一种重组状态人源MMP-7蛋白的表达方法及应用技术

本发明专利技术属于哺乳动物细胞重组蛋白表达技术领域，尤其涉及一种重组状态人源MMP

【技术实现步骤摘要】
一种重组状态人源MMP
‑
7蛋白的表达方法及应用


[0001]本专利技术属于哺乳动物细胞重组蛋白表达
，尤其涉及一种重组状态人源MMP
‑
7蛋白的表达方法及应用。

技术介绍

[0002]基质金属蛋白酶(MMPs)是主要分解细胞外基质成分的蛋白酶，其是一个大家族，各成员之间具有相似的结构及一定的底物特异性。基质溶解素(MMP
‑
7)作为MMPs家族成员之一，不仅参与细胞外基质(ECM)、基底膜(BM)降解及细胞表面非基质蛋白分子外功能区脱落，而且还参与肿瘤血管形成及肿瘤细胞凋亡等过程。MMP
‑
7与肺癌细胞的增殖、侵袭、转移、对抗癌化疗药物耐药性及不良预后有密切关系，有助于在肺癌预防、早期诊断及治疗等方面发挥重要作用。此外，基质溶解素(MMP
‑
7)还被确定为肺纤维化的介质和潜在的治疗靶点。
[0003]现有技术缺点：
[0004]通常情况下，该蛋白的表达仍以原核表达为主。但是，原核表达容易产生包涵体或者表达的可溶蛋白没有活性。哺乳动物细胞表达也会存在表达在细胞内不分泌的问题，或者蛋白的表达量较少，无法满足后续实验需求。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种重组状态人源MMP
‑
7蛋白的表达方法及应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。
[0006]本专利技术是这样实现的，一种重组状态人源MMP/>‑
7蛋白的表达质粒，包括能够依次编码信号肽和表达区域的DNA序列，所述信号肽和表达区域的氨基酸序列包括以下两种组合中的任一种：
[0007]a：如SEQ ID NO.3所示信号肽+SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中的第95
‑
267aa；
[0008]b：如SEQ ID NO.4所示信号肽+SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中的第95
‑
267aa；
[0009]所述DNA序列的C端添加humanFc
‑
C
‑
6His标签或mouseFc
‑
C
‑
6His标签；
[0010]所述mouseFc的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述humanFc的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
[0011]进一步地，编码SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中的第95
‑
267aa位的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。
[0012]进一步地，所述表达质粒包括能够编码如SEQ ID NO.4所示信号肽+SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中的第95
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267aa的DNA序列，所述DNA序列的C端添加humanFc
‑
C
‑
6His标签。
[0013]本专利技术还提供了一种重组状态人源MMP
‑
7蛋白的表达方法，包括：将如上述的重组状态人源MMP
‑
7蛋白的表达质粒构建至哺乳动物表达载体中，利用哺乳动物细胞真核系统表达目标蛋白。
[0014]进一步地，所述哺乳动物细胞包括HEK293F细胞或EXPI293F细胞。
[0015]进一步地，目标蛋白表达后，利用Ni纯化柱对带有His
‑
Tag标签的蛋白进行纯化。
[0016]进一步地，细胞转染时采用瞬时转染方式。
[0017]进一步地，转染过程中，细胞密度为2.6E6/mL。
[0018]本专利技术还提供了如述的重组状态人源MMP
‑
7蛋白的表达质粒或表达方法在制备重组状态人源MMP
‑
7蛋白中的应用。
[0019]综上所述，本专利技术的优点及积极效果为：
[0020]本专利技术中对人源MMP
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7重组蛋白设计了3个信号肽和3种标签的组合搭配，最终在信号肽B和humanFc
‑
C
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6His标签、信号肽B和mouseFc
‑
C
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6His标签的共同存在的条件下实现了蛋白的分泌表达。其中信号肽B和humanFc
‑
C
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6His标签组合搭配蛋白表达量更佳，经过WB验证及亲和纯化成功获取了MMP
‑
7重组蛋白，表达量约为24.53mg/1000mL Cells，后续可优化转染表达工艺从而实现更高的表达量。
附图说明
[0021]图1是跨膜结构域分析；
[0022]图2是翻译后修饰分析；
[0023]图3是三级结构预测；
[0024]图4是二级结构预测；
[0025]图5是PCR电泳图；
[0026]图6是细胞转染效果数据；
[0027]图7是WB电泳图；
[0028]图8是蛋白纯化效果图。
具体实施方式
[0029]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细说明，各实施例及试验例中所用的设备和试剂如无特殊说明，均可从商业途径得到。此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0030]根据本申请包含的信息，对于本领域技术人员来说可以轻而易举地对本专利技术的精确描述进行各种改变，而不会偏离所附权利要求的精神和范围。应该理解，本专利技术的范围不局限于所限定的过程、性质或组分，因为这些实施方案以及其他的描述仅仅是为了示意性说明本专利技术的特定方面。实际上，本领域或相关领域的技术人员明显能够对本专利技术实施方式作出的各种改变都涵盖在所附权利要求的范围内。
[0031]为了更好地理解本专利技术而不是限制本专利技术的范围，在本申请中所用的表示用量、百分比的所有数字、以及其他数值，在所有情况下都应理解为以词语“大约”所修饰。因此，除非特别说明，否则在说明书和所附权利要求书中所列出的数字参数都是近似值，其可能会根据试图获得的理想性质的不同而加以改变。各个数字参数至少应被看作是根据所报告的有效数字和通过常规的四舍五入方法而获得的。本专利技术中，“约”指给定值或范围的10％以内，优选为5％以内。
[0032]本专利技术下述各实施例中未特别限定温度时，则均为常温条件。常温是指四季中自然室温条件，不进行额外的冷却或加热处理，一般常温控制在10～30℃，最好是15～25℃。
[0033]本专利技术中涉及的基因、蛋白或其片段可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、植物)中产生。
[0034]本专利技术披露了一种重组状态人源MMP
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7蛋白的表达方法及应用。MMP
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7的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本专利技术中对蛋白可表达性、翻译后修饰、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组状态人源MMP
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7蛋白的表达质粒，其特征在于，包括能够依次编码信号肽和表达区域的DNA序列，所述信号肽和表达区域的氨基酸序列包括以下两种组合中的任一种：a：如SEQ ID NO.3所示信号肽+SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中的第95
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267aa；b：如SEQ ID NO.4所示信号肽+SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中的第95
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267aa；所述DNA序列的C端添加humanFc
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C
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6His标签或mouseFc
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C
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6His标签；所述mouseFc的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述humanFc的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。2.根据权利要求1所述的一种重组状态人源MMP
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7蛋白的表达质粒，其特征在于：编码SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中的第95
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267aa位的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。3.根据权利要求1所述的一种重组状态人源MMP
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7蛋白的表达质粒，其特征在于：所述表达质粒包括能够编码如SEQ ID NO.4所示信号肽+SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中的第95
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267aa的DNA序列，所述DNA序列的C端添加humanFc
‑
C
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【专利技术属性】
技术研发人员：余乐，程威，盛鑫龙，刘佩佩，
申请(专利权)人：武汉爱博泰克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：