一种测定羟丙基四氢吡喃三醇含量及其非对映异构体比例的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定羟丙基四氢吡喃三醇含量及其非对映异构体比例的方法，该方法主要包括以下步骤：将配制的空白溶液、对照品溶液、待测样品溶液注入液相色谱仪，设置色谱条件如下：色谱柱为酰胺键合相色谱柱；进样量体积为5～30ul；流速为0.9～1.0mL/min；柱温为35～40℃；检测器为ELSD；蒸发室温度为50～60℃；漂移管温度为50～60℃；气体流速为1.5～2.0mI/min；流动相：流动相A为纯化水，流动相B为乙腈，流动相比例：流动相A:流动相B＝5～10:90～95，v/v；洗脱方式为等度洗脱；记录色谱图。本发明专利技术具有检测时间短、检测灵敏度高和检测结果重复性佳等特点。果重复性佳等特点。

【技术实现步骤摘要】
一种测定羟丙基四氢吡喃三醇含量及其非对映异构体比例的方法


[0001]本专利技术涉及检测分析
，具体涉及到一种测定羟丙基四氢吡喃三醇含量及其非对映异构体比例的方法。

技术介绍

[0002]羟丙基四氢吡喃三醇(中文名：玻色因，CAS号：439685
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7，英文名：hydroxypropyl terrahydropy rantriol，英文缩写：HTR)是一种人工化学合成的木糖衍生物。羟丙基四氢吡喃三醇的结构中7位手性碳原子上的羟基存在立体化学结构，以一对非对映异构体形式共存。据相关文献报道，羟丙基四氢吡喃三醇结构中7位手性碳原子上羟基的立体化学结构对促进糖胺聚糖的合成作用具有影响，不同的非对映异构体比例会导致不同的活性水平。随着羟丙基四氢吡喃三醇合成工艺专利保护在2020年底到期，市面上已经出现许多国产羟丙基四氢吡喃三醇样品。为了评价羟丙基四氢吡喃三醇样品的优劣，亟需发展一种能高效准确的检测羟丙基四氢吡喃三醇含量，同时又能判定非对映异构体比例的检测方法。
[0003]专利CN112697933A中提供了一种测定羟丙基四氢吡喃三醇含量及其非对映异构体比例的方法，该方法中采用甲醇/乙腈流动相，梯度洗脱的方式在一定检测范围内实现了同时检测羟丙基四氢吡喃三醇含量和非对映异构体比例。但一方面上述检测方法中因采用梯度洗脱的方式导致检测时间长；另一方面存在检测限低的问题。

技术实现思路

[0004]针对上述的不足，本专利技术的目的是提供一种测定羟丙基四氢吡喃三醇含量及其非对映异构体比例的方法，可有效解决现有羟丙基四氢吡喃三醇检测方法中存在的检测时间长、检测限低和非对映异构体比例的检测范围窄的问题。
[0005]为达上述目的，本专利技术采取如下的技术方案：
[0006]本专利技术提供一种测定羟丙基四氢吡喃三醇含量及其非对映异构体比例的方法，包括以下步骤：
[0007]步骤(1)：配制空白溶液，配制对照品溶液，配制待测样品溶液；其中，空白溶液为纯化水溶液，对照品溶液为羟丙基四氢吡喃三醇对照品水溶液，待测样品溶液为羟丙基四氢吡喃三醇原料配制成的不同浓度的水溶液；
[0008]步骤(2)：将步骤(1)配制的空白溶液、对照品溶液、待测样品溶液注入液相色谱仪，设置色谱条件如下：色谱柱为酰胺键合相色谱柱；进样量体积为5～30ul；流速为0.9～1.0mL/min；柱温为35～40℃；检测器为ELSD(蒸发光散射检测器)；蒸发室温度为50～60℃；漂移管温度为50～60℃；气体流速为1.5～2.0mI/min；流动相：流动相A为纯化水，流动相B为乙腈，流动相比例为流动相A:流动相B＝5～10:90～95，v/v；洗脱方式为等度洗脱；记录色谱图。
[0009]进一步地，酰胺键合相色谱柱的参数为：4.6
×
250mm，5um。
[0010]本专利技术中“4.6
×
250mm”表示柱长为250mm，内径为4.6mm；本专利技术中“5um”表示粒径为5um。
[0011]进一步地，进样量体积为20ul。
[0012]进一步地，蒸发室温度为55℃。
[0013]进一步地，漂移管温度为55℃。
[0014]进一步地，气体流速为1.8mI/min。
[0015]进一步地，流动相A:流动相B＝5:90～95。
[0016]进一步地，流动相A:流动相B＝5:95。
[0017]本专利技术具有以下优点：
[0018]1、与现有技术(专利CN112697933A)相比，本专利技术采用的是以纯化水/乙腈作为流动相体系和等度洗脱的方式，在其他测试参数相同的情况下，本专利技术的检测时间更短(至少缩短一倍以上)；同时，本专利技术中采用的纯化水/乙腈流动相体系的本底吸收更低，从而使得具有更高的检测灵敏度(羟丙基四氢吡喃三醇极限检出浓度为10.125μg/ml)。
[0019]2、本专利技术提供了一种测定羟丙基四氢吡喃三醇含量及其非对映异构体比例的方法，通过合理的选择流动相体系(纯化水/乙腈流动相体系；流动相比例(纯化水:乙腈＝5～10:90～95，v/v；等度洗脱)、漂移管温度(50～60℃)、蒸发室温度(50～60℃)，在上述参数协同作用下使其具有检测速度更快、检测灵敏度更高、检测结果重复性和准确性更佳；本专利技术通过大量实验发现，当改变上述任何一个反应参数时，检测结果和效果都将受到影响。例如，当流动相选用专利CN112697933A中流动相体系(流动相：流动相A为甲醇，流动相B为乙腈，洗脱程序设置为：0分钟时，甲醇浓度为0％，乙腈浓度为100％；20分钟时，甲醇浓度为20％，乙腈浓度为80％；20.1分钟时，甲醇浓度为0％，乙腈浓度为100％；29分钟时，甲醇浓度为0，乙腈浓度为100％)时，检测时间延长一倍，且羟丙基四氢吡喃三醇极限检出浓度为27.085μg/ml(与专利CN112697933A中公开的羟丙基四氢吡喃三醇极限检出浓度为27.041μg/ml相一致)。
附图说明
[0020]图1
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2为本专利技术中检测结果图。
具体实施方式
[0021]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术，即所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0022]因此，以下对提供的本专利技术的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本专利技术的范围，而是仅仅表示本专利技术的选定实施例。基于本专利技术的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0023]本专利技术实施例所采用的仪器及试剂：
[0024]1.高效液相色谱仪，1260；Agilent；
[0025]2.分析天平，MS204S/Z；梅特勒；
[0026]3.色谱柱，XAmide(4.6*250mm，5μm)；华谱；
[0027]4.羟丙基四氢吡喃三醇对照品，含量≥98％；Target Molecule Corp；
[0028]5.纯化水；
[0029]6.乙腈，色谱级；
[0030]7.甲醇，色谱级；
[0031]所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
[0032]实施例1
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本专利技术所述方法的检测限和定量限
[0033]1.色谱条件
[0034]色谱柱：XAmide(4.6*250mm，5μm)，浙江华谱新创科技有限公司；
[0035]进样体积：20μl；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；
[0036]检测器：ELSD；蒸发室温度：55℃；漂移管温度：55℃；气体流速：1.8ml/min；
[0037]流动相：流动相A
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纯化水，流动相B
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乙腈本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定羟丙基四氢吡喃三醇含量及其非对映异构体比例的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)：配制空白溶液，配制对照品溶液，配制待测样品溶液；其中，空白溶液为纯化水溶液，对照品溶液为羟丙基四氢吡喃三醇对照品水溶液，待测样品溶液为羟丙基四氢吡喃三醇原料配制成的不同浓度的水溶液；步骤(2)：将步骤(1)配制的空白溶液、对照品溶液、待测样品溶液注入液相色谱仪，设置色谱条件如下：色谱柱为酰胺键合相色谱柱；进样量体积为5～30ul；流速为0.9～1.0mL/min；柱温为35～40℃；检测器为ELSD；蒸发室温度为50～60℃；漂移管温度为50～60℃；气体流速为1.5～2.0mI/min；流动相：流动相A为纯化水，流动相B为乙腈，流动相比例为流动相A:流动相B＝5～10:90～95，v/v；洗脱方式为等度洗脱；记录色谱图。2.如权利要求1所述的测定羟丙基四氢吡喃三醇含量及其非对映异构体比例的方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈建明，陈封政，张利兵，
申请(专利权)人：成都格纯生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：