一种打靶载体、重组Huh7细胞系及构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种打靶载体、重组Huh7细胞系及构建方法和应用，属于基因工程技术领域；所述打靶载体包括基因MFSD2A，所述打靶载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术还提供了一种基于上述方案所述打靶载体CL

【技术实现步骤摘要】
一种打靶载体、重组Huh7细胞系及构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及一种打靶载体、重组Huh7细胞系及构建方法和应用。

技术介绍

[0002]MFSD2A(Major facilitator superfamily domain containing 2a，MFSD2A)，又称钠依赖性 LPC共转运因子1(Sodium-dependent LPC symporter1，NLS1)，是哺乳动物中主要促进因子超家族(Major facilitator superfamily，MFS)成员之一。
[0003]近年来，关于MFSD2A在肿瘤中的研究也越来越多。研究表明在非小细胞肺癌中MFSD2A 是一种新型的肿瘤抑制基因，其在抑制细胞周期和基质附着中起着重要的作用(Spinola etal.2010)。Shi等人通过免疫组织化学在170例胃癌和邻近正常组织的组织微阵列上检测 MFSD2A和CD34表达，还研究了MFSD2A与微血管密度和临床病理学特征的关系(Shi etal.2018)。发现胃癌组织中MFSD2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种打靶载体CL-YK2-001-A，所述打靶载体包括基因MFSD2A，所述打靶载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种基于权利要求1所述打靶载体CL-YK2-001-A构建重组Huh7细胞系的方法，包括以下步骤：将所述打靶载体CL-YK2-001-A和Cas9/sgRNA质粒转染Huh7细胞，得到重组Huh7细胞系；所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述sgRNA设计在MFSD2A的终止密码子处。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述转染的方法包括电转入。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述电转入的程序为：1400V，20ms，2pulse；所述电转入的体系为：1
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106个Huh7细胞电转5μg打靶载体和5μg Cas9/sgRNA质粒。6.根据权利要求2～5任意一项所述的方法，其特征在于，在所述转染后，还包括PCR扩增筛选阳性...

【专利技术属性】
技术研发人员：荣维淇，肖汀，冯林，程书钧，吴健雄，安松林，
申请(专利权)人：中国医学科学院肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：