用于抑杀幽门螺杆菌的抗菌肽组合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种用于抑杀幽门螺杆菌的组合物，活性成分包含抗菌肽Nisin 0.2～50wt％、柠檬酸20～70wt％和胶原蛋白肽5～70wt％。本发明专利技术还提供了抗菌肽修饰物PEG

【技术实现步骤摘要】
用于抑杀幽门螺杆菌的抗菌肽组合物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体地涉及一种用于抑杀幽门螺杆菌的抗菌肽组合物及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)，自1983年澳大利亚Warren和Marshal首次发现以来，全球相关人员对其进行了大量的临床、实验室及流行病学等方面的研究或调查，1994年世界卫生组织国际癌症研究机构(WTO/IARC)将H.pylori定为I类致癌原。H.pylori感染所导致的相关疾病是长期慢性疾病，早期发现及根除H.pylori是减少和降低H.pylori感染相关疾病发病率的关键。
[0003]据流行病学调查表明，全球有一半以上的人感染H.pylori，并且儿童及成年期H.pylori的感染率在发展中国家远远高于发达国家。儿童是受H.pylori侵袭的最危险人群，儿童感染H.pylori将直接影响到成年期的健康状况。早期控制其感染率及提高其根除率已成为发展中国家公共卫生事业的严峻问题。据胃肠病组织(WGO)数据显示，H.pylori对临床使用的多种抗生素的耐药率均较高，对甲硝锉的耐药率为76％，克拉霉素的耐药率为27
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28％，阿莫西林的耐药率为3％。H.pylori的高耐药性导致了H.pylori的根除率在下降，为临床根除H.pylori增加了难度。
[0004]Nisin是由乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcu.lactis.subsp.lactis)分泌的一种具有抗菌活性的多肽，由34个氨基酸残基组成，分子量为3510，通常以二聚体形式存在。在天然状态下，Nisin有Nisin A和Nisin Z两种形式，后者的抑菌能力比前者强。研究认为，Nisin对细菌的营养细胞和孢子都有作用，它对于营养细胞的主要作用点是细胞质膜，抑制细胞壁中肽聚糖的生物合成，从而使细胞壁质膜和磷脂化合物合成受阻，造成细胞内物质外泄，引起细胞裂解。对芽孢的作用是在孢子出现膨胀的起始阶段抑制其发芽。Nisin在60多个国家得到广泛应用，主要作为乳制品、肉制品、罐藏食品以及饮料的天然防腐剂。与其他防腐剂相比，Nisin具有安全无毒、抗菌性强、水溶性好、热稳定性好等优点，但Nisin也存在抑菌谱较窄的弊端。细菌素在pH 6.0
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6.5的条件下能吸附在产生菌的细胞上，离心收集菌体，再在pH＝2条件下使细菌素从菌体上解离下来A.Guiotto和Y.Imura等曾尝试用5kDa PEG分别修饰抗菌肽nisin A和tachyplesin I(参考文献A.Guiotto，et al.，IlFarmaco 2003，58，45
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50和Y.Imura，et al.，Biochim.Biophys.Acta 2007，1768，1160
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1169)以优化其抗菌活性，但是结果显示抗菌肽经PEG修饰后活性急剧降低，甚至完全失去活性。如何使抗菌肽既能具有抗蛋白水解酶的降解作用，又能保留相当的抗菌活性是当前要解决的重要问题。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中幽门螺杆菌对于常规治疗药物呈现出较高耐药性的情况，以及抗菌肽活性优化的技术问题，本专利技术的目的是提供一种无耐药性且可显著抑制幽门螺杆菌，
甚至将病患体内的幽门螺杆菌根除的抗菌肽组合物。
[0006]本专利技术提供的抗菌肽组合物具体如下：
[0007]一种用于抑杀幽门螺杆菌的组合物，活性成分包含抗菌肽Nisin 0.2～50wt％、柠檬酸20～70wt％和胶原蛋白肽5～70wt％。
[0008]在根据本专利技术的一个实施方案中，所述抗菌肽Nisin为抗菌肽Nisin A或Z。
[0009]在根据本专利技术的一个实施方案中，所述抗菌肽Nisin为经PEG修饰的PEG
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Nisin，所述PEG选自PEG200、PEG400、PEG600、PEG800或PEG1000。
[0010]本专利技术还提供了上述的组合物在制备用于缓解或治疗幽门螺杆菌感染的药物或保健品中的应用。
[0011]本专利技术进一步提供了一种抗菌肽修饰物PEG
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Nisin的制备方法，包括：
[0012]1)将抗菌肽Nisin与二氯亚砜反应得到Nisin
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氯甲酰化合物；
[0013]2)将PGE的无水苯溶液滴加至所述Nisin
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氯甲酰化合物中，然后缓慢加入三乙胺，惰性氛围下加热回流反应至反应完全；
[0014]3)过滤后，浓缩滤液，以无水乙醚沉淀，即得抗菌肽修饰物PEG
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Nisin。
[0015]在根据本专利技术的一个实施方案中，以g:mL计，所述抗菌肽Nisin与二氯亚砜的用量比为1：3。
[0016]在根据本专利技术的一个实施方案中，以g:mL：mL计，所述PEG、Nisin
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氯甲酰化合物和三乙胺的用量比为20
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100：60：7。
[0017]本专利技术提供的用于抑杀幽门螺杆菌的抗菌肽组合物有以下有益效果：
[0018]1、使用本专利技术组合物制成的食品、保健品、药品等系列产品，可以抑杀95％以上的H.pylori，从而减少被H.pylori感染所致疾病的可能。
[0019]2、使用本专利技术组合物制成的食品、保健品、药品等系列产品，可以长效抑杀H.pylori，且不会产生耐药菌，同时为患者提供营养支持。
附图说明
[0020]图1为根据本专利技术的抗菌肽组合物的杀菌曲线图；
[0021]图2为胶原蛋白与抗菌肽共同作用于H.pyloris的抑菌实验结果示意图；
[0022]图3为抑菌环实验结果图，其中A为空白对照，B为施加了本专利技术的抗菌肽组合物；
[0023]图4为抑菌肽杀灭斑马鱼体内幽门螺旋杆菌实验结果图。
具体实施方式
[0024]以下结合实施例和附图用于进一步说明本申请，但并非用来限制本申请的范围。
[0025]下面将更详细地描述本申请的具体实施例。提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本申请，并且能够将本申请的范围完整的传达给本领域的技术人员。
[0026]如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本申请的较佳实施方式，然所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本申请的范围。本申请的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
[0027]如无特殊说明，本专利技术中所用到的试剂均可以商购途径购买得到。
[0028]实施例1 PEG2000
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Nisin的合成
[0029]1、Nisin－氯甲酰化合物的合成
[0030]取Nisin 3.0g，于50ml玻璃瓶中，加入精制的二氯亚砜9ml，在磁力搅拌下慢慢滴加，滴加完毕，70℃油浴，反本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于抑杀幽门螺杆菌的组合物，其特征在于，活性成分包含抗菌肽Nisin 0.2～50wt％、柠檬酸20～70wt％和胶原蛋白肽5～70wt％。2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述抗菌肽Nisin为抗菌肽Nisin A或Nisin Z。3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述抗菌肽Nisin为经PEG修饰的PEG
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Nisin，所述PEG选自PEG200、PEG400、PEG600、PEG800或PEG1000。4.如权利要求1
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3中任一项所述的组合物在制备用于缓解或治疗幽门螺杆菌感染的药物或保健品中的应用。5.一种抗菌肽修饰物PEG
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Nisin的制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：王天琪，张庆友，
申请(专利权)人：立康荣健北京生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：