一种融合蛋白及其在碱基编辑中的用途制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别是涉及一种碱基编辑工具及其用途。本发明专利技术提供一种融合蛋白，所述融合蛋白可以是自N端至C端依次包括第一nCas9片段、嵌合插入片段、第二nCas9片段和两个UGI片段，所述嵌合插入片段选自APOBEC1片段或APOBEC3A片段，用于目标位点胞嘧啶脱氨作用；所述融合蛋白还可以是自N端至C端依次包括第一nCas9片段、嵌合插入片段和第二nCas9片段，所述嵌合插入片段选自TadA

【技术实现步骤摘要】
一种融合蛋白及其在碱基编辑中的用途
[0001]本专利技术是2020年3月10日提交的、申请号为2020101630583、专利技术名称为“一种碱基编辑工具及其用途”的母案申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种碱基编辑工具及其用途。

技术介绍

[0003]自2013年CRISPR/Cas9被发表于应用真核生物细胞中的基因编辑。此后，基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑技术得到了极大的发展。该系统仅由两个部分组成：负责定位靶位点序列的引导RNA(guide RNA，gRNA)和核酸内切酶Cas9蛋白。二者配合能够高效特异的靶向切割目的位点，造成DNA双链断裂(Double Strain Break,BSD)，从而允许人们利用细胞自身的非同源重组修复(Non
‑
homologous end joining,NHEJ)途径产生DNA片段的缺失或引起移码突变，从而造成基因的敲除。人们也可以利用细胞的同源重组修复(Homology directed repair,HDR)途径对靶位点进行精确本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，所述融合蛋白自N端至C端依次包括第一nCas9片段、嵌合插入片段、第二nCas9片段，所述嵌合插入片段为TadA
‑
TadA*；所述第一nCas9片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；和/或，所述第二nCas9片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述TadA
‑
TadA*为SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列编码的多肽。3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白还包括核定位信号片段。4.如权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述核定位信号片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。5.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白还包括柔性连接肽片段。6.如权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述柔性连接肽片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示。7.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由如SEQ ID NO.45所示的质粒表达。8.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为SEQ ID NO.45所示质粒472
‑
5811位的核苷酸序列编码的蛋白。9.一种分离的多核苷酸，编码如权利要求1～8任一权利要求所述的融合蛋白。10.一种构建体，所述构建体含有如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘亚京，黄师圣，黄行许，
申请(专利权)人：上海科技大学，
类型：发明
国别省市：