一种筛选水稻生育期的方法技术

本发明专利技术提供了一种筛选水稻生育期的方法，其包括如下步骤：准备扩增模板、准备扩增体系、PCR、琼脂糖凝胶电泳、拍照比对。本发明专利技术通过遗传分离群体发现两种Hd1的不同等位变异，与野生型相比这两种突变等位都能够显著提前生育期，针对这两种变异类型，我们分别设计了两组四引物标记，实现了利用PCR结合凝胶电泳方法快速鉴定两种变异，并证明所用引物可有效用于水稻生育期性状的追踪。水稻生育期性状的追踪。水稻生育期性状的追踪。

【技术实现步骤摘要】
一种筛选水稻生育期的方法


[0001]本专利技术涉及水稻培育
，特别是涉及一种筛选水稻生育期的方法。

技术介绍

[0002]水稻是我国重要粮食作物，其高产是粮食生产安全的重要保障。不同地区水稻种植环境对生育期有不同需求，生育期过短会导致光温利用不足，限制产量发挥，而生育期过长则会竞争后续轮作作物的生长周期，不利于下季作物的产量发挥。因此在不同地区的水稻育种过程中需要筛选生育期符合当地生长需求的植株。然而，生育期的观察是一个连续过程，在大的育种群体调查过程中需要消耗大量的时间和劳动力，利用与生育期关联的分子标记进行筛选能够有效解决这一问题。目前水稻中已经克隆了多个生育期调控基因，包括Hd1、Hd3a、Ghd7、Ghd8、Ghd7.1、Hd6、Ehd1、DTH3、RFT等，这些基因的不同变异在水稻品种都大量存在，尽管在育种中这些基因的连锁标记被设计用于追踪目标变异，但连锁标记仅限于特定杂交亲本组合，无法实现对任意育种群体的有效鉴定，且由于染色体交换的原因，连锁标记无法有效鉴定自然品种的目标基因变异，需要发展一种能够直接识别关键生育期基因变异的标记系统。

技术实现思路

[0003]本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。
[0004]鉴于上述和/或现有筛选水稻生育期的方法中存在的问题，提出了本专利技术。
[0005]因此，本专利技术其中一个目的是，克服现有筛选水稻方法的不足，提供一种筛选水稻生育期的方法。
[0006]为解决上述技术问题，根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了如下技术方案：一种筛选水稻生育期的方法，其包括如下步骤：
[0007]准备扩增模板：准备扩增模板YYP1、NIP、DHX或任意水稻品种DNA；
[0008]准备扩增体系：准备DNA模板、2
×
Taq Master Mix 10ul、每条引物各0.5ul、DD水。
[0009]PCR：进行PCR操作，执行变性、退火、衍生步骤；
[0010]琼脂糖凝胶电泳：对于PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳；
[0011]拍照比对：对于琼脂糖凝胶电泳结果进行拍照，比较胶图。
[0012]作为本专利技术所述筛选生育期水稻的方法的一种优选方案，其中：准备扩增体系中，DNA模板为YYP1、NIP和DHX。
[0013]作为本专利技术所述筛选生育期水稻的方法的一种优选方案，其中：准备扩增体系中，扩增体系为20ul。
[0014]作为本专利技术所述筛选生育期水稻的方法的一种优选方案，其中：准备扩增体系中，所述引物包括如下引物中的一种或几种：
[0015]YYP1Hd1
‑
1：TGCCTCTGCATACGCCTTTC
[0016]YYP1Hd1
‑
2：GACAATACGTTATGAAACAAGG
[0017]YYP1Hd1
‑
3：TGACCATTTGCCGATTCCAT
[0018]YYP1Hd1
‑
4：AGCTACCGTCAGATAGAGCTGC
[0019]YYP1Hd1
‑
5：GACAATACGTTATGAAACAAGGC
[0020]YYP1Hd1
‑
6：CATTTGCCGATTCCATCTCA
[0021]YYP1Hd1
‑
7：TATTGCTACTCAGTAAGTCCCC
[0022]DHXHd1
‑
1：TACCCGCCTCCATTGATGACAG
[0023]DHXHd1
‑
2：GCCGATTCCATCTCAGATATCGTT
[0024]DHXHd1
‑
3：GTATTGTCTTCTCAAACTTCCT
[0025]DHXHd1
‑
4：TTTGCGACAGTAAAAAAGAT
[0026]作为本专利技术所述筛选生育期水稻的方法的一种优选方案，其中：当区分NIP和YYP1型变异时，使用的引物为YYP1Hd1
‑
1、YYP1Hd1
‑
5、YYP1Hd1
‑
6和YYP1Hd1
‑
7，扩增产物中出现较小条带(128bp)为早抽穗植株/品种。
[0027]作为本专利技术所述筛选生育期水稻的方法的一种优选方案，其中：当区分NIP和YYP1型变异时，使用的引物为YYP1Hd1
‑
1、YYP1Hd1
‑
2、YYP1Hd1
‑
6、YYP1Hd1
‑
7，扩增产物中出现较小条带(128bp)的为早抽穗植株/品种。
[0028]作为本专利技术所述筛选生育期水稻的方法的一种优选方案，其中：当区分DHX和NIP型变异时，使用的引物为DHXHd1
‑
1、DHXHd1
‑
2、DHXHd1
‑
3、DHXHd1
‑
4，扩增产物中出现较小条带(175bp)的为早抽穗植株/品种。
[0029]作为本专利技术所述筛选生育期水稻的方法的一种优选方案，其中：PCR循环为94℃变性3min，退火30s，72℃延伸20s，循环次数为35次，最后72℃5min完成PCR。
[0030]作为本专利技术所述筛选生育期水稻的方法的一种优选方案，其中：当使用的引物为YYP1Hd1
‑
1、YYP1Hd1
‑
2、YYP1Hd1
‑
6、YYP1Hd1
‑
7时，57.5≤退火温度≤61.4
[0031]作为本专利技术所述筛选生育期水稻的方法的一种优选方案，其中：使用的引物为DHXHd1
‑
1、DHXHd1
‑
2、DHXHd1
‑
3、DHXHd1
‑
4时，48℃≤退火温度≤58℃。
[0032]本专利技术提供一种筛选生育期水稻的方法，通过遗传分离群体发现两种Hd1的不同等位变异，与野生型相比这两种突变等位都能够显著延长生育期，针对这两种变异类型，我们分别设计了两组四引物标记，实现了利用PCR结合凝胶电泳方法快速鉴定两种变异，并证明所用引物可有效用于水稻生育期性状的追踪。
附图说明
[0033]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
[0034]图1为Hd1对生育期的调控效应解析图示，
[0035]其中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种筛选水稻生育期的方法，其特征在于：包括如下步骤：准备扩增模板：水稻DNA；准备扩增体系：准备DNA模板、2
×
Taq Master Mix 10ul、每条引物各0.5ul、DD水。PCR：进行PCR操作，执行变性、退火、衍生步骤；琼脂糖凝胶电泳：对于PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳；拍照比对：对于琼脂糖凝胶电泳结果进行拍照，比较胶图。2.根据权利要求1所述的筛选水稻生育期的方法，其特征在于：所述准备扩增体系中，扩增模板为YYP1、NIP和DHX或任意其它水稻品种DNA。3.根据权利要求1所述的筛选水稻生育期的方法，其特征在于：所述准备扩增体系中，扩增体系为20ul。4.根据权利要求1所述的筛选水稻生育期的方法，其特征在于：所述准备扩增体系中，所述引物包括如下引物中的一种或几种：YYP1Hd1
‑
1：TGCCTCTGCATACGCCTTTCYYP1Hd1
‑
2：GACAATACGTTATGAAACAAGGYYP1Hd1
‑
3：TGACCATTTGCCGATTCCATYYP1Hd1
‑
4：AGCTACCGTCAGATAGAGCTGCYYP1Hd1
‑
5：GACAATACGTTATGAAACAAGGCYYP1Hd1
‑
6：CATTTGCCGATTCCATCTCAYYP1Hd1
‑
7：TATTGCTACTCAGTAAGTCCCCDHXHd1
‑
1：TACCCGCCTCCATTGATGACAGDHXHd1
‑
2：GCCGATTCCATCTCAGATATCGTTDHXHd1
‑
3：GTATTGTCTTCTCAAACTTCCTDHXHd1
‑
4：TTTG...

【专利技术属性】
技术研发人员：张林，曹东平，刘巧泉，邹怡婷，卞中，周涵，谢东，庄文姝，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：