一种特异性表达人源性SIRPG的转基因小鼠的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种特异性表达人源性SIRPG的转基因小鼠的构建方法，属于生物技术领域，所述方法为利用CRISPR

【技术实现步骤摘要】
一种特异性表达人源性SIRPG的转基因小鼠的构建方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种特异性表达人源性SIRPG的转基因小鼠的构建方法及其应用。

技术介绍

[0002]据统计，非小细胞肺癌(NSCLC)约占所有肺癌的85％。ⅢA期NSCLC的5年生存率约为14％，ⅢB期的5年生存率约为5％。然而，一旦NSCLC发展到Ⅳ期并转移到不同的地方，就很难治疗了。Ⅳ期NSCLC的5年生存率仅为1％。免疫治疗是晚期非小细胞肺癌患者可供选择的有效治疗方式之一，比如：抗PD1/PDL1的免疫治疗虽然能使部分肺癌患者从中获益，但仍有大部分患者不能从中获益。因此，寻找新的免疫检测点抑制剂可为患者提供更多的选择性。而为了寻找新的免疫检测点抑制剂，试验功能小鼠是研究中必不可少的。
[0003]SIRPG(也被称为SIRPgamma、SIRP
‑
beta2和CD172g)是一种具有细胞外免疫球蛋白样结构域的跨膜糖蛋白。它属于信号调节蛋白家族，由一组在人类染色体20p13上紧密定位的基因编码，还包括SIRPA、SIRP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性表达人源性SIRPG的转基因小鼠的构建方法，其特征在于，所述方法为利用CRISPR
‑
Cas9基因敲入技术插入外源基因hSIRPG，具体步骤为：根据小鼠插入位点序列，构建基于CRISPR
‑
Cas9系统的gRNA和Cas9表达载体，分别体外转录得到gRNA和Cas9 mRNA；并根据gRNA作用位点构建含有外源基因的且整合至宿主基因组中的供体质粒，然后将体外转录得到的Cas9 mRNA，gRNA和供体质粒显微注射到小鼠受精卵中；取注射后存活的受精卵移植到假孕雌鼠体内，待其怀孕产仔，获得转基因小鼠；其中，所述外源基因hSIRPG的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述gRNA的DNA序列为5
′‑
CTGAGCCAACAGTGGTAGTA
‑3′
。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述外源基因由CAG启动子驱动，在启动子和外源基因之间包含一段受Cre重组酶条件性控制的STOP序列。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述重组酶为Cre重组酶。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述STOP序列如SEQ ID NO:3所示。6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述外源基因hSIRPG和荧光报告基因之间通过P2A自切割肽段链接，所述P2A自切割肽段的核苷酸序列为：GGAAGCGGAGCTACTAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCTGGCGACGTGGAGGAGAACCCTGGTCCT。7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：许川，邬红，刘益强，蒋涛，白玲，苏春霞，卞修武，
申请(专利权)人：邬红刘益强蒋涛，
类型：发明
国别省市：