精氨酸脱亚胺酶生产菌及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种精氨酸脱亚胺酶生产菌及其构建方法。其将质粒pWB980用EcoRⅠ和KpnⅠ双酶切处理，将Pg3强启动子序列整合到双酶切处理后的质粒pWB980上，得到质粒pWB980

【技术实现步骤摘要】
精氨酸脱亚胺酶生产菌及其构建方法


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体涉及一种精氨酸脱亚胺酶生产菌及其构建方法。

技术介绍

[0002]精氨酸脱亚胺酶(Arginine deiminase，EC3.5.3.6)简称ADI。ADI广泛存在于细菌、古细菌和一些真核细胞中，不同来源的ADI性质也有所不同，比酶活从5.4到140.3IU/mg，最适pH从5.6到7.6。ADI在医学上有着重要的价值，ADI已被证明是细胞增殖的抑制剂，能够阻止血管内壁细胞的扩增；而且，ADI没有明显的毒副作用，可以用于治疗白血病和恶性肿瘤。ADI还可应用于酶法生产瓜氨酸，具有广阔的市场前景。
[0003]对于ADI的克隆与表达，目前已有研究者将来源于不同生物的ADI在E.coli中表达，例如：Kim等人将来源于Lactococcus Latis ssp.Lactis ATCC7962的ADI(LADI)于E.coli BL21中表达，纯化得到LADI的分子质量约140kDa，比酶活为140U/mg。Megumi等将来源于Mycoplasma homin本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种精氨酸脱亚胺酶生产菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将质粒pWB980用EcoRⅠ和KpnⅠ双酶切处理，将Pg3强启动子序列整合到双酶切处理后的质粒pWB980上，得到质粒pWB980
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Pg3，再用BamHⅠ和SphⅠ对质粒pWB980
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Pg3进行酶切处理，将arcA基因整合到酶切处理后的质粒pWB980
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Pg3上，获得重组表达载体；(2)将获得的重组表达载体导入到枯草芽孢杆菌中，构建得到精氨酸脱亚胺酶生产菌。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，Pg3强启动子序列如SEQ ID NO.3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：岳明瑞，谢沛，曹华杰，郭永胜，
申请(专利权)人：汕头市佳禾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：