基于新型冠状病毒快速制备高亲和力多表位诊断抗体方法技术

本发明专利技术公开了基于新型冠状病毒快速制备高亲和力多表位诊断抗体方法，包括原料和辅料；所述原料组分及重量份数配比为：青霉素3％～5％、氨苄青霉素1％～3％、卡那霉素1％～2％、SARS

【技术实现步骤摘要】
基于新型冠状病毒快速制备高亲和力多表位诊断抗体方法


[0001]本专利技术涉及抗体制备
，具体为基于新型冠状病毒快速制备高亲 和力多表位诊断抗体方法。

技术介绍

[0002]目前新型冠状病毒肺炎疫情仍在发展中，给人类健康和经济带来了巨大 的威胁，需要快速有效的手段来确定检测对象的实际感染情况，为后续实施 的治疗及防疫措施提供依据。
[0003]当前应用的核酸检测方法虽为诊断SARS
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2感染的金标准，但受咽拭 子样本采集方式限制，检测人员感染风险较高，且后续步骤繁琐，实验条件 要求高，尚不能满足目前大规模检测以排查疑似患者、无症状感染者的需要。
[0004]而目前SARS
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2血清学诊断中的抗体多来源于以SARS
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2特异性 抗原免疫小鼠、家兔等哺乳动物得到的特异性IgM/IgG，最后利用ELISA、胶 体金等技术手段来定性或定量检测样本，能够下沉至医院等现场大量使用， 便捷高效，30分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于新型冠状病毒高亲和力多表位诊断抗体，其特征在于：包括原料和辅料；所述原料组分及重量份数配比为：青霉素3％～5％、氨苄青霉素1％～3％、卡那霉素1％～2％、SARS
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CoV
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2多表位抗原3％～5％、NTA0.6％～0.8％、树脂8％～10％、蛋白溶液6％～8％、弗氏完全佐剂0.7％～0.9％、弗氏不完全佐剂0.7％～0.9％、IgY0.8％～1％、pET32a(+)0.7％～0.9％、蛋白质6％～8％、PBS0.5％～0.7％、碳酸盐缓冲液0.7％～0.9％、封闭液8％～10％、BSA1％～2％、酪蛋白0.5％～0.7％、；酪蛋白酸0.6％～0.8％、TMB缓冲液0.4％～0.6％、其余全都脱脂牛奶；所述辅料组分及重量份数配比为：咪唑0.02％～0.04％、Tris
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HC0.01％～0.03％、蒸馏水0.01％～0.03％、辣根过氧化物酶0.02％～0.04％、山羊抗人IgG(H+L)0.02％～0.04％、4
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氯
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萘酚0.01％～0.03％、过氧化氢酶0.02％～0.04％、H2SO40.01％～0.03％、辛酸0.02％～0.04％、硫酸钠0.01％～0.03％、产蛋母鸡50只。2.根据权利要求1所述的基于新型冠状病毒高亲和力多表位诊断抗体，其特征在于：所述原料组分及重量份数配比为：青霉素3％、氨苄青霉素1％、卡那霉素1％、SARS
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2多表位抗原3％、NTA0.6％、树脂8％、蛋白溶液6％、弗氏完全佐剂0.7％、弗氏不完全佐剂0.7％、IgY0.8％、pET32a(+)0.7％、蛋白质6％、PBS0.5％碳酸盐缓冲液0.7％、封闭液8％、BSA1％、酪蛋白0.5％、；酪蛋白酸0.6％、TMB缓冲液0.4％、其余全都脱脂牛奶；所述辅料组分及重量份数配比：咪唑0.02％、Tris
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HC0.01％、蒸馏水0.01％、辣根过氧化物酶0.02％、山羊抗人IgG(H+L)0.02％、4
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氯
‑1‑
萘酚0.01％、过氧化氢酶0.02％、H2SO40.01％、辛酸0.02％、硫酸钠0.01％、产蛋母鸡50只。3.根据权利要求1所述的基于新型冠状病毒高亲和力多表位诊断抗体，其特征在于：所述原料组分及重量份数配比为：青霉素3％、氨苄青霉素1％、卡那霉素1％、SARS
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CoV
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2多表位抗原3％、NTA0.7％、树脂9％、蛋白溶液7％、弗氏完全佐剂0.8％、弗氏不完全佐剂0.8％、IgY0.8％、pET32a(+)0.8％、蛋白质7％、PBS0.6％、碳酸盐缓冲液0.8％、封闭液9％、BSA1％、酪蛋白0.6％、；酪蛋白酸0.7％、TMB缓冲液0.6％、其余全都脱脂牛奶；所述辅料组分及重量份数配比：咪唑0.03％、Tris
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HC0.02％、蒸馏水0.02％、辣根过氧化物酶0.03％、山羊抗人IgG(H+L)0.03％、4
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氯
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萘酚0.02％、过氧化氢酶0.03％、H2SO40.02％、辛酸0.03％、硫酸钠0.02％、产蛋母鸡50只。4.根据权利要求1所述的基于新型冠状病毒高亲和力多表位诊断抗体，其特征在于：所述原料组分及重量份数配比为：青霉素5％、氨苄青霉素3％、卡那霉素3％、SARS
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2多表位抗原5％、NTA1％、树脂10％、蛋白溶液8％、弗氏完全佐剂0.9％、弗氏不完全佐剂0.9％、IgY1％、pET32a(+)0.9％、蛋白质6％、PBS0.7％、碳酸盐缓冲液0.9％、封闭液10％、BSA3％、酪蛋白0.7％、；酪蛋白酸0.8％、TMB缓冲液0.6％；所述辅料组分及重量份数配比：咪唑0.04％、Tris
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HC0.03％、蒸馏水0.03％、辣根过氧化物酶0.04％、山羊抗人IgG(H+L)0.04％、4
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氯
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萘酚0.03％、过氧化氢酶0.04％、H2SO40.03％、辛酸0.04％、硫酸钠0.03％、产蛋母鸡50只。5.根据权利要求1、2、3或4所述的基于新型冠状病毒高亲和力多表位诊断抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、抗原制备：所述通过IEDB的BeipRed2.0软件获得SARS
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2候选抗原表位，选择富含CTL、Th表位和B细胞表位的氨基酸序列，将这些序列按一定的顺序串联构建新的多表位
融合抗原，并重新预测以验证融合序列中的T细胞和B细胞表位是否发生变化，最后选择表位不变的融合序列(称为SARS
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2多表位抗原)进行进一步分析；S2、表达：所述抗原表位位于SARS
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2的S蛋白及N蛋白上；S3、鉴定和纯化：所述为表达融合的多表位抗原，使用原核系统的密码子将SARS
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2多表位抗原的氨基酸序列翻译成核苷酸序列，并克隆到原核表达载体的位点中，以构建重组质粒，然后通过限制性内切酶消化和DNA测序证实该重组质粒，确认插入的序列后，用质粒诱导转化大肠杆菌BL21(DE3)，通过十二烷基硫酸钠
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聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS
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PAGE)和蛋白质印迹分析(Westernblot)验证SARS
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2多表位抗原的表达和鉴定，然后纯化重组蛋白，PBS，pH7.4透析使蛋白质复性，并通过SDS
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PAGE分级分离，然后通过BCA蛋白质定量方法确定其浓度，最后储存样品备用；S4、卵黄抗体制备：所述将制备的SARS
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2多表位抗原取370μL与等量佐剂混合处理后作为免疫原混合溶液，通过背部皮下注射免疫产蛋母鸡3次，每次间隔2周，第三次免疫3周后收集鸡蛋用来制备抗体，将收集的鸡蛋样品在4℃下储存；S5、选取：所述免疫原混合溶液浓度为每毫升溶液含约1.35mgSARS
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2多表位抗原，首次免疫使用弗氏完全佐剂，第二次免疫和第三次免疫使用弗氏不完全佐剂，SARS
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2多表位抗原卵黄抗体的粗提：去蛋清得蛋黄，用水稀释后用辛酸调pH至5.2～6.0进行第一次沉淀后离心取上清，加19％硫酸钠溶液进行第二次沉淀后离心去除上清，得到白色沉淀即为SARS
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2多表位抗原卵黄抗体粗品；S6、沉淀离心：所述将第一次沉淀、第二次沉淀时的温度均为4℃；所述离心的速率均为8000～10000r/min；所述离心的时间均为20～60min，将得到的SARS
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CoV<...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈泽良，陆玉瑛，陆家海，张力华，
申请(专利权)人：深圳蓝韵生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：