一种电渗析制备1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的方法技术

一种电渗析制备1,4

【技术实现步骤摘要】
一种电渗析制备1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的方法


[0001]本专利技术涉及一种电渗析制备1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的方法。

技术介绍

[0002]1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸分子C15H23N6O5S+
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C4H9O6S2
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0.65C4H10O6S2，分子量758.55。是由Knool公司开发，于1993 年在意大利以Tranametil( 思美泰) 商品名上市，用于治疗胆汁淤积。其活性成分为腺苷蛋氨酸阳离子，1,4
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丁二磺酸作为阴离子与其配对达到稳定其结构的作用，不具药理活性。
[0003]腺苷蛋氨酸(Ademetionine) 是甲硫氨酸在生物体内的活性形式，作为重要的甲基、巯基和氨丙基供体参与多种代谢。临床上被广泛用于多种肝脏相关疾病的治疗，如肝内胆汁淤积、药物性肝损伤、病毒性肝炎和酒精性肝病等。
[0004]中国专利申请201310379731.7中公开了一种1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法，该制备方法是：将腺苷蛋氨酸产生菌的发酵液酸化、过滤后得湿菌体，干燥，冻融处理，将无机强酸的水溶液和湿菌体混合均匀；将含破壁菌体的酸液于陶瓷膜中过滤，并添加无机强酸的水溶液，收集滤液；将滤液过纳滤膜，得浓缩液A ；过中等极性大孔吸附树脂柱，水洗后得流出液B ；过H+型大孔弱酸性阳离子交换树脂柱，用1,4
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丁二磺酸洗脱H+型大孔酸性阳离子交换树脂柱，分布收集并将流出液C 合并；将收集液依次过超滤膜和纳滤膜；将浓缩液D 和1,4
‑ꢀ
丁二磺酸混合，调节1,4
‑ꢀ
丁二磺酸与腺苷蛋氨酸比例，干燥后即得。该申请中过H+型大孔弱酸性阳离子交换树脂柱，包括pH 值调节至4.5 ～6.0 后，用水洗脱除盐，用0.01 ～0.02mol/L 的醋酸水溶液洗脱除杂，再用水洗脱除醋酸，用pH 值为3 ～5 的1,4
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丁二磺酸洗脱所述的H+型大孔酸性阳离子交换树脂柱。分离纯化工序繁琐、复杂，收率低。且pH 值为3 ～5 的1,4
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丁二磺酸需要由1,4
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丁二磺酸钠脱钠制备，进一步增加了分离纯化的过程。另外树脂活化、再生需要用到酸溶液，增加了废水的排放。
[0005]因此，研究开发新的分离纯化技术，实现能通过1,4
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丁二磺酸钠和初步提纯后的腺苷蛋氨酸，得到1,4丁
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二磺酸腺苷蛋氨酸盐粗品，粗品再经纯化、干燥，得到纯度高的1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸干燥产品的方法，是目前1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐生产中亟待解决的难题。

技术实现思路

[0006]本专利技术其目的就在于提供一种电渗析制备1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的方法，以解决上述
技术介绍
中的问题，该方法具有操作简单、收率高、成本低、绿色环保，适于工业化生产的特点。
[0007]为实现上述目的而采取的技术方案是，一种电渗析制备1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的方法，该方法包括以下步骤：（1）采用发酵法获得腺苷蛋氨酸的酵母发酵液，所述的发酵法包括以下步骤：
①
将腺苷蛋氨酸产生菌接种于斜面培养基进行斜面培养；
②
将生长好的斜面接种于种子培养基
进行种子培养；
③
将种子液接种至基础培养基进行好氧发酵；
④
当培养液糖浓度降至≤0.05g/L时，流加补糖培养基，调节发酵罐参数，使DO≥30%，补糖培养基补加流速为8～12g糖/h/L基础培养基；
⑤
当发酵液的生物量至0.15g/mL～0.2g/mL（湿菌体/发酵液）时，补加流速为，补加流速为0.8～1.5g蛋氨酸/h/L基础培养基；
⑥
发酵至48～72h时，获得腺苷蛋氨酸的酵母发酵液，下罐；（2）获得菌体：下罐后的酵母发酵液，用陶瓷膜设备，去除大部分发酵残留培养基，至湿菌体浓度至50%～60%，获得菌液；（3）清洗菌体：在陶瓷膜设备中，将上述菌液，加纯化水清洗，至菌体浓度至50%～60%，出水电导率＜1500μs/min；（4）破碎菌体：采用快速升温降温法，将清洗后的菌体快速升温至70～80℃，保温15～30min后，快速降温至室温；（5）获得腺苷蛋氨酸粗液：将上述菌体破碎液，过陶瓷膜设备，并加纯化水清洗至出水电导率＜3000μs/min，收集得到透出液；（6）超滤除杂：将透出液通过截留分子量为5～10KD的聚醚砜材质的有机膜，收集得到滤出液；（7）纳滤浓缩、除无机盐：将滤出液通过截留分子量为200～400D的聚酰胺材质的有机膜，收集腺苷蛋氨酸浓度在5～10g/L的截留液，获得腺苷蛋氨酸的浓缩液；（8）电渗析成盐：向腺苷蛋氨酸的浓缩液中加入1,4
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丁二磺酸钠，在电渗析装置中采用两室双极膜置换，收集物料回流液，得到1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐粗品。
[0008]（9）脱色提纯：将1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐粗品流过大孔吸附树脂，获得溶液中腺苷蛋氨酸HPLC的检测结果≥98%的1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐；（10）干燥：将高纯度的1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐通过真空冷冻干燥或喷雾干燥，获得1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的干燥品。
[0009]进一步，所述步骤（1）中的腺苷蛋氨酸产生菌为面包酵母菌种。
[0010]进一步，所述步骤（1）中的斜面培养基含有：酵母粉1%、牛肉蛋白胨2%、葡萄糖2%、琼脂2%，斜面培养基的培养温度为25℃～35℃，培养时间24～48h。
[0011]进一步，所述步骤（1）中的种子培养基含有：酵母粉1%、牛肉蛋白胨2%、葡萄糖2%，种子培养基的培养温度为25℃～35℃，培养时间12
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24h。
[0012]进一步，所述步骤（1）中的发酵基础培养基含有：硫酸铵、七水硫酸镁、七水硫酸锌、葡萄糖、磷酸二氢钾，发酵基础培养基的培养温度为25℃～35℃，pH为4～6；所述步骤（1）中的补糖培养基含有：七水硫酸镁、硫酸钾、硫酸钠、葡萄糖、磷酸二氢钾；所述步骤（1）中的诱导培养基含有：七水硫酸镁、硫酸钾、硫酸钠、葡萄糖、磷酸二氢钾、蛋氨酸。
[0013]进一步，所述步骤（2）、步骤（3）和步骤（5）中的陶瓷膜孔径均为20～200nm。
[0014]进一步，所述步骤（8）中腺苷蛋氨酸的浓缩液中加入1,4
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丁二磺酸钠，使1,4
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丁二磺酸与腺苷蛋氨酸的摩尔比为1.6～1.7。
[0015]进一步，所述步骤（8）中的电渗析装置中采用两室双极膜置换为双极膜和阳离子交换膜二室法，输出电压为25V、输出电流为4.4A，电极液为2%～本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种电渗析制备1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：采用发酵法获得腺苷蛋氨酸的酵母发酵液，所述的发酵法包括以下步骤：
①
将腺苷蛋氨酸产生菌接种于斜面培养基进行斜面培养；
②
将生长好的斜面接种于种子培养基进行种子培养；
③
将种子液接种至基础培养基进行好氧发酵；
④
当培养液糖浓度降至≤0.05g/L时，流加补糖培养基，调节发酵罐参数，使DO≥30%，补糖培养基补加流速为8～12g糖/h/L基础培养基；
⑤
当发酵液的生物量至0.15g/mL～0.2g/mL（湿菌体/发酵液）时，补加流速为，补加流速为0.8～1.5g蛋氨酸/h/L基础培养基；
⑥
发酵至48～72h时，获得腺苷蛋氨酸的酵母发酵液，下罐；获得菌体：下罐后的酵母发酵液，用陶瓷膜设备，去除大部分发酵残留培养基，至湿菌体浓度至50%～60%，获得菌液；清洗菌体：在陶瓷膜设备中，将上述菌液，加纯化水清洗，至菌体浓度至50%～60%，出水电导率＜1500μs/min；破碎菌体：采用快速升温降温法，将清洗后的菌体快速升温至70～80℃，保温15～30min后，快速降温至室温；获得腺苷蛋氨酸粗液：将上述菌体破碎液，过陶瓷膜设备，并加纯化水清洗至出水电导率＜3000μs/min，收集得到透出液；超滤除杂：将透出液通过截留分子量为5～10KD的聚醚砜材质的有机膜，收集得到滤出液；纳滤浓缩、除无机盐：将滤出液通过截留分子量为200～400D的聚酰胺材质的有机膜，收集腺苷蛋氨酸浓度在5～10g/L的截留液，获得腺苷蛋氨酸的浓缩液；电渗析成盐：向腺苷蛋氨酸的浓缩液中加入1,4
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丁二磺酸钠，在电渗析装置中采用两室双极膜置换，收集物料回流液，得到1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐粗品。2.脱色提纯：将1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐粗品流过大孔吸附树脂，获得溶液中腺苷蛋氨酸HPLC的检测结果≥98%的1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐；干燥：将高纯度的1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐通过真空冷冻干燥或喷雾干燥，获得1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的干燥品。3.根据权利要求1所述的一种电渗析制备1,4
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丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的腺苷蛋氨酸产生菌为面包酵母菌种。4.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张秋华，黄刘女，王杰，周芬，何娟，丁慧，
申请(专利权)人：江西兄弟医药有限公司，
类型：发明
国别省市：