一种筛选金花葵中活性物质的方法技术

本发明专利技术公开了一种筛选金花葵中活性物质的方法，1）称取干燥金花葵不同部位粉碎的细粉末，用甲醇水溶液为提取溶剂，采用超声波辅助法进行提取，收集上清液获得金花葵提取液；2）将金花葵提取液先通过净化柱进行净化，对净化后的净化液进行过滤，然后通过洗脱剂进行洗脱，其中，净化柱以活性炭纤维材料和未活化的碳纤维材料为填料；3）上机：先对步骤2）获得的洗脱后的洗脱液通过液相进行梯度洗脱，再通过质谱仪筛选得到金花葵中的活性物质。本发明专利技术净化柱自己填装，利用未活化的碳纤维材料和活化的炭纤维材料对不同的极性的活性化合物进行吸附，所述方法降低背景干扰，提高检测灵敏度，可有效提高金花葵中微量或者痕量活性物质的检出。检出。检出。

【技术实现步骤摘要】
一种筛选金花葵中活性物质的方法


[0001]本专利技术涉及一种筛选金花葵中活性物质的方法。

技术介绍

[0002]金花葵为锦葵科秋葵属一种濒临绝种植物，2003年由中国农科院在河北省邢台地区发现，该植物含有多种植物性活性成分，能显著调节人体内分泌、免疫力，增加人体抵抗力，增强机体抗氧化能力，具有抗衰老、抗肿瘤、降血脂等功效。
[0003]目前，金花葵的提取方法主要有酶解法、微波提取法和超声波辅助法，其中，超声波辅助法是金花葵提取分离最常用的方法，其具有高效节能、绿色环保无污染、操作简单的特点，但是由于金花葵中含有多种植物性活性成分，提取的不完全或者杂质的干扰都会导致金花葵中微量或者痕量活性成分不得检出，降低了金花葵中活性物质的利用率，导致金花葵中活性物质的利用受到了限制。

技术实现思路

[0004]针对上述问题，本专利技术提供一种筛选金花葵中活性物质的方法，根据金花葵中植物活性化合物的极性不同利用碳纤维柱对其进行净化，得到金花葵净化液，能够充分完全的提取金花葵中植物性活性成分，降低了背景干扰，且具有筛选成分不同的多种类型天然产物样品的高通用性。
[0005]为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本专利技术通过以下技术方案实现：
[0006]一种筛选金花葵中活性物质的方法，包括如下步骤：
[0007]1)称取干燥金花葵不同部位粉碎的细粉末，用甲醇水溶液为提取溶剂，采用超声波辅助法进行提取，收集上清液获得金花葵提取液；
[0008]2)将金花葵提取液先通过净化柱进行净化，对净化后的净化液进行过滤，然后通过洗脱剂进行洗脱，其中，净化柱以活性炭纤维材料和未活化的碳纤维材料为填料；
[0009]3)上机：先对步骤2)获得的洗脱后的洗脱液通过液相进行梯度洗脱，再通过质谱仪筛选得到金花葵中的活性物质。
[0010]优选，步骤3)中，液相的流动相A项为0.1％甲酸水溶液，流动相B项为乙腈。
[0011]优选，流动相A项和流动相B项采用双泵进行洗脱，洗脱过程中采用梯度洗脱，其中，梯度洗脱条件如下表所示：
[0012]时间流动相A流动相B0
‑
5min98％2％5
‑
12min85％15％12
‑
28min70％30％28
‑
32min5％95％
[0013]。
[0014]优选，在步骤2)的洗脱过程中，洗脱剂采用体积浓度为70～99.9％的甲醇溶液。
[0015]优选，步骤1)中，选用50％
‑
70％甲醇水溶液为提取溶剂，料液比为1:10g/mL
‑
1:20g/mL。
[0016]优选，步骤1)中，超声提取温度为20
‑
80℃，超声提取时间为10
‑
30min。
[0017]优选，采用超声波辅助法进行重复提取2
‑
5次，再收集上清液。
[0018]优选，步骤1)中，选用70％的甲醇水溶液为提取溶剂，料液比1:20g/mL，超声提取温度为30℃，超声提取时间为15min，重复提取三次，收集上清液。
[0019]优选，步骤2)中，将得到的净化液经过滤膜过滤，所述滤膜的孔径为0.22μm、0.45μm或0.6μm。
[0020]优选，步骤2)中，将提取液通过填充有未活化的碳纤维材料和活性炭纤维材料的净化柱，所述净化柱的长度为67.6mm，所述净化柱的内径为12.9mm，填充未活化的碳纤维材料的填充量为150
‑
250mg；填充活性炭纤维材料的填充量为150
‑
250mg。
[0021]本专利技术的有益效果是：
[0022]本专利技术净化柱采用自制的碳纤维柱，根据未活化的碳纤维材料和经过活化的炭纤维材料对不同的极性化合物进行吸附，然后通过洗脱剂进行洗脱，得到金花葵活性物质的净化液，将净化液浓缩过膜，通过高分辨质谱进行分析，发现金花葵中含有多种天然产物，包括黄酮类、类黄酮类、生物碱类、核苷类、有机酸类、氨基酸类和糖类化合物，可有效提高金花葵中活性物质的利用率。
附图说明
[0023]图1是本专利技术金花葵花瓣特征图谱；
[0024]图2是本专利技术金花葵花蕾特征图谱；
[0025]图3是本专利技术金花葵黄酮类检出示例示意图；
[0026]图4是本专利技术金花葵生物碱类检出示例示意图；
[0027]图5是本专利技术金花葵糖类检出示例示意图；
[0028]图6是本专利技术金花葵有机酸类检出示例示意图；
[0029]图7是本专利技术金花葵黄酮苷类检出示例示意图；
[0030]图8是本专利技术金花葵花瓣、花蕾中同种化合物的峰面积比较示意图；
[0031]图中：Response Units vs为响应单位VS；Acquisition Time(min)为采集时间分钟。
具体实施方式
[0032]下面结合附图和具体的实施例对本专利技术技术方案作进一步的详细描述，以使本领域的技术人员可以更好的理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0033]本专利技术一种筛选金花葵中活性物质的方法，利用溶剂萃取，填充有不同吸附材料的碳纤维柱进行净化、洗脱剂洗脱，得到净化提取液，具体的，提取方法包括如下步骤：
[0034]1)称取一定量的干燥金花葵花瓣粉碎的细粉末，用甲醇水溶液为提取溶剂，采用超声波辅助法进行提取，收集上清液获得金花葵提取液。
[0035]此步骤为初步获得金花葵提取液，可以选用50％
‑
70％甲醇水溶液为提取溶剂，料
液比为1:10g/mL
‑
1:20g/mL。
[0036]超声波辅助法为现有技术，可以设置超声提取温度为20
‑
80℃，超声提取时间为10
‑
30min，可以采用超声波辅助法进行重复提取2
‑
5次，再收集上清液。
[0037]2)将金花葵提取液先通过净化柱进行净化，对净化后的净化液进行过滤，然后通过洗脱剂进行洗脱，其中，净化柱以活性炭纤维材料和未活化的碳纤维材料为填料形成碳纤维柱。将提取液依次通过填充有未活化的碳纤维材料和活性炭纤维材料的净化柱，净化柱的规格可以是：净化柱的长度为67.6mm，所述净化柱的内径为12.9mm。填充未活化的碳纤维材料的填充量为150
‑
250mg；填充活性炭纤维材料的填充量为150
‑
250mg。优选：未活化的碳纤维材料的填充量为250mg，活性炭纤维材料的填充量为250mg。
[0038]活性炭纤维材料和未活化的碳纤维材料的表面是不同的，其中，活性炭纤维材料的表面是经过氧元素修饰，增大了其比表面积，而未活化的碳纤维材料表面未经过修饰。本专利技术自制净化柱，以活性炭纤维材料和未活化的碳纤维材料对金花葵类活性物质进行吸附，未活化的碳纤维材料通过范德华力、π...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种筛选金花葵中活性物质的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)称取干燥金花葵不同部位粉碎的细粉末，用甲醇水溶液为提取溶剂，采用超声波辅助法进行提取，收集上清液获得金花葵提取液；2)将金花葵提取液先通过净化柱进行净化，对净化后的净化液进行过滤，然后通过洗脱剂进行洗脱，其中，净化柱以活性炭纤维材料和未活化的碳纤维材料为填料；3)上机：先对步骤2)获得的洗脱后的洗脱液通过液相进行梯度洗脱，再通过质谱仪筛选得到金花葵中的活性物质。2.根据权利要求1所述的一种筛选金花葵中活性物质的方法，其特征在于，步骤3)中，液相的流动相A项为0.1％甲酸水溶液，流动相B项为乙腈。3.根据权利要求2所述的一种筛选金花葵中活性物质的方法，其特征在于，流动相A项和流动相B项采用双泵进行洗脱，洗脱过程中采用梯度洗脱，其中，梯度洗脱条件如下表所示：时间流动相A流动相B0
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5min98％2％5
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12min85％15％12
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28min70％30％28
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32min5％95％。4.根据权利要求1所述的一种筛选金花葵中活性物质的方法，其特征在于，在步骤2)的洗脱过程中，洗脱剂采用体积浓度为70～99.9％的甲醇溶液。5.根据权利要求1所述的一种筛选金花葵中活性物质的方法，其特征在于，步骤1)中，选用50％
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【专利技术属性】
技术研发人员：韩鹤友，李继兵，王宇霞，涂嘉，程晓紊，
申请(专利权)人：江苏协合转化医学研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：