【技术实现步骤摘要】
同时检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV多重荧光PCR检测试剂盒及方法
[0001]本专利技术涉及体外诊断、病原检测
,更具体地说,涉及同时检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV多重荧光PCR检测试剂盒及方法。
技术介绍
[0002]随着我国水产养殖业的迅速发展,高密度集约化养殖模式导致了养殖水环境逐渐恶化导致虾病的广泛流行,由于虾病发病迅速、传播速度快,可导致对虾生长极其缓慢、停滞、死亡等原因,2018年水产养殖圆桌会议上有报告指出,虾病每年至少造成200亿美元的损失。白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)和传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus,IHHNV)虾病具有世界爆发流行性,近几年虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)和虾血细胞虹彩病毒(Shrimp hemocyte iridescent virus,SHIV)虾病在我国也开始流行,虾病防疫尤其重要。多种虾病目前仍无有效治疗药物和疫苗接种方法,因此在虾苗检疫、亲虾筛选及成虾养殖过程中及时准确对虾病进行检测,对虾养殖模式制定相应措施,对有效防控虾病具有重要意义。
[0003]目前虾病的检测方法主要包括组织病理学和分子生物学。光学显微镜诊断:光学显微镜诊断法具有方便、快速、简单等优点,但是对工作人员的实践经验要求较高;胶体金免疫层析技术检测法:检测快捷 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.同时检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV多重荧光PCR检测试剂盒,其特征在于:包括冻干固态PCR Mix,液态复溶Buffer、冻干固态阴性对照和冻干固态阳性对照,所述冻干固态PCR Mix含有WSSV VP644基因、IHHNV NS2基因、EHP 18s基因和SHIV MCP基因对应的特异性引物探针序列组;所述冻干固态PCR Mix含有WSSV上游引物序列如SEQ ID NO:1所示,下游引物序列如SEQ ID NO:2所示,探针序列如SEQ ID NO:3所示;IHHNV上游引物序列如SEQ ID NO:4所示,下游引物序列如SEQ ID NO:5所示,探针序列如SEQ ID NO:6所示;EHP上游引物序列如SEQ ID NO:7所示,下游引物序列如SEQ ID NO:8所示,探针序列如SEQ ID NO:9所示;SHIV上游引物序列如SEQ ID NO:10所示,下游引物序列如SEQ ID NO:11所示,探针序列如SEQ ID NO:12所示;具体核苷酸序列如下:WSSV引物探针序列为:上游引物SEQ ID NO:1:5
’‑
CAATGGTCCCGTCCTCATCT
‑3’
下游引物SEQ ID NO:2:5
’‑
AGCTGCCTTGCCGGAAA
‑3’
探针SEQ ID NO:3:5
’‑
AGCCATGAAGAATGCCGTCTATCACACACT
‑3’
;IHHNV引物探针序列为:上游引物SEQ ID NO:4:5
’‑
CCATTACAGATCATGGTGACCACT
‑3’
下游引物SEQ ID NO:5:5
’‑
GTAACTCCCAAATAGGCGAGG
‑3’
探针SEQ ID NO:6:5
’‑
CGGACACCCAACCAATAAGACCAGA
‑3’
;EHP引物探针序列为:上游引物SEQ ID NO:7:5
’‑
GGGCAAAGAATGAAATCTCAAGA
‑3’
下游引物SEQ ID NO:8:5
’‑
CCCAGATACGTCTAAGAGCATCG
‑3’
探针SEQ ID NO:9:5
’‑
CACCTGGACCAACGGAGGCGAA
‑3’
;SHIV引物探针序列为:上游引物SEQ ID NO:10:5
’‑
TGGACCAAACATTTGGATTGG
‑3’
下游引物SEQ ID NO:11:5
’‑
TTACGACATCAGGTTCCAGAGAAC
‑3’
探针SEQ ID NO:12:5
’‑
TTCCTGACACCGAAGAAGAGAGCCTT
‑3’
。2.根据权利要求1所述的同时检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV多重荧光PCR检测试剂盒,其特征在于:所述冻干固态PCR Mix在冻干前全预混液包括以下组分:dATP、dGTP、dCTP、dUTP、DNA聚合酶、UDG酶、WSSV VP644基因F/R
‑
P、IHHNV NS2基因F/R
‑
P、EHP 18s基因F/R
‑
P、SHIV MCP基因F/R/P、冻干复合...
【专利技术属性】
技术研发人员:朱灵,崔俊生,朱灿灿,杨柯,胡安中,赵俊,刘勇,邓国庆,
申请(专利权)人:合肥中科易康达生物医学有限公司,
类型:发明
国别省市:
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