调控脐带间充质干细胞免疫抑制作用的产品、方法及用途技术

本发明专利技术公开了转录生长因子诱导蛋白(TGFBI)是hUC

【技术实现步骤摘要】
调控脐带间充质干细胞免疫抑制作用的产品、方法及用途


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种调控脐带间充质干细胞免疫抑制作用的产品、方法及用途。

技术介绍

[0002]人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,hUC
‑
MSCs)是存在于脐带华通氏胶和血管周围组织中的一种间充质干细胞，具有向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞分化的多向分化潜能和强大的免疫调节作用。hUC
‑
MSCs因其取材方便，无道德伦理争议，可获取的细胞数量多、增殖能力强、免疫调节作用大，分泌细胞生长因子种类多，便于扩增和传代，同时无配型、排异等优点，成为临床研究和应用的理想MSCs来源。经典的骨髓来源MSCs存在年龄的差异和传代的老化等现象，脂肪组织来源的MSCs的成骨分化能力较弱并且可以体外促进肿瘤的生长。hUC
‑
MSCs与其他来源的MSCs具有相似的生物学特性，可以自我更新并保持多能性，且hUC
‑
MSCs不存在年龄的差异，另外脐带组织属于正常分娩的废弃物，也不存在伦理的问题，因此脐带组织来源的MSCs应该是细胞治疗的良好来源，具有更广阔的临床应用前景。
[0003]免疫抑制功能是MSCs独特的生物学特性和被应用与研究的基础。MSCs强大的免疫调节作用体现在：1)MSCs具有低免疫原性，其表面低表达MHC I类分子，不表达MHC II类分子及共刺激分子CD40、CD80、CD86，可诱导免疫耐受，不引起自身反应性T细胞增殖，保证了移植后不引起宿主免疫排斥反应，可在宿主内存活并发挥功能。2)MSCs具有较强的免疫调节功能，它可通过细胞间接触和分泌细胞因子抑制免疫细胞，如T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞的增殖和功能，抑制Th1的分化，促进Tregs分化，调控巨噬细胞由M1型向M2型极化，并在体内和体外调节抗原提呈细胞的活性，从而抑制机体的炎症反应，达到治疗自身免疫型糖尿病即I型糖尿病(Type I diabetes mellitus,T1DM)、急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGvHD)等炎性疾病的目的。
[0004]然而，目前对MSCs的免疫调控机制的研究并不十分深入，在临床转化中其疗效亦不如预期。为了进一步探究MSCs的免疫调控机制及其对T1DM的疗效的影响，目前国内外均未见TGFBI调控MSCs发挥免疫抑制作用及其分子机制的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供了一种新的免疫调节分子TGFBI介导人脐带间充质干细胞(hUC
‑
MSCs)调控T细胞增殖作用；并提供TGFBI在制备调控脐带间充质干细胞免疫抑制作用的产品中的应用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术具体技术方案如下：
[0007]本专利技术发现TGFBI在脐带MSC中高表达；通过将敲低TGFBI基因表达的hUC
‑
MSCs与T细胞共培养实验发现，TGFBI可以调控人脐带间充质干细胞抑制T细胞增殖作用。
[0008]基于此，本专利技术第一方面提供了TGFBI在制备调控脐带间充质干细胞免疫抑制作
用的产品中的应用。
[0009]进一步地，所述TGFBI敲低后脐带间充质干细胞免疫抑制作用显著降低。
[0010]进一步地，所述脐带间充质干细胞免疫抑制作用包括脐带间充质干细胞对T细胞增殖抑制作用。
[0011]在本专利技术中，所述TGFBI敲低的脐带间充质干细胞对T细胞增殖的抑制作用显著减弱。所述hUC
‑
MSCs中的TGFBI可以通过调节T细胞中的CyclinD2的表达而抑制T细胞增殖。
[0012]第二方面，本专利技术提供了一种调控脐带间充质干细胞免疫抑制作用的制剂，所述制剂包括能够抑制或促进间充质干细胞中TGFBI表达的制剂。
[0013]进一步地，所述抑制间充质干细胞中TGFBI表达的技术包括小分子抑制剂，RNA干扰和CRISPR/Cas系统。
[0014]优选地，RNA干扰技术。
[0015]进一步地，所述RNA干扰包括采用TGFBI的shRNA或siRNA抑制TGFBI表达。
[0016]进一步地，所述TGFBI的shRNA或siRNA的干扰靶序列包括如SEQ ID NO:5～7所示的核苷酸序列，优选地，SEQ ID NO:6。
[0017]第三方面，本专利技术提供了一种调控脐带间充质干细胞免疫抑制作用的方法，所述方法包括以下步骤：
[0018](1)构建慢病毒sh
‑
TGFBI载体构建，并转染脐带间充质干细胞；
[0019](2)将转染慢病毒sh
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TGFBI载体的间充质干细胞与T淋巴细胞共培养。
[0020]进一步地，所述步骤(2)中T淋巴细胞同时用anti
‑
CD3抗体刺激活化。
[0021]优选地，使用1μg/ml anti
‑
CD3抗体刺激活化T细胞。
[0022]在一具体的实施方案中，anti
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CD3抗体用PBS稀释为1μg/ml，加入到96孔板(50μl/孔)，转移至37℃孵育2h；弃掉96孔板的包被液，分别用PBS洗涤2次，按照MSC：T＝1:5的比例分别加入经CFSE染色的T淋巴细胞和sh
‑
TGFBI
‑
hUC
‑
MSCs，共培养72h；
[0023]基于上述技术方案，本专利技术具有以下有益效果：
[0024]本专利技术发现转录生长因子诱导蛋白(TGFBI)在hUC
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MSCs中持续稳定高表达，并发现TGFBI可以调控hUC
‑
MSCs免疫抑制作用，并且是通过调控T细胞增殖实现。证实了TGFBI可以作为脐带MSC新的免疫抑制分子，为临床使用脐带MSC治疗系统性红斑狼疮、I型糖尿病、自身免疫性脑脊髓炎、骨关节炎等自身免疫性疾病提供了理论基础和治疗靶点。
附图说明
[0025]图1q
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PCR检测TGFBI在连续传代的hUC
‑
MSCs中表达情况。
[0026]图2A：流式细胞术检测3中shRNA转染效率；B：q
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PCR验证3种shRNA对hUC
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MSCs的敲低效率；C：荧光显微镜观察转染sh
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TGFBI的hUC
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MSCs绿色荧光蛋白表达；D：Western Blot检测经慢病毒敲低hUC
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MSCs的敲低效率；E：q
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PCR检测经慢病毒敲低hUC
‑
MSCs的敲低效率。
[0027]图3sh
‑
TGFBI
‑
hUC
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.TGFBI在制备调控脐带间充质干细胞免疫抑制作用的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述TGFBI敲低后脐带间充质干细胞免疫抑制作用显著降低。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述脐带间充质干细胞免疫抑制作用包括脐带间充质干细胞对T细胞增殖抑制作用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述TGFBI敲低的脐带间充质干细胞对T细胞增殖的抑制作用显著减弱。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述hUC
‑
MSCs中的TGFBI通过调节T细胞中的CyclinD2的表达而抑制T细胞增殖。6.一种调控脐带间充质干细胞免疫抑制作用的制剂，其特征在于，所述制剂包括能够抑制或促进间充质干细胞中TGFBI表达的制剂。7.根据权利要求6所...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书五页序列表二页附图二页，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：