一种香辛料中7种兴奋剂的检测方法技术

本发明专利技术一种香辛料中7种兴奋剂的检测方法，在样品加入同位素内标中间液，用去离子水和甲酸的乙腈溶液提取，分离出上清液，将剩余部分提取合并，加入无水硫酸镁涡旋振荡、离心，得到的上清液吹近干，溶解过滤；之后将待测液和混合标准工作液用高效液相色谱串联质谱仪测定，得到谱图信息；结合混合标准工作液中待测组分含量与峰面积、及待测液中待测组分峰面积、样品质量、提取体积、稀释倍数，求出去甲乌药碱、曲托喹酚、罂粟碱、那可丁和蒂巴因含量；结合混合标准工作液中待测组分的含量与峰面积、内标物的峰面积与浓度，及待测液中内标物的浓度与峰面积、待测液中待测组分的峰面积、待测样品质量、提取体积、稀释倍数，求出剩余兴奋剂的含量。奋剂的含量。

【技术实现步骤摘要】
一种香辛料中7种兴奋剂的检测方法


[0001]本专利技术属于食品中兴奋剂检测
，具体为一种香辛料中7种兴奋剂的检测方法。

技术介绍

[0002]为维护竞技体育的公平和纯洁，保证运动员的身体健康，兴奋剂检测已成为所有体育比赛中不可或缺的重要环节。香辛料具有刺激性香味，利用植物的种子、花蕾、叶茎、根块等，或其提取物，赋予食物以风味，增进食欲，帮助消化和吸收，会在烹饪和中成药中使用。运动员在食用食品和药品过程中会存在误服误用的现象。
[0003]香辛料中含有7种常见的兴奋剂，即曲托喹酚、去甲乌药碱、罂粟碱、可待因、那可丁、吗啡、蒂巴因。在香辛料、调味料、火锅底料中都有含罂粟碱、可待因、那可丁、吗啡、蒂巴因的风险；曲托喹酚是一种植物源性成分，经研究发现在莲子、香叶、胡椒粉中含有大量的去甲乌药碱，近几年在我国频繁出现运动员去甲乌药碱阳性事件。
[0004]为了降低运动员误服的风险，在香辛料中检测这7种成分刻不容缓。因此为了满足这7种兴奋剂检测的需要，技术人员尝试了高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、气相色谱
‑
质谱联用(GC/MSD)等方法进行检测，但是它们在检测过程中需要衍生化，会产生操作复杂、检测周期长、灵敏度较差等问题，使用更为先进的、灵敏度更高的气相色谱
‑
质谱和液相色谱
‑
质谱联用检测方法也不能对消除这些问题。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种香辛料中7种兴奋剂的检测方法，解决了目前无法同时测定香辛料中7种兴奋剂的难题。
[0006]本专利技术是通过以下技术方案来实现：
[0007]一种香辛料中7种兴奋剂的检测方法，所述的兴奋剂为曲托喹酚、去甲乌药碱、罂粟碱、可待因、那可丁、吗啡和蒂巴因，包括如下步骤：
[0008]步骤1，在待测样品中加入所述7种兴奋剂对应的同位素内标中间液，之后用去离子水和甲酸的乙腈溶液提取，从得到的提取液中分离出第一上清液，将提取液的剩余部分用相同的方式进行提取，与第一上清液合并得到第二上清液，然后加入无水硫酸镁进行涡旋振荡、离心，得到第三上清液，将第三上清液吹近干，用乙腈、甲酸和水形成的混合溶液溶解，最后过滤，得到待测液；
[0009]步骤2，将待测液用高效液相色谱串联质谱仪进行测定，得到相应的谱图信息；将由所述7种兴奋剂的混合标准中间液和与所述7种兴奋剂对应的同位素内标混合中间液用空白基质溶液配制的混合标准工作液，用与待测液相同的条件进行测定，得到相应的谱图信息；
[0010]步骤3，将步骤2形成的两组谱图信息进行比对，得到所述待测液和混合标准工作液中所有兴奋剂的色谱峰峰面积，以及混合标准工作液和所述待测液中对应的内标物的峰
面积；
[0011]步骤4，结合混合标准工作液中待测组分的含量与峰面积、以及待测液中待测组分的峰面积、待测样品质量、去离子水和甲酸的乙腈溶液的总体积、稀释倍数，采用基质外标法，求出去甲乌药碱、曲托喹酚、罂粟碱、那可丁和蒂巴因的含量；
[0012]结合混合标准工作液中待测组分的含量与峰面积、内标物的峰面积与浓度，以及待测液中内标物的浓度与峰面积、待测液中待测组分的峰面积、待测样品质量、去离子水和甲酸的乙腈溶液的总体积、稀释倍数，采用基质内标法，求出吗啡和可待因的含量。
[0013]优选的，步骤1中所述的待测样品为固体样品、半固体样品或液体样品，固体样品经粉碎后混匀得到，半固体样品或液体样品经搅拌均匀后得到。
[0014]优选的，步骤1中所述的待测样品、同位素内标中间液、去离子水和甲酸的乙腈溶液的比例为(1.99
‑
2.01)g：0.075mL：(1
‑
3)mL：15mL。
[0015]优选的，步骤1将所述的同位素内标中间液加入到待测样品中后，先加去离子水涡旋10
‑
20s，再加入甲酸的乙腈溶液涡旋混匀后，振荡提取10
‑
15min，之后超声提取10
‑
15min，最后在6000
‑
8000r/min下离心4
‑
6min，得到第一上清液。
[0016]优选的，步骤1中加入的无水硫酸镁与待测样品的质量比为(3
‑
5)g：(3
‑
5)g，加入无水硫酸镁后涡旋振荡1
‑
2min，之后在6000
‑
8000r/min下离心4
‑
6min，得到第三上清液。
[0017]优选的，步骤2中的高效液相色谱采用C18色谱柱，流动相A为甲酸的水溶液，甲酸的体积占整个溶液体积的0.1％，流动相B为乙腈，梯度洗脱程序如下：
[0018]0‑
1min内，流动相A的体积比例保持95％；1
‑
2min内，流动相A的体积比例由95％线性减小至80％；2
‑
3min内，流动相A的体积比例由80％线性减小至40％；3
‑
4min内，流动相A的体积比例由40％线性减小至20％；4
‑
8.5min内，流动相A的比例由20％线性减小至10％，8.5
‑
10.5min内，流动相A的比例保持10％，10.5
‑
11min内，流动相A的比例由10％线性增加至95％，11
‑
15min内，流动相A的比例保持95％；
[0019]步骤2所述的质谱仪采用如下参数进行工作：
[0020]扫描方式为多反应监测，毛细管电压为3.5kv，鞘气温度为400℃，干燥器温度为300℃，鞘气流量为11L/min，干燥器流量为7L/min。
[0021]优选的，步骤2采用如下过程配制混合标准工作液：
[0022]用去离子水和甲酸的乙腈溶液对权利要求1步骤1所述待测样品对应的空白样品进行提取，从得到的提取液中分离出第四上清液，将提取液的剩余部分用相同的方式进行提取，与第四上清液合并得到空白基质溶液，分别移取所述7种兴奋剂对应的混合标准中间液和同位素内标混合中间液，用空白基质溶液稀释，得到混合标准工作溶液。
[0023]优选的，步骤2和步骤3中所述的谱图信息为色谱峰、定性离子对和每个离子的信噪比；
[0024]步骤3在进行谱图信息比对时，采用如下标准：
[0025]待测液中兴奋剂的保留时间与混合标准工作液中对应兴奋剂的保留时间偏差在
±
5％以内，且不超过0.5min；待测液中兴奋剂的定性离子对的相对离子丰度与混合标准工作液中对应兴奋剂的相对离子丰度一致，且每个离子的信噪比≥3。
[0026]优选的，步骤4采用如下公式求出去甲乌药碱、曲托喹酚、罂粟碱、那可丁和蒂巴因的含量：
[0027][0028]式中：
[0029]X
i
为待测样品中各待测物的含量，单位为微克每千克；
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，所述的兴奋剂为曲托喹酚、去甲乌药碱、罂粟碱、可待因、那可丁、吗啡和蒂巴因，包括如下步骤：步骤1，在待测样品中加入所述7种兴奋剂对应的同位素内标中间液，之后用去离子水和甲酸的乙腈溶液提取，从得到的提取液中分离出第一上清液，将提取液的剩余部分用相同的方式进行提取，与第一上清液合并得到第二上清液，然后加入无水硫酸镁进行涡旋振荡、离心，得到第三上清液，将第三上清液吹近干，用乙腈、甲酸和水形成的混合溶液溶解，最后过滤，得到待测液；步骤2，将待测液用高效液相色谱串联质谱仪进行测定，得到相应的谱图信息；将由所述7种兴奋剂的混合标准中间液和与所述7种兴奋剂对应的同位素内标混合中间液用空白基质溶液配制的混合标准工作液，用与待测液相同的条件进行测定，得到相应的谱图信息；步骤3，将步骤2形成的两组谱图信息进行比对，得到所述待测液和混合标准工作液中所有兴奋剂的色谱峰峰面积，以及混合标准工作液和所述待测液中对应的内标物的峰面积；步骤4，结合混合标准工作液中待测组分的含量与峰面积、以及待测液中待测组分的峰面积、待测样品质量、去离子水和甲酸的乙腈溶液的总体积、稀释倍数，采用基质外标法，求出去甲乌药碱、曲托喹酚、罂粟碱、那可丁和蒂巴因的含量；结合混合标准工作液中待测组分的含量与峰面积、内标物的峰面积与浓度，以及待测液中内标物的浓度与峰面积、待测液中待测组分的峰面积、待测样品质量、去离子水和甲酸的乙腈溶液的总体积、稀释倍数，采用基质内标法，求出吗啡和可待因的含量。2.根据权利要求1所述的香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤1中所述的待测样品为固体样品、半固体样品或液体样品，固体样品经粉碎后混匀得到，半固体样品或液体样品经搅拌均匀后得到。3.根据权利要求1所述的香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤1中所述的待测样品、同位素内标中间液、去离子水和甲酸的乙腈溶液的比例为(1.99
‑
2.01)g：0.075mL：(1
‑
3)mL：15mL。4.根据权利要求1所述的香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤1将所述的同位素内标中间液加入到待测样品中后，先加去离子水涡旋10
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20s，再加入甲酸的乙腈溶液涡旋混匀后，振荡提取10
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15min，之后超声提取10
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15min，最后在6000
‑
8000r/min下离心4
‑
6min，得到第一上清液。5.根据权利要求1所述的香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤1中加入的无水硫酸镁与待测样品的质量比为(3
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5)g：(3
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5)g，加入无水硫酸镁后涡旋振荡1
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2min，之后在6000
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8000r/min下离心4
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6min，得到第三上清液。6.根据权利要求1所述的香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤2中的高效液相色谱采用C18色谱柱，流动相A为甲酸的水溶液，甲酸的体积占整个溶液体积的0.1％，流动相B为乙腈，梯度洗脱程序如下：0
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1min内，流动相A的体积比例保持95％；1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张亚锋，王蓓蓓，卫星华，梁红月，李卓，董曼曼，贾寒冰，李敏，李欣雨，
申请(专利权)人：西安市食品药品检验所西安市药品不良反应监测中心，
类型：发明
国别省市：