一种用于水产动物促生长和抗病的五倍子发酵方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种用于水产动物促生长和抗病的五倍子发酵方法及应用，包括菌种的活化和菌液制备、五倍子粉浆制备、发酵培养和发酵五倍子成品制备，以及养殖试验和攻毒试验，通过单因素试验和正交试验确定五倍子粉最佳发酵条件为pH为6、料水比为2.5％、时间24h、温度35℃。本发明专利技术公开的一种用于水产动物促生长和抗病的五倍子发酵方法，相对于发酵前，发酵后五倍子总氨基酸含量提高1倍以上，没食子酸含量提高1倍以上，并通过养殖试验确定饲料中添加0.5～2％发酵五倍子可以显著提高青虾的增重率、特定生长率，并且显著降低饲料系数，提高抗氧化活性；通过攻毒试验确定饲料中添加2％发酵五倍子可显著降低青虾病原菌感染死亡率。发酵五倍子可显著降低青虾病原菌感染死亡率。发酵五倍子可显著降低青虾病原菌感染死亡率。

【技术实现步骤摘要】
一种用于水产动物促生长和抗病的五倍子发酵方法及应用


[0001]本专利技术涉及一种五倍子的发酵方法，具体为一种用于水产动物促生长和抗病的五倍子发酵方法及应用，属于发酵


技术介绍

[0002]五倍子(Gallnut)，别名文蛤、百虫仓、木附子等，是某些蚜虫寄主在漆树科盐肤木属树木的叶上寄生形成的虫瘿。我国主要生产五倍子的区域为四川、贵州、云南、湖南、湖北、陕西，其中四川产量最高。五倍子具有抗氧化、抗菌的功能、其主要化学成分主要包括鞣质、没食子酸等。其中没食子酸是一种天然多酚类物质，具有很强的抗氧化作用、抗病毒作用、抑菌作用。有研究发现，利用微生物发酵过程中借助微生物产生的酶系，可以有效的降解发酵原料中的一些抗营养因子，提高发酵产物的适口性，产生维生素、有机酸等未知因子，增加发酵产物的营养价值，从而能有效的提高动物采食量，增强其免疫能力。并且发酵益生菌的代谢产物能够有效降解水体中的有机物，有效净化了养殖水体的生态环境。
[0003]五倍子作为天然中草药，具有纯天然、无毒且不易产生耐药性等优点，在水产养殖中主要用于防治水产动物疾病、增强机体免疫力、以及促生长。本专利技术使用有益菌株对五倍子进行发酵，旨在提高五倍子的营养价值，对开发新型水产饲料添加剂奠定基础。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供了一种用于水产动物促生长和抗病的五倍子发酵方法及应用，通过发酵提高五倍子的营养水平和有效成分。
[0005]本专利技术的第二个目的在于提供上述发酵五倍子粉作为饲料添加剂在水产饲料中的应用，将其添加到饲料中可显著提高动物生长性能，降低饵料系数和提高抗氧化机能。
[0006]本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的：一种用于水产动物促生长和抗病的五倍子发酵方法，包含如下步骤，
[0007]S1.菌种的活化和菌液制备
[0008]将解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA、植物乳杆菌FF34和丁酸梭菌JSIM
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MCB分别接种到LB固体培养基中，35℃培养24h，用接种环挑取LB固体培养基中已活化的单菌落接种到LB液体培养基中，35℃培养24h后测定菌液浓度，使用灭菌的PBS稀释菌液，制备活菌数为1
×
107CFU/mL的解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA、植物乳杆菌FF34和丁酸梭菌JSIM
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MCB菌悬液；
[0009]S2.五倍子粉浆制备
[0010]将五倍子粉碎后加入去离子水形成五倍子粉浆，将五倍子粉浆的pH调节为6～7并灭菌，待灭菌完成冷却至室温，待用；
[0011]S3.发酵培养
[0012]将步骤(2)中所得的淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA、植物乳杆菌FF34和丁酸梭菌JSIM
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MCB 3种菌悬液按2：1∶1的比例接入到发酵罐中，总接种量为2～4％，设置发酵罐转速为180r/min，发酵温度30～35℃，发酵时间24～36h，得到五倍子发酵液；
[0013]S4.发酵五倍子成品制备
[0014]将步骤(3)中五倍子发酵液干燥后进行超微粉碎，得到发酵五倍子粉，并检测发酵前与发酵后五倍子总氨基酸和没食子酸含量，结果显示，相对于发酵前，发酵后五倍子总氨基酸含量提高1倍以上，没食子酸含量提高1倍以上。
[0015]优选地，所述LB固体培养基组成包含蛋白胨10g/L、牛肉膏3g/L、NaCl 5g/L和琼脂15～20g/L，所述LB液体培养基组成包含蛋白胨10g/L、牛肉膏3g/L和NaCl 5g/L，所述LB固体培养基和LB液体培养基均以蒸馏水定容配置，pH7～7.2。
[0016]优选地，所述步骤S2中，将干燥的五倍子用多功能粉碎机粉碎后，经40～60目筛，获得五倍子粉，粉碎机型号为CWJZ
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30，购自广州旭朗机械设备有限公司。
[0017]优选地，所述步骤S2中按2.5％～5％料水比称量去离子水和五倍子粉，充分搅拌均匀，制备获得五倍子浆。
[0018]优选地，所述步骤S2分别采用1mol/L的盐酸溶液和1mol/L的氢氧化钠溶液调节五倍子浆液的pH为6～7，随后在121℃下高压灭菌30min。
[0019]优选地，所述解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA保藏号为CCTCCNO：M 2015602；植物乳杆菌FF34保藏号为CCTCC NO：M 20211221；丁酸梭菌JSIM
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MCB保藏号为CGMCC No.1647。
[0020]优选地，通过单因素试验和正交试验确定五倍子粉发酵的适宜料水比、pH、发酵时间和发酵温度，以单因素试验结果为基础，通过设计四因素三水平L9(34)正交实验确定最佳发酵条件为pH为6、料水比为2.5％、时间24h、温度35℃。
[0021]优选地，所述步骤S4中的干燥条件为在
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20℃～
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40℃条件下真空干燥。
[0022]一种用于水产动物促生长和抗病的五倍子发酵方法的应用。
[0023]本专利技术的有益效果：
[0024]1、本专利技术通过有益微生物发酵的方法，有效降低或消除五倍子粉中的抗营养因子，提高五倍子的营养价值；
[0025]2、本专利技术五倍子粉的发酵工艺优化后，具有发酵周期短，发酵条件易控制，操作简单等特点；
[0026]3、本专利技术提供了一种五倍子粉的发酵生产工艺方法，发酵后的五倍子中总氨基酸含量，没食子酸含量和蛋白质含量分别比发酵前提高了115.59％、147.16％和23.72％，此方法提供的发酵五倍子在青虾饲料中使用具有显著的促生长和提高免疫的功效；
[0027]4、饲料中添加0.5～2％发酵五倍子可以显著提高青虾的增重率、特定生长率，并且显著降低饲料系数，提高抗氧化活性，减少饲料投入成本，提高养殖经济效益；此外，饲料中添加2％发酵五倍子可显著降低青虾病原菌感染死亡率。因此，本专利技术所提供的发酵五倍子具有显著的促生长和抗病效果，在水产饲料中具有广阔的应用空间。
附图说明：
[0028]图1为本专利技术发酵料水比优化结果。
[0029]图2为本专利技术发酵时间优化结果。
[0030]图3为本专利技术发酵温度优化结果。
[0031]图4为本专利技术pH优化结果。
[0032]图5为本专利技术发酵五倍子投喂青虾霍乱弧菌攻毒后累计死亡率。
具体实施方式
[0033]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0034]如无特殊说明，本专利技术所采用试验方法均为常规方法，所用试验器材、材料、试剂等均可以商家途径获得。
[0035]本专利技术中所用到的菌株为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于水产动物促生长和抗病的五倍子发酵方法，其特征在于：包含如下步骤，S1.菌种的活化和菌液制备将解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA、植物乳杆菌FF34和丁酸梭菌JSIM
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MCB分别接种到LB固体培养基中，35℃培养24h，用接种环挑取LB固体培养基中已活化的单菌落接种到LB液体培养基中，35℃培养24h后测定菌液浓度，使用灭菌的PBS稀释菌液，制备活菌数为1
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107CFU/mL的解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA、植物乳杆菌FF34和丁酸梭菌JSIM
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MCB菌悬液；S2.五倍子粉浆制备将五倍子粉碎后加入去离子水形成五倍子粉浆，将五倍子粉浆的pH调节为6～7并灭菌，待灭菌完成冷却至室温，待用；S3.发酵培养将步骤(2)中所得的淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA、植物乳杆菌FF34和丁酸梭菌JSIM
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MCB 3种菌悬液按2∶1∶1的比例接入到发酵罐中，总接种量为2～4％，设置发酵罐转速为180r/min，发酵温度30～35℃，发酵时间24～36h，得到五倍子发酵液；S4.发酵五倍子成品制备将步骤(3)中五倍子发酵液干燥后进行超微粉碎，得到发酵五倍子粉，并检测发酵前与发酵后五倍子总氨基酸和没食子酸含量，结果显示，相对于发酵前，发酵后五倍子总氨基酸含量提高1倍以上，没食子酸含量提高1倍以上。2.根据权利要求1所述一种用于水产动物促生长和抗病的五倍子发酵方法，其特征在于：所述LB固体培养基组成包含蛋白胨10g/L、牛肉膏3g/L、NaCl 5g/L和琼脂15～20g/L，所述LB液体培养基组成包含蛋白胨10g/L、牛肉膏3g/L和NaCl 5g/L，所述LB固体培养基和LB液体培养基均以...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘波，孙存鑫，金燕，周群兰，缪凌鸿，林艳，戈贤平，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，
类型：发明
国别省市：