一种应用非病毒方法制备高纯度嵌合抗原受体修饰的T细胞的方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种利用转座子系统和人工抗原呈递细胞制备高纯度NKG2D嵌合抗原受体修饰的T细胞的方法及其应用，所述方法包括：(1)利用piggyBac转座子系统将NKG2D嵌合抗原受体的编码基因转入T细胞，得到初始的NKG2D嵌合抗原受体修饰的T细胞；(2)将所述初始的NKG2D嵌合抗原受体修饰的T细胞与人工抗原呈递细胞共培养。本发明专利技术采用非病毒的方法，利用piggyBac转座子系统和K562人工抗原呈递细胞制备、扩增和富集嵌合抗原受体修饰的T细胞，材料简单、生产周期短、生产成本低、重复性好、安全性高、NKG2D CAR纯度高达90％以上、对肿瘤细胞具有显著的杀伤作用，同时可以抑制肿瘤细胞生长。由于多种肿瘤细胞高表达NKG2D配体，本发明专利技术在肿瘤治疗领域具有广泛的应用前景。肿瘤治疗领域具有广泛的应用前景。肿瘤治疗领域具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种应用非病毒方法制备高纯度嵌合抗原受体修饰的T细胞的方法及其应用


[0001]本专利技术属于医学生物工程
，具体涉及一种利用非病毒转座子系统和人工抗原呈递细胞制备高纯度嵌合抗原受体修饰的T细胞的方法及其应用。

技术介绍

[0002]免疫疗法在癌症治疗中展现出了巨大的潜力，被认为是最有希望攻克癌症的方法，其中嵌合抗原受体(CAR)修饰的免疫细胞是目前的热门研究领域。基于CAR修饰的T(CAR-T)细胞的治疗方法是将患者的T细胞重新定向到特定的肿瘤细胞，并摧毁肿瘤细胞的方法。CAR是一种基因工程融合蛋白，主要由抗原识别区域和胞内信号转导区域组成。目前，CAR-T在治疗B细胞恶性肿瘤中得到了广泛的研究，其中诺华和凯特的anti-CD19 CAR-T已经被FDA批准用于治疗急性淋巴细胞白血病和大B淋巴细胞癌。越来越多的研究者开始探索CAR-T在实体肿瘤治疗中的应用前景。
[0003]由于NKG2D能够识别MIC和ULBP家族中8个在癌细胞中明显上调的相关配体，NKG2D CAR在过去几年中受到了越来越广泛的关注。在MIC家族中，由于等位本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用转座子系统和人工抗原呈递细胞制备NKG2D嵌合抗原受体修饰的T细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)利用piggyBac转座子系统将NKG2D嵌合抗原受体的编码基因转入T细胞，得到初始的NKG2D嵌合抗原受体修饰的T细胞；(2)将所述初始的NKG2D嵌合抗原受体修饰的T细胞与人工抗原呈递细胞共培养。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述T细胞来源于外周血、脐带血或诱导性多能干细胞。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述piggyBac转座子系统包括供体载体和辅助载体。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述供体载体包括piggyBac转座子5
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反向末端重复序列和3
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反向末端重复序列；所述5
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反向末端重复序列和3
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反向末端重复序列之间含有两个鸡β-珠蛋白染色质绝缘子cHS4；所述两个鸡β-珠蛋白染色质绝缘子cHS4之间含有NKG2D嵌合抗原受体表达框；所述NKG2D嵌合抗原受体表达框包括启动子和NKG2D嵌合抗原受体编码基因。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述辅助载体包括piggyBac转座酶表达框；所述piggyBac转座酶表达框包括启动子和piggyBac转座酶编码基因。6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述供体载体和辅助载体的质量比为(1～5):1。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述NKG2D嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、铰链区、跨膜结构域和胞内信号转导结构域，所述抗原结合结构域来自NKG2D的胞外段。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述piggyBac转座子系统通过电穿孔转入T细胞。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)之前选择性地进行活化T细胞的步骤。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述活化T细胞采用抗体和/或抗体包被微粒进行。11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述抗体包括抗人CD3抗体、抗人CD3抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖琳，裘新红，彭群武，张亮，朱苏闽，徐芳芳，吕学维，
申请(专利权)人：杭州优凯瑞医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：