用于定量样品中的多种蛋白质的方法技术

本发明专利技术涉及一种用于鉴定和定量样品中的多种蛋白质的分析方法。尽管本发明专利技术可以应用于许多蛋白质，但将特别提及生物活性蛋白质。特别地，但非排他地，本发明专利技术涉及用于鉴定和定量样品中的两种或更多种生物活性蛋白质的有效方法。样品通常源自乳，并且可以是源自乳的特定级分或包含上述物质的产品。定级分或包含上述物质的产品。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于定量样品中的多种蛋白质的方法


[0001]本专利技术涉及一种用于鉴定和定量样品中的多种蛋白质的分析方法。
[0002]尽管本专利技术可以应用于许多蛋白质，但将特别提及生物活性蛋白质。
[0003]特别地，但非排他地，本专利技术涉及用于鉴定和定量样品中的两种或更多种生物活性蛋白质的有效方法。样品通常源自乳，并且可以是源自乳的特定级分或包含上述物质的产品。

技术介绍

[0004]乳是包含蛋白质、脂质、矿物质和乳糖的营养丰富的产品。
[0005]来源于乳的加工乳制品诸如乳粉、乳蛋白质粉或乳清粉供人类消费的流行度和可用性在全球范围内不断增加。
[0006]乳制品了提供方便的营养来源。最近的研究已鉴定这些产品中的蛋白质组具有有益的生物活性特性，诸如乳铁蛋白、乳过氧化物酶和血管生成蛋白(核糖核酸酶)，它们可能具有针对细菌、酵母、真菌和/或病毒的活性。然而，这些蛋白质的存在因多种因素，诸如乳的来源、加工环境、配方或产品降解而在产品之间不同。
[0007]乳制品补充剂和保健食品部门缺乏鉴定和定量商业成品的生物活性特性的有效方法，其将为消费者和制造商提供一种有效的工具来区分市场上已有的众多产品。
[0008]在申请人的较早的申请
‑
WO 2017183996中，最近发现，在乳源产品中，特别是在阳离子级分中发现的某些蛋白质组合被发现提供治疗特性。特别地，与对存在于健康微生物组中的有益共生微生物的明显较低的抑制作用相比，发现这些组合对病原微生物的抑制具有惊人的选择性。<br/>[0009]然而，鉴定和定量样品中的两种或更多种有益生物活性蛋白质已被证明是困难且耗时的任务。
[0010]传统上，用于鉴定样品中的靶蛋白质的方法仅限于一次鉴定单个特定蛋白质。为了分析样品中的多种蛋白质，可能需要对同一样品进行多次测试。这样的方法不能方便地扩展到测试每天从乳中获得的大量乳源产品，这些产品可能因乳的来源、加工环境、配方或产品降解而截然不同。
[0011]本专利技术的目的是解决上述问题或至少为公众提供有用的选择。

技术实现思路

[0012]根据本专利技术的一个方面，提供了质谱法用于鉴定和定量乳源蛋白质样品中的两种或更多种蛋白质的片段的用途。
[0013]本专利技术人已经确定，质谱法提供了鉴定和定量乳蛋白质样品中两种或更多种蛋白质的肽片段的有效方法。特别感兴趣的蛋白质包括乳铁蛋白(LTF)、乳过氧化物酶(LPO)、溶酶体α甘露糖苷酶(LAM)、免疫球蛋白G(IgG)、核糖核酸酶(Rnase)和/或血管生成蛋白(Ang)；其一些或全部可能存在于乳蛋白质样品中。还应注意，这些蛋白质的亚类也可能存
在，诸如Rnase
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1、Rnase
‑
4、IgG
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1、Ig
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2等。
[0014]为了帮助鉴定和定量乳源样品中两种或更多种蛋白质的片段，专利技术人已经鉴定了每种感兴趣的靶蛋白质的独特的非重叠肽序列，这有助于能够有效鉴定和定量乳源样品中的蛋白质。然后将鉴定的序列用于鉴定每种感兴趣蛋白质的特异性独特肽片段(specific unique peptide fragment)，然后设计本专利技术的方法。
[0015]虽然已知这些蛋白质中的两种或更多种的组合可以提供治疗效果，但确定特定的乳蛋白质来源是否包含两种或更多种这些蛋白质和/或乳蛋白质来源中包括多少这些蛋白质是费时且困难的。
[0016]专利技术人花费了大量时间来鉴定特定感兴趣蛋白质内的特异性、独特的肽片段。特别地，重要的是不存在重叠序列，这会导致混淆单个蛋白质的量或存在和/或导致假阳性或不正确的结果。
[0017]专利技术人还设计了可以通过使用他们开发的专门消化过程从样品中提取那些特异性、独特的肽片段的方法。
[0018]专利技术人围绕提取特异性片段的努力的最终结果导致使用这些片段作为可以在乳源蛋白质样品或包含乳源蛋白质的样品中容易和快速鉴定和定量的感兴趣的蛋白质的指示物。
[0019]这些方法利用质谱法允许以高效且及时的方式分析大量不同的乳源蛋白质样品或包含乳源蛋白质的样品，以鉴定和定量感兴趣的肽片段，并从而鉴定和定量蛋白质本身。
[0020]反过来，本专利技术解决的问题是首先确定给定样品是否具有特定类型的乳蛋白质，以及其次确定该样品中所选择的蛋白质的生物活性的可能量值。
[0021]根据本专利技术的一个方面，提供了一种用于定量包含一种或多种乳蛋白质的样品中的两种或更多种蛋白质的方法，所述方法包括以下步骤：
[0022]提供包含一种或多种乳蛋白质的样品；
[0023]用消化酶处理所述样品以形成消化的肽片段；以及
[0024]通过质谱法分析所述消化的肽片段以定量所述样品中存在的两种或更多种蛋白质，
[0025]所述两种或更多种蛋白质选自：
[0026]i)乳铁蛋白(LTF)；
[0027]ii)乳过氧化物酶(LPO)；
[0028]iii)溶酶体α甘露糖苷酶(LAM)；
[0029]iv)免疫球蛋白G(IgG)；
[0030]v)核糖核酸酶(Rnase)；和/或
[0031]vi)血管生成蛋白(Ang)。
[0032]虽然本专利技术的方法可以用于定量包含乳蛋白质的样品中的两种或更多种蛋白质，但应当理解，该方法的效率特别适合于鉴定样品中的三种或更多种蛋白质，诸如样品中的四种或更多种蛋白质，例如样品中的五种或更多种蛋白质，或替代地例如样品中的六种或更多种蛋白质。据信，本专利技术的方法首次允许定量乳蛋白质样品中的蛋白质的量值，特别是以这样的有效的方式。
[0033]特别地，据信乳铁蛋白和/或乳过氧化物酶的存在是特别有益的并且为产品诸如
乳源产品提供独特的生物活性特性。
[0034]根据本专利技术的一个方面，提供了一种用于定量包含一种或多种乳蛋白质的样品中的乳铁蛋白(LTF)和一种或更多种额外的乳蛋白质的方法，所述方法包括以下步骤：
[0035]提供包含一种或多种乳蛋白质的样品；
[0036]用消化酶处理所述样品以形成消化的肽片段；以及
[0037]通过质谱法分析所述消化的肽片段以定量所述样品中存在的乳铁蛋白和一种或更多种额外的蛋白质，
[0038]其中所述一种或多种额外的蛋白质选自乳过氧化物酶(LPO)、溶酶体α甘露糖苷酶(LAM)、免疫球蛋白G(IgG)、核糖核酸酶(Rnase)和/或血管生成蛋白(Ang)。
[0039]根据本专利技术的一个方面，提供了一种用于定量包含一种或多种乳蛋白质的样品中的乳过氧化物酶(LPO)和一种或更多种额外的乳蛋白质的方法，所述方法包括以下步骤：
[0040]提供包含一种或多种乳蛋白质的样品；
[0041]用消化酶处理所述样品以形成消化的肽片段；以及
[0042]通过质谱法分析所述消化的肽片段以定量所述样品中存在的乳过氧化物酶和一种或更多种额外的蛋白质，
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.质谱法用于鉴定和定量乳蛋白质样品中的两种或更多种蛋白质的片段的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其中，两种或更多种蛋白质选自乳铁蛋白(LTF)、乳过氧化物酶(LPO)、溶酶体α甘露糖苷酶(LAM)、免疫球蛋白G(IgG)、核糖核酸酶(Rnase)和/或血管生成蛋白(Ang)。3.一种用于定量包含一种或多种乳蛋白质的样品中的两种或更多种蛋白质的方法，所述方法包括：提供包含乳蛋白质的样品；用消化酶处理所述样品以形成消化的肽片段；以及通过质谱法分析所述消化的肽片段以定量所述样品中存在的两种或更多种蛋白质。4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述两种或更多种蛋白质选自乳铁蛋白(LTF)、乳过氧化物酶(LPO)、溶酶体α甘露糖苷酶(LAM)、免疫球蛋白G(IgG)、核糖核酸酶(Rnase)和/或血管生成蛋白(Ang)。5.根据权利要求3或4所述的方法，其中，通过质谱法定量三种或更多种蛋白质。6.根据权利要求3或4所述的方法，其中，通过质谱法定量四种或更多种蛋白质。7.根据权利要求3或4所述的方法，其中，通过质谱法定量五种或更多种蛋白质。8.根据权利要求3或4所述的方法，其中，通过质谱法定量六种或更多种蛋白质。9.根据权利要求3至8中任一项所述的方法，其中，所述消化的片段的分析通过串联质谱法进行。10.根据权利要求3至9中任一项所述的方法，其中，至少一种定量的蛋白质选自乳铁蛋白或乳过氧化物酶。11.根据权利要求3至10中任一项所述的方法，其中，所述定量的蛋白质包括乳铁蛋白和乳过氧化物酶。12.根据权利要求3至11中任一项所述的方法，其中，一种或多种分析的肽片段选自：
13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述方法进一步包括分析选自以下的肽片段的子离子：
14.一种用于鉴定和确定包含一种或多种乳蛋白质的样品的生物活性特性的方法，所述方法包括：提供包含一种或多种乳蛋白质的样品；制备所述样品用于分析；以及通过使用质谱法定量两种或更多种生物活性蛋白质来分析所述样品。15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述定量两种或更多种蛋白质选自乳铁蛋白(LTF)、乳过氧化物酶(LPO)、溶酶体α甘露糖苷酶(LAM)、免疫球蛋白G(IgG)、核糖核酸酶(Rnase)和/或血管生成蛋白(Ang)。16.根据权利要求14或15所述的方法，其中，通过质谱法定量三种或更多种蛋白质。17.根据权利要求14或15所述的方法，其中，通过质谱法定量四种或更多种蛋白质。18.根据权利要求14或15所述的方法，其中，通过质谱法定量五种或更多种蛋白质。19.根据权利要求14或15所述的方法，其中，通过质谱法定量六种或更多种蛋白质。
20.根据权利要求14至19中任一项所述的方法，其中，定量所述两种或更多种蛋白质通过串联质谱法进行。21.根据权利要求14至20中任一项所述的方法，其中，所述定量的蛋白质中的至少一种选自乳铁蛋白或乳过氧化物酶。22.根据权利要求14至21中任一项所述的方法，其中，所述定量的蛋白质包括乳铁蛋白和乳过氧化物酶。23.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗德尼，
申请(专利权)人：昆泰克有限公司，
类型：发明
国别省市：