水苏碱新的应用制造技术

本发明专利技术涉及药物的新的应用技术领域，具体而言，涉及水苏碱新的应用。水苏碱在制备治疗骨缺损的药物中的应用。本发明专利技术实施例提供一种水苏碱的新的应用，其能够有效促进成骨细胞分化，继而促进骨再生，实现骨修复，继而能够实现骨缺损的治疗。骨缺损的治疗。骨缺损的治疗。

【技术实现步骤摘要】
水苏碱新的应用


[0001]本专利技术涉及药物的新的应用
，具体而言，涉及水苏碱新的应用。

技术介绍

[0002]由于创伤、肿瘤、感染及先天性异常造成的骨缺损是现在临床工作中所面临的常见问题，并且随着社会老龄化的进展，对于骨缺损治疗的需求也将增加。自体骨移植、同种异体骨移植是常用的骨缺损治疗方法，但都存在着现阶段难以克服的局限性。
[0003]现有骨缺损修复方案不能提供令人满意的修复效果，使得替代途径的开发成为研究热点。骨髓间充质干细胞来源广泛，获取相对简单，且具有良好的成骨潜力，近年来基于使用骨髓间充质干细胞来修复骨缺损的研究方兴未艾，然而如何充分激发骨髓间充质干细胞的成骨分化潜能仍然有待进一步的研究。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供水苏碱新的应用。本专利技术实施例提供一种水苏碱的新的应用，其能够有效促进骨髓间充质干细胞成骨分化，继而促进骨再生，实现骨修复，为骨缺损的治疗提供了一种潜在的新的治疗方法。
[0006]本专利技术是这样实现的：
[0007]第一方面，本专利技术提供一种水苏碱在制备治疗骨缺损的药物中的应用。
[0008]在可选的实施方式中，所述药物中所述水苏碱存在的形式是经过水苏碱培养的细胞被明胶类物质包埋。
[0009]在可选的实施方式中，所述明胶类物质包括甲基丙烯酰化明胶。
[0010]在可选的实施方式中，所述甲基丙烯酰化明胶为甲基丙烯酰化明胶
‑
60。
[0011]在可选的实施方式中，所述药物中所述水苏碱存在的形式是经过水苏碱培养的细胞被甲基丙烯酰化明胶
‑
60包埋。
[0012]在可选的实施方式中，被所述甲基丙烯酰化明胶
‑
60包埋的经过水苏碱培养的细胞按照下述方法制备：将甲基丙烯酰化明胶与光引发剂混合，然后将2者形成的混合物和经过水苏碱培养的细胞混匀后在光照射条件下进行交联固化；
[0013]优选地，被所述甲基丙烯酰化明胶
‑
60包埋的经过水苏碱培养的细胞按照下述方法制备：将所述甲基丙烯酰化明胶和所述光引发剂在溶液中混合形成混合溶液，而后再将经过水苏碱培养的细胞与所述混合溶液混匀，接着，在光照射条件下进行交联固化。
[0014]在可选的实施方式中，交联固化的条件：光源的激发波长为405nm，照射时间为15秒，所述混合溶液中甲基丙烯酰化明胶与光引发剂的质量体积比为5％，所述光引发剂为LAP溶解在1xPBS液体中形成的物质，2者的质量体积比为0.25％。
[0015]在可选的实施方式中，所述药物为促进骨髓间充质干细胞成骨分化的药物；
[0016]优选地，所述药物为促进骨再生的药物。
[0017]第二方面，本专利技术提供一种水苏碱在制备骨修复材料中的用途。
[0018]本专利技术具有以下有益效果：本专利技术实施例提供一种水苏碱新的应用，该水苏碱能够有效促进骨髓间充质干细胞成骨分化，继而促进骨再生，实现骨修复，继而能够实现骨缺损的治疗。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0020]图1为本专利技术实验例1提供的7d的ALP染色实验结果图；
[0021]图2为本专利技术实验例1提供的14d的ARS染色实验结果图；
[0022]图3为本专利技术实验例1提供的成骨基因的免疫荧光染色结果图；
[0023]图4为本专利技术实验例1提供的成骨标志蛋白7d western blotting实验结果图；
[0024]图5为本专利技术实验例2提供的实验结果图。
具体实施方式
[0025]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0026]水苏碱是从益母草(或中药“木易草”)叶中提取的，是主要的生物活性成分，相对分子质量为179.5，分子式为C7H
15
NO2，是最简单的吡咯生物碱，其结构式如下所示:
[0027]到目前为止，水苏碱已经显示出用于治疗纤维化、心血管疾病、癌症、子宫疾病、脑损伤和炎症的各种生物活性。但其在修复骨缺损以及促进骨再生领域尚未有相关文献报道。
[0028]鉴于此本专利技术实施例提供一种水苏碱的新的应用，包括用于制备治疗骨缺损的药物。
[0029]本专利技术实施例提供一种包埋有水苏碱培养后的BMSCs的明胶的制备方法，包括：
[0030]首先，将水苏碱与成骨培养基混合形成混合培养基，其中，水苏碱的浓度为150
‑
220μM，例如，可以为150μM、160μM、170μM、180μM、190μM、200μM、210μM以及220μM等150
‑
220μM之间的任意数值。
[0031]而后将骨髓间充质干细胞用加了水苏碱的成骨培养基培养，而后分离得到经过水苏碱培养的细胞。
[0032]需要说明的是：培养骨髓间充质干细胞的条件、分离得到经过水苏碱培养的细胞的步骤和条件等均为现有常规条件，此处不再进行详述。
[0033]将LAP与缓冲溶液(例如PBS溶液)混合，将GelMA加入上述混合液避光加热溶解形
成混合溶液，而后将上述经过水苏碱培养的细胞加入上述混合溶液进行行重悬，而后光照交联，使得上述经过水苏碱培养的细胞被包埋于GelMA内。其中，混合溶液中甲基丙烯酰化明胶与光引发剂的质量体积比为5％，所述光引发剂为LAP溶解在1xPBS液体中形成的物质，2者的质量体积比为0.25％。
[0034]实例1体外实验
[0035]1)从液氮中取出冻存P5以前的BMSC，迅速将冻存管放入37℃水浴中快速融解。
[0036]2)配平后以500g离心5min，吸掉上清，加入1ml大鼠骨髓间充质干细胞完全培养基重悬细胞。
[0037]3)将细胞均匀铺到T25培养瓶中，8字振动培养皿使细胞均匀分布，补齐培养基至5ml，5％CO2的37℃恒温细胞培养箱中培养24小时后观察细胞状态。
[0038]4)待细胞融合度至80％
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90％后去除完全培养基，吸取适量PBS溶液加入培养瓶中，轻轻振荡后弃去，重复一次；
[0039]5)加入1.5ml 0.25％胰蛋白酶，转动培养瓶，使其湿润整个表面细胞层，37℃下消化1
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2分钟，直至细胞皱缩变圆；
[0040]6)加入等量的完全培养基终止消化，吸取瓶中培养液反复冲壁上的细胞层，至全部冲下，轻轻吹打，混匀成本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种水苏碱在制备治疗骨缺损的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物中所述水苏碱存在的形式是经过水苏碱培养的细胞被明胶类物质包埋。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述明胶类物质包括甲基丙烯酰化明胶。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述甲基丙烯酰化明胶为甲基丙烯酰化明胶
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60。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物中所述水苏碱存在的形式是经过水苏碱培养的细胞被甲基丙烯酰化明胶
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60包埋。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，被所述甲基丙烯酰化明胶
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60包埋的经过水苏碱培养的细胞按照下述方法制备：先将甲基丙烯酰化明胶与光引发剂混合，然后将2者形成的混合物和经过水苏碱培养的细胞混匀后在...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄炜，赵志河，陈彧洋，乔铭薪，吴晓悦，黄鑫琪，岑啸，张博，赵一凡，裴芳，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：