用于调控酶表达和使酶表达自失活的组合物以及用于调节酶的脱靶活性的方法技术

本公开提供一种基因编辑核酸酶表达盒，其包括核酸序列，所述核酸序列包括可操作地连接到调控序列的核酸酶编码序列，所述调控序列在递送到具有所述核酸酶所靶向的序列的宿主细胞后引导所述核酸酶的表达，以及至少一个核酸酶调节序列，其选自所述核酸酶的靶序列或由所述核酸酶在其表达后识别的突变靶序列。提供一种载体，其包括所述基因编辑核酸酶表达盒。还提供含有所述载体的组合物和使用方法。提供含有所述载体的组合物和使用方法。提供含有所述载体的组合物和使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于调控酶表达和使酶表达自失活的组合物以及用于调节酶的脱靶活性的方法

技术介绍

[0001]已描述使用工程化核酸酶来编辑功能失常的基因。也描述了AAV介导的此类核酸酶的递送。然而，虽然AAV介导的核酸酶的递送避免对重复再施用的需求，但所得核酸酶在载体转导后持续在靶组织中表达，这可能诱导免疫反应和细胞毒性。
[0002]此外，试管内和活体内研究都已显示，无论递送媒剂如何，核酸酶在基因组的其它区域中产生插入缺失(indel)(插入和缺失)，从而表明脱靶活性。
[0003]需要用于基因编辑的改进组合物和方法。

技术实现思路

[0004]提供一种酶的递送系统，其提供脱靶活性的降低，因此提高了所递送酶的安全性。所述系统尤其较适用于基因编辑疗法和/或由基因在细胞中持续存在的系统递送的酶，如AAV介导的递送。
[0005]一方面，提供一种自调节基因编辑核酸酶表达盒。表达盒包括(a)核酸序列，其包括可操作地连接到调控序列的核酸酶编码序列，所述调控序列在递送到具有核酸酶所靶向的序列的宿主细胞后引导核酸酶的表达；和(b)至少一个核酸酶调节序列，其选自本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种自调节基因编辑核酸酶表达盒，其包括：(a)核酸序列，其包括可操作地连接到调控序列的核酸酶编码序列，所述调控序列在递送到具有所述核酸酶所靶向的序列的宿主细胞后引导所述核酸酶的表达；(b)至少一个核酸酶调节序列，其选自所述核酸酶的靶序列或在其表达后由所述核酸酶识别的突变靶序列。2.根据权利要求1所述的自调节核酸酶表达盒，其中(a)的所述核酸序列还包括肽降解信号的编码序列，所述肽降解信号与所述核酸酶编码序列同框以使得所述核酸酶
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肽降解信号表达为融合蛋白。3.根据权利要求1或2所述的自调节核酸酶表达盒，其中所述表达盒包括突变靶序列。4.根据权利要求1至3中任一项所述的自调节核酸酶表达盒，其中第一核酸酶调节序列位于所述核酸酶编码序列的上游。5.根据权利要求1至4中任一项所述的自调节核酸酶表达盒，其中核酸酶调节序列位于所述核酸酶编码序列的下游。6.根据权利要求1至4中任一项所述的自调节核酸酶表达盒，其中核酸酶调节序列位于所述核酸酶编码序列内。7.根据权利要求1至6中任一项所述的自调节核酸酶表达盒，其中所述表达盒包括至少两个核酸酶调节序列。8.根据权利要求1至6或权利要求7中任一项所述的自调节核酸酶表达盒，其中所述表达盒包括至少两个不同的核酸酶调节序列。9.根据权利要求8所述的自调节核酸酶表达盒，其中所述至少两个不同的核酸酶调节序列具有不同的突变靶序列。10.根据权利要求1至9中任一项所述的自调节核酸酶表达盒，其中每个核酸酶调节序列的长度独立地为10至40个核苷酸。11.根据权利要求1至9中任一项所述的自调节核酸酶表达盒，其中所述核酸酶是大范围核酸酶，且每个核酸酶调节序列的长度是约22个核苷酸。12.根据权利要求1至11中任一项所述的自调节核酸酶表达盒，其中所述蛋白质降解信号的长度是10个氨基酸至50个氨基酸。13.根据权利要求1至12中任一项所述的自调节核酸酶表达盒，其中所述表达盒包括超过一个蛋白质降解信号。14.一种药物组合物，其包括根据权利要求1至13中任一项所述的自调节核酸酶表达盒，以及载剂、悬浮剂和/或赋形剂中的一种或多种。15.根据权利要求14所述的药物组合物，其中所述表达在非病毒递送系统中。16.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述非病毒递送系统是脂质纳米颗粒。17.一种病毒载体，其包括根据权利要求1至13中任一项所述的自调节核酸酶表达盒。18.一种适用于基因编辑的重组AA...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚州大学信托人，
类型：发明
国别省市：