非病毒方法制备稳定高表达嵌合受体的NK细胞技术

本发明专利技术提供了应用非病毒方法制备稳定高表达嵌合受体的自然杀伤(NK)细胞的方法及其应用，所述方法包括：(1)利用转座子系统将嵌合受体的编码基因转入自然杀伤细胞，得到初始的嵌合受体修饰的自然杀伤细胞；(2)利用人工抗原呈递细胞扩增所述初始的嵌合受体修饰的自然杀伤细胞。本发明专利技术应用转座子系统在NK细胞中引入稳定高表达的嵌合受体，与现有技术相比，本发明专利技术的方法操作简便、快速、高效、准确、重复性好、成本效益高、并有较好的安全性，由此制备的嵌合受体修饰的NK细胞具有较强的肿瘤杀伤能力，在体外展现了较好的抗肿瘤效果，在生物医学各个领域、特别是疾病的细胞治疗领域具有广阔的应用前景。广阔的应用前景。广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
非病毒方法制备稳定高表达嵌合受体的NK细胞


[0001]本专利技术属于医学生物工程
，涉及应用非病毒方法制备稳定高表达嵌合受体修饰的NK细胞的 方法及其应用。

技术介绍

[0002]自然杀伤(NK)细胞是先天性免疫系统的重要组成部分，在外周血淋巴细胞中NK细胞的比例约10％， 是继B细胞和T细胞之后的第三大淋巴细胞群体。NK细胞具有多种生物学功能，是人体对抗感染和肿瘤 的第一道防线。NK细胞的功能通过精密且复杂的激活型和抑制型受体网络进行调节。大部分循环的NK 细胞处于静息期，可以被细胞因子活化并浸润到病原体感染或含有恶性细胞的组织中。当NK细胞的受体 与相应的配体结合后，NK细胞还可以分泌一些细胞因子，例如干扰素(IFN)-γ，发挥免疫调节作用。 NK细胞的主要功能之一是对机体进行免疫监督，研究者已发现NK细胞参与控制多种疾病的发生发展。 对哺乳动物细胞(包括人体细胞)的一些体外研究以及对小鼠和大鼠的体内研究表明，NK细胞可以将肿 瘤细胞识别为靶标，并在体内控制肿瘤细胞的生长、转移和扩散。一项为期11年的随访流行病学调查显 示，外周血N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用非病毒转座子系统和人工抗原呈递细胞制备嵌合受体修饰的自然杀伤细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)利用转座子系统将嵌合受体的编码基因转入自然杀伤细胞，得到初始的嵌合受体修饰的自然杀伤细胞；(2)利用人工抗原呈递细胞扩增所述初始的嵌合受体修饰的自然杀伤细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述自然杀伤细胞包括人原代自然杀伤细胞；所述人原代自然杀伤细胞来源于外周血、脐带血或诱导性多能干细胞。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述嵌合受体包括嵌合抗原受体和/或嵌合转换受体。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述转座子系统包括piggyBac转座子系统、Sleeping Beauty转座子系统或Tol2转座子系统。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述转座子系统包括转座子元件和转座酶元件。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述转座子元件包括转座子5
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反向末端重复序列和3
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反向末端重复序列；所述5
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反向末端重复序列和3
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反向末端重复序列之间含有两个绝缘子；所述两个绝缘子之间含有启动子和嵌合受体的编码基因；所述转座子元件为质粒或线性化核酸片段。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述转座酶元件包括转座酶蛋白或编码转座酶的核酸分子；所述编码转座酶的核酸分子包括质粒、线性化核酸片段或mRNA。8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述转座子元件和转座酶元件连接在同一表达载体上。9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述转座子元件和转座酶元件在不同的表达载体上。10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述转座子系统通过电穿孔和/或化学试剂转入自然杀伤细胞。11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)之前还包括活化自然杀伤细胞的步骤。12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述活化自然杀伤细胞采用人工抗原呈递细胞、饲养细胞、细胞因子、抗体或...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖琳，裘新红，彭群武，张亮，朱苏闽，徐芳芳，
申请(专利权)人：杭州优凯瑞医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：