相比鉴定该靶多核苷酸的序列的至少一个核苷酸插入、缺失、取代或修饰，或前述的任何组合。2.如权利要求1所述的方法，其中该异源多核苷酸是插入该双链断裂的供体DNA分子。3.如权利要求1所述的方法，其中该异源多核苷酸是引导该双链断裂的修复的模板DNA分子。4.如权利要求1所述的方法，其中每个异源多核苷酸的侧翼是一组第二侧翼序列，该组中的每个第二侧翼序列的长度是至少10个核苷酸并且与该靶多核苷酸附近的序列具有至少80％同一性，并且其中该组第二侧翼序列的侧翼是该组第一侧翼序列。5.如权利要求1所述的方法，其中在(a)(ii)中提供了多个不同的指导RNA分子，并且其中(a)(iii)的第一侧翼序列能够与该多个不同的指导RNA分子杂交。6.如权利要求1所述的方法，其中该靶多核苷酸位于细胞中。7.如权利要求6所述的方法，其中该细胞是植物细胞。8.如权利要求1所述的方法，其中该多个序列单元被稳定地整合到该植物细胞中。9.如权利要求1所述的方法，其中该指导RNA分子通过粒子轰击提供。10.如权利要求1所述的方法，其中该Cas内切核酸酶和指导RNA作为核糖核蛋白复合物提供。11.如权利要求1所述的方法，其中该靶多核苷酸的该双链断裂位点处的同源重组修复频率大于同一位点处的非同源末端连接修复率。12.一种改变植物表型性状的方法，该方法包括：(a)向植物细胞提供一组分子，...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：先锋国际良种公司，
类型：发明
国别省市：