一种在宫颈细胞样本中提取DNA的方法技术

本发明专利技术提供一种在宫颈细胞样本中提取DNA的方法，其特征在于，包括：配置细胞核裂解液；用氢氧化钠溶液和盐酸溶液调节所述细胞核裂解液的PH至9.5，得到缓冲液；准备好待提取的第一样本300ul，放入离心机，在1400r/min的转速下离心5分钟，去上清，得到第二样本；在所述第二样本中加入300ul所述缓冲液，放入离心机，在1400r/min的转速下离心5分钟，去上清，得到第三样本；在所述第三样本中再次加入所述缓冲液50ul，得到第四样本；在所述第四样本中加入10ul蛋白酶K溶液和2ul二硫苏糖醇溶液，得到第五样本；将所述第五样本放入聚合酶的链式反应设备，进行反应。通过本方法可实现只取TCT样本，用TCT样本做HPV检测中提取DNA的步骤，同时也可以做HPV检测中提取DNA的步骤，成本低。成本低。

【技术实现步骤摘要】
一种在宫颈细胞样本中提取DNA的方法


[0001]本专利技术涉及医疗化验
，尤其涉及一种在宫颈细胞样本中提取DNA的方法。

技术介绍

[0002]HPV病毒是导致宫颈癌产生的主要病因，99%以上的宫颈癌是由于同一高危型HPV持续感染导致，从HPV感染到癌变大约十年左右，宫颈癌是目前世界上唯一一种可早发现早预防的癌症。
[0003]目前临床上比较普遍的初筛方式是TCT和HPV分型检测。传统的方式是一个客户先做其中一种，然后再做另外一种检测，客户需要取两次样本，耗时较长。如果同时做两种检测就需要取两次样本，但是这样有时会导致客户子宫受伤，并且发现第二次取的样本有一部分会因客户取样出血导致样本混血，血液中血红素会抑制HPV分型检测中的PCR反应，影响实验效果。
[0004]此外，HPV分型检测中传统的磁珠法和柱提法提取宫颈细胞样本中DNA的方法和步骤比较繁琐并且效率较低成本较高。请参考图3和图4，分别是磁珠法和柱提法的流程图。
[0005]综上，目前市场上HPV提取方法成本高性价比高，并且TCT和HPV检测两种方法的样本不能兼容，需要多次取样。此外，HPV检测的主要步骤就是提取样本中的DNA，因此，本专利技术通过专利技术一种在宫颈细胞样本中提取DNA的方法，可实现只取TCT样本，并且用TCT样本做HPV检测中提取DNA的步骤；同时，也可以针对HPV保存液做HPV检测中提取DNA的步骤，成本低，步骤简单。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种在宫颈细胞样本中提取DNA的方法，能解决现有技术中的一系列问题。
[0007]为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：一种在宫颈细胞样本中提取DNA的方法，包括：（1）配置细胞核裂解液，所述细胞核裂解液成分：氯化钠、乙基苯基聚乙二醇、盐酸胍、1mol/l的Tris-HCl溶液、0.1mol/l的乙二胺四乙酸溶液；（2）用氢氧化钠溶液和盐酸溶液调节所述细胞核裂解液的PH至9.5，得到缓冲液；（3）准备好待提取的第一样本300ul，放入EP管中并用离心机，在1400r/min的转速下离心5分钟，去上清，得到第二样本；（4）在所述第二样本中加入300ul所述缓冲液，放入离心机，在1400r/min的转速下离心5分钟，去上清，得到第三样本；（5）在所述第三样本中再次加入所述缓冲液50ul，得到第四样本；（6）在所述第四样本中加入10ul蛋白酶K溶液和2ul二硫苏糖醇溶液，所述蛋白酶K溶液浓度为13mg/ml,所述二硫苏糖醇溶液浓度为0.375g/ml，得到第五样本；（7）将所述第五样本放入聚合酶的链式反应设备，进行反应。
[0008]进一步地，在将所述第五样本放入聚合酶的链式反应设备，进行反应之后，将得到的反应物进行电泳检测。
[0009]进一步地，所述配置细胞核裂解液具体包括：取1L蒸馏水，加入氯化钠0.785g、乙
基苯基聚乙二醇0.4ml、盐酸胍0.785g、1mol/l的Tris-HCl溶液12ml、0.1mol/l的乙二胺四乙酸溶液14ml,搅拌均匀。
[0010]本专利技术的有益效果如下：本专利技术通过专利技术一种在宫颈细胞样本中提取DNA的方法，可实现只取TCT样本，并且用TCT样本做HPV检测中提取DNA的步骤；同时，也可以针对HPV保存液做HPV检测中提取DNA的步骤，相对于市场上医院和体检中心TCT细胞学一个样本，HPV分型检测一个样本，本专利技术可以减少取样次数增加客户体验度，简化流程，用一个TCT样本即可，并且成本低，步骤简单。
附图说明
[0011]此处所说明的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，构成本专利技术的一部分，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0012]图1是一种在宫颈细胞样本中提取DNA的方法的流程图。
[0013]图2是NGS技术流程图。
[0014]图3是磁珠法简易流程图。
[0015]图4是柱提法简易流程图。
[0016]图5是电泳胶图1。
[0017]图6是电泳胶图2。
[0018]具体实施方式
[0019]为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清晰、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0020]请参考图1，本专利技术提供了一种在宫颈细胞样本中提取DNA的方法，包括：（1）配置细胞核裂解液，所述细胞核裂解液成分：氯化钠、乙基苯基聚乙二醇、盐酸胍、1mol/l的Tris-HCl溶液、0.1mol/l的乙二胺四乙酸溶液；所述配置细胞核裂解液具体包括：取1L蒸馏水，加入氯化钠0.785g、乙基苯基聚乙二醇0.4ml、盐酸胍0.785g、1mol/l的Tris-HCl溶液12ml、0.1mol/l的乙二胺四乙酸溶液14ml,搅拌均匀。此处，加入所述氯化钠可以使得所述裂解液中盐离子增加，从而可以增加细胞外渗透压。所述乙基苯基聚乙二醇主要起到清洗剂的作用。所述盐酸胍可以快速的破坏细胞膜，还能够变性蛋白质，使得蛋白质变性沉淀，从而让核酸能够摆脱蛋白质的缠绕。所述Tris-HCl溶液和所述乙二胺四乙酸溶液能够与Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等金属离子结合，可防止金属离子激活蛋白酶，从而减少金属离子对核酸质量的影响。
[0021]（2）用氢氧化钠溶液和盐酸溶液调节所述细胞核裂解液的PH至9.5，得到缓冲液；此处，根据配置好后的所述细胞核裂解液进行酸碱滴定调节PH值。需要说明的是，一般宫颈环境为酸性，而在碱性环境下，特别是在PH=9.5时更有利于DNA提取。
[0022]（3）准备好待提取的第一样本300ul，放入EP管中并用离心机，在1400r/min的转速下离心5分钟，去上清，得到第二样本；去上清后得到的所述所述第二样本约25ul。所述第一
样本可以是取好的TCT样本，也可以是HPV检测样本，即为最初从人体子宫内采取的脱落细胞样本；需要说明的是，所述TCT样本可以是尚未进行TCT检测的样本，也可以是已经做完TCT检测后的样本再次使用，如此更加方便，便捷。
[0023]（4）在所述第二样本中加入300ul所述缓冲液，放入离心机，在1400r/min的转速下离心5分钟，去上清，得到第三样本；本专利技术对离心机的具体型号不做限定，这步中加入所述缓冲液主要对所述第二样本进行洗涤，之后进行离心。
[0024]（5）在所述第三样本中再次加入所述缓冲液50ul，得到第四样本；经过所述步骤（4），所述第三样本中几乎不含所述缓冲液，因此再次加入所述缓冲液，创造PH=9.5的环境，以便满足之后的步骤。
[0025]（6）在所述第四样本中加入10ul蛋白酶K溶液和2ul二硫苏糖醇溶液，所述蛋白酶K溶液浓度为13mg/ml,所述二硫苏糖醇溶液浓度为0.375g/ml，得到第本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种在宫颈细胞样本中提取DNA的方法，其特征在于，包括：（1）配置细胞核裂解液，所述细胞核裂解液成分：氯化钠、乙基苯基聚乙二醇、盐酸胍、1mol/l的Tris-HCl溶液、0.1mol/l的乙二胺四乙酸溶液；（2）用氢氧化钠溶液和盐酸溶液调节所述细胞核裂解液的PH至9.5，得到缓冲液；（3）准备好待提取的第一样本300ul，放入EP管中并用离心机，在1400r/min的转速下离心5分钟，去上清，得到第二样本；（4）在所述第二样本中加入300ul所述缓冲液，放入离心机，在1400r/min的转速下离心5分钟，去上清，得到第三样本；（5）在所述第三样本中再次加入所述缓冲液50ul，得到第四样本；（6）在...

【专利技术属性】
技术研发人员：何金松，段利朋，李振宇，苏贵土，王小飞，黄文树，
申请(专利权)人：厦门希吉亚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：