一种改变植物茎叶及花形态特性的方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种改变植物茎叶及花形态特性的方法及应用，涉及植物培育技术领域。本发明专利技术方法包括：克隆茎瘤芥中基因BjuB033714，以pTF101为目的载体，采用BamH I和Sma I作为酶切位点构建以CAMV35S作为启动子的过表达载体；以茎瘤芥全基因组cDNA为模板，采用PCR的方法扩增BjuB033714的CDS序列；将扩增出的BjuB033714基因进行电泳，并利用回收BjuB033714基因扩增产物片段；使用100μg/mL壮观霉素的LB液体培养基对PCR扩增呈阳性的单菌落进行扩增培养并提取质粒；使用限制性内切酶Sma I和BamH I对提取的质粒进行双酶切以鉴定载体是否构建成功。本发明专利技术公布了一种可改变植物茎和花等形态特征的方法，该方法可用于优质观赏植物品种或作物新品种的培育，包括观赏花卉品种和经济作物，具有显著的经济价值。具有显著的经济价值。具有显著的经济价值。

【技术实现步骤摘要】
一种改变植物茎叶及花形态特性的方法及应用


[0001]本专利技术属于植物培育
，特别是涉及一种改变植物茎叶及花形态特性的方法及应用。

技术介绍

[0002]叶形态和花形态等是观赏植物的重要方面，优质的观赏植物往往具有枝繁叶茂、花瓣形态与众不同等特征，为培育更加具有观赏性的植物往往针对植物的花序形态及花形态等特征进行改良。
[0003]目前，在培育观赏植物和作物新品种时，能引起较好性状的基因比较稀缺。针对此问题，我们筛选到了具有在调控植物叶片和花发育过程中发挥作用的新的基因，结合分子生物学等相关操作方法，可为培育优良观赏及作物品种提供资源。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种改变植物茎叶及花形态特性的方法及应用，以解决了现有的问题：在培育观赏植物和作物新品种时，能引起较好性状的基因比较稀缺。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种改变植物茎叶及花形态特性的方法，包括以下步骤：克隆茎瘤芥中基因BjuB033714，以pTF101为目的载体，采用 BamH I和 Sma I 作为酶切位点构建以CAMV35S作为启动子的过表达载体；以茎瘤芥全基因组cDNA为模板，采用PCR的方法扩增BjuB033714的CDS序列；将扩增出的BjuB033714基因进行电泳，并利用回收BjuB033714基因扩增产物片段；使用100 μg/mL壮观霉素的LB液体培养基对PCR扩增呈阳性的单菌落进行扩增培养并提取质粒；使用限制性内切酶Sma I和BamH I对提取的质粒进行双酶切以鉴定载体是否构建成功。
[0006]进一步优选的，其中，采用PCR的方法扩增BjuB033714的CDS序列，其扩增引物为：BjuB033714
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F：CCAAGCTTATGGAGCCAAGGCAACATA；BjuB033714
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R：CGGGATCCTCAGTTCAGACATAGCTT。
[0007]进一步优选的，其中，将扩增出的BjuB033714基因进行电泳，并利用回收BjuB033714基因扩增产物片段，主要包括：使用限制性内切酶Sma I和BamH I分别对BjuB033714基因扩增产物和pTF101载体进行双酶切，采用1%琼脂糖凝胶电泳对双酶切产物进行检测并回收；用T4DNA连接酶将酶切后的BjuB033714基因片段连接酶切后的pTF101载体，将连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中；将转化后培养40分钟的菌液涂布在含有100 μg/mL壮观霉素的LB固体培养基上；
在37℃培养箱中倒置培养16小时以筛选具有抗性的单菌落；采用2 Taq DNA聚合酶，以培养基上长出的单菌落为模板对单菌落中的BjuB033714基因进行菌落PCR扩增；通过1%琼脂糖凝胶电泳检测含有BjuB033714基因片段的阳性克隆。
[0008]上述的改变植物茎叶及花形态特性的方法的应用，所述方法应用于观赏花卉品种的培育。
[0009]上述的改变植物茎叶及花形态特性的方法的应用，所述方法应用于经济作物的培育。
[0010]本专利技术具有以下有益效果：本专利技术公布了一种改变植物叶片数目和叶面积，改变花序形态、花瓣形态和增加花瓣数目，以及使植物茎上长出花组织的方法，通过转基因等生物学手段将本专利技术中的基因导入植物中，可培育出具有新形态的观赏植物和农作物；本研究公布了一种可改变植物茎和花等形态特征的方法，该方法可用于优质观赏植物品种或作物新品种的培育，包括观赏花卉品种和经济作物，具有显著的经济价值。
具体实施方式
[0011]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0012]本专利技术为一种改变植物茎叶及花形态特性的方法。
[0013]本专利技术采用生物领域前沿的生物工程技术将经济作物茎瘤芥中的BjuB033714基因以转基因的形式导入到其它植物中，使植物表现出在子叶上产生了不定芽可发育为完整的植株，植物叶片形态改变、花序发育提前终止，植株茎上产生额外的花组织以及植株花瓣形态改变及花瓣数目增加等性状，其中花瓣数目增多和茎上生花的性状是在培育新颖的花卉品种方面具有巨大潜力和应用价值。
[0014]参看图1，本专利技术克隆了茎瘤芥中的一个基因BjuB033714（蛋白编码序列全长为870 bp），以pTF101为目的载体，采用BamH I和 Sma I 作为酶切位点构建以CAMV35S作为启动子的过表达载体。
[0015]具体的，参看图2：图2为BjuB033714基因构建至pTF101过表达载体过程。A：BjuB033714基因PCR扩增产物电泳检测图。M为DNA Marker D2000,1为BjuB033714扩增产物电泳条带；B：BjuB033714基因连接pTF101载体并转化大肠杆菌后菌落PCR检测结果，M为DNA Marker D2000,1
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12为12个单克隆菌落PCR扩增产物电泳条带，N为阴性对照，P为阳性对照；C图为构建完毕的BjuB033714
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Ptf101载体酶切鉴定电泳检测图，M为DNA Marker D2000 Plus,1为BjuB033714
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pTF101载体酶切鉴定电泳条带。
[0016]BjuB033714过表达载体构建流程为：如图2 A:首先以茎瘤芥全基因组cDNA为模板，采用PCR的方法扩增BjuB033714的CDS序列，扩增引物为：BjuB033714
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F：CCAAGCTTATGGAGCCAAGGCAACATA， BjuB033714
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R：
CGGGATCCTCAGTTCAGACATAGCTT。
[0017]如图2 B：将扩增出的BjuB033714基因进行1%琼脂糖凝胶电泳，并用凝胶回收试剂盒回收BjuB033714基因扩增产物片段。使用Thermo公司的限制性内切酶Sma I和BamH I分别对BjuB033714基因扩增产物和pTF101载体进行双酶切，采用1%琼脂糖凝胶电泳对酶切产物进行检测并回收，用T4DNA连接酶将酶切后的BjuB033714基因片段连接酶切后的pTF101载体，将连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，并将转化后培养40分钟的菌液涂布在含有100 μg/mL壮观霉素的LB固体培养基上，并在37℃培养箱中倒置培养16小时以筛选具有抗性的单菌落，采用2 Taq DNA聚合酶，以培养基上长出的单菌落为模板对单菌落中的BjuB033714基因进行菌落PCR扩增，通过1%琼脂糖凝胶电泳检测含有BjuB033714基因片段的阳性克隆。
[0018]如图2 C：使用100 μg/mL壮观霉素的LB液体培养基对PCR扩增呈阳性的单菌落进行扩增本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种改变植物茎叶及花形态特性的方法，其特征在于：包括以下步骤：克隆茎瘤芥中基因BjuB033714，以pTF101为目的载体，采用 BamH I和 Sma I 作为酶切位点构建以CAMV35S作为启动子的过表达载体；以茎瘤芥全基因组cDNA为模板，采用PCR的方法扩增BjuB033714的CDS序列；将扩增出的BjuB033714基因进行电泳，并利用回收BjuB033714基因扩增产物片段；使用100 μg/mL壮观霉素的LB液体培养基对PCR扩增呈阳性的单菌落进行扩增培养并提取质粒；使用限制性内切酶Sma I和BamH I对提取的质粒进行双酶切以鉴定载体是否构建成功。2.根据权利要求1所述的一种改变植物茎叶及花形态特性的方法，其特征在于：其中，采用PCR的方法扩增BjuB033714的CDS序列，其扩增引物为：BjuB033714
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F：CCAAGCTTATGGAGCCAAGGCAACATA；BjuB033714
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R：CGGGATCCTCAGTTCAGACATAGCTT。3.根据权利要求1所述的一种改变植物茎叶及花形态特性的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡兆明，程春红，苏少东，向美琴，石家宇，许芳，周美谷，郭海燕，刘金枝，黄星诚，
申请(专利权)人：长江师范学院，
类型：发明
国别省市：