一组用于检测小麦赤霉病主效抗病基因基因型的引物组合、试剂或试剂盒及应用和方法技术

本发明专利技术涉及植物保护技术领域，特别是涉及一组用于检测小麦赤霉病主效抗病基因基因型的引物组合、试剂或试剂盒及应用和方法。本发明专利技术提供了一组用于检测小麦赤霉病主效抗病基因基因型的引物组合，所述引物组合包括Fhb1

【技术实现步骤摘要】
Genetics,2018,131(11):2371
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2380)。因此，建立一种新的基于PCR技术的基因分型法来快捷、准确、低成本地检测小麦主效抗赤霉病基因Fhb1的基因型已成为育种应用中重要问题。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术提供了一组用于检测小麦赤霉病主效抗病基因基因型的引物组合、试剂或试剂盒及应用和方法。本专利技术所述引物组合能够快捷、准确、低成本地检测小麦主效抗赤霉病基因Fhb1的基因型。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一组用于检测小麦赤霉病主效抗病基因基因型的引物组合，所述引物组合包括Fhb1
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4引物对和fhb1
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4引物对；
[0008]所述Fhb1
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4引物对包括Fhb1
‑
4F和Fhb1
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4R；所述Fhb1
‑
4F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Fhb1
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4R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
[0009]所述fhb1
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4引物对包括fhb1
‑
4F和fhb1
‑
4R；所述fhb1
‑
4F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述fhb1
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4R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0010]本专利技术提供了上述引物组合在制备检测或辅助检测小麦赤霉病主效基因基因型的工具中的应用。
[0011]本专利技术提供给了一种用于检测小麦赤霉病主效基因基因型的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上述引物组合。
[0012]本专利技术提供了上述引物组合或上述的试剂或试剂盒在小麦抗赤霉病育种中的应用。
[0013]本专利技术提供了上述引物组合或上述试剂或试剂盒在检测或辅助检测小麦赤霉病主效基因基因型中的应用。
[0014]本专利技术提供给了一种用于检测或辅助检测小麦赤霉病主效基因基因型的方法，包括以下步骤：
[0015]以待测样品的DNA为模板DNA，与上述引物组合或上述试剂或试剂盒中的引物对中的Fhb1
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4引物组混合进行PCR扩增；
[0016]以待测样品的DNA为模板DNA，与上述引物组合或上所述试剂或试剂盒中的引物对中的fhb1
‑
4引物组混合进行PCR扩增；
[0017]若引物对Fhb1
‑
4能扩增出747bp条带且fhb1
‑
4不能扩增出753bp条带，则该样品为含有赤霉病主效抗病等位基因Fhb1
‑
R的纯合样品；
[0018]若引物对Fhb1
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4能扩增出747bp条带且引物对fhb1
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4能扩增出753bp条带，则该样品为含赤霉病主效抗病等位基因Fhb1
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R的杂和样品；
[0019]若引物对Fhb1
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4不能扩增出747bp条带且引物对fhb1
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4能扩增出753bp条带，则样品为不含赤霉病主效抗病等位基因Fhb1
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R的纯合样品。
[0020]优选的，所述PCR扩增的反应程序包括：95℃预变性5min；95℃变性30s、60℃复性30s、72℃延伸1min，30次循环；然后72℃延伸10min，10℃冷却10min。
[0021]优选的，当采用Fhb1
‑
4引物对进行PCR扩增时，所述PCR扩增的反应体系以20μL计，包括模板DNA2.0μL、含25mmol/LMgCl2的10
×
PCR Buffer 2.0μL、dNTP 0.4μL、Fhb1
‑
4F 0.4μL、Fhb1
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4R 0.4μL、Taq 0.4μL和ddH2O 14.4μL；
[0022]当采用fhb1
‑
4引物对进行PCR扩增时，所述PCR扩增的反应体系以20μL计，包括模板DNA 2.0μL、含25mmol/LMgCl2的10
×
PCR Buffer 2.0μL、dNTP0.4μL、fhb1
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4F 0.4μL、fhb1
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4R 0.4μL、Taq 0.4μL和余量的ddH2O。
[0023]优选的，所述Fhb1
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4F、Fhb1
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4R、fhb1
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4F和fhb1
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4R的工作浓度均为10μM；所述模板DNA的工作浓度为100ng/μL；所述dNTP的工作浓度为2.5mmol/L；所述Taq的工作浓度为5U/μL。
[0024]优选的，所述待测样品优选包括小麦叶片。
[0025]有益效果：
[0026]本专利技术提供了本专利技术提供了一组用于检测小麦赤霉病主效抗病基因基因型的引物组合，所述引物组合具有快捷、准确、低成本地检测小麦主效抗赤霉病基因Fhb1的基因型的优势，利用本专利技术提供的引物组合在种子发芽后即可进行植株的基因型检测，无需通过田间大群体鉴定筛选，从而提高选择筛选效率，降低育种成本。本专利技术提供的引物组合是根据小麦抗赤霉病基因Fhb1抗感等位基因序列差异进行开发的，因此，利用该引物组合可以实现对赤霉病主效抗病基因Fhb1不同基因型的准确鉴定。在抗赤霉病育种中，利用本专利技术提供的引物组合不存在由于标记和基因间的遗传交换而造成基因型鉴定的错误；而且本专利技术所述引物组合是根据基因内部序列开发而成，故在引物组合辅助选择育种的过程中不会造成目标基因丢失。同时，对杂交世代进行基因跟踪鉴定，能加快早代稳定，从而缩短育种年限，提高选育含Fhb1基因的抗赤霉病小麦品种的选择效率。
[0027]此外，引物对Fhb1
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4和引物对fhb1
‑
4扩增产物大小均在800bp以下，在目标基因检测过程中花费的时间相对较少且对引物、酶类、技术等没有特殊要求，具有操作简单、准确性高、成本低廉的优势，适合应用于对大量小麦资源和育种群体材料的检测和筛选。
附图说明
[0028]图1为检测Fhb1抗感等位基因引物组合的检测与验证，其中M为DL2000DNA marker(分子量100～2000bp)，泳道1和泳道2是以泗1516为模板，用引物对fhb1
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4进行检测的结果；泳道3是以苏麦3号为模板，用标记fhb1
‑
4进行检测的结果，泳道4和泳道5是以苏麦3号为模板，用引物对Fhb1
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4进行检测的结果，泳道6是以泗1516为模板，用引物对Fhb1
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4进行检测的结果；
[0029]图2为Fhb1
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4引物对、fhb1
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4引物对对不同小麦品种(系)的Fhb1等位基因检本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一组用于检测小麦赤霉病主效抗病基因基因型的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括Fhb1
‑
4引物对和fhb1
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4引物对；所述Fhb1
‑
4引物对包括Fhb1
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4F和Fhb1
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4R；所述Fhb1
‑
4F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Fhb1
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4R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述fhb1
‑
4引物对包括fhb1
‑
4F和fhb1
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4R；所述fhb1
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4F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述fhb1
‑
4R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。2.权利要求1所述引物组合在制备检测或辅助检测小麦赤霉病主效基因基因型的工具中的应用。3.一种用于检测小麦赤霉病主效基因基因型的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括权利要求1所述引物组合。4.权利要求1所述引物组合或权利要求4所述的的试剂或试剂盒在小麦抗赤霉病育种中的应用。5.权利要求1所述引物组合或权利要求3所述的试剂或试剂盒在检测或辅助检测小麦赤霉病主效基因基因型中的应用。6.一种用于检测或辅助检测小麦赤霉病主效基因基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：以待测样品的DNA为模板DNA，与权利要求1所述引物组合或权利要求3所述试剂或试剂盒中的引物对中的Fhb1
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4引物组混合进行PCR扩增；以待测样品的DNA为模板DNA，与权利要求1所述引物组合或权利要求3所述试剂或试剂盒中的引物对中的fhb1
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4引物组混合进行PCR扩增；若引物对Fhb1
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4能扩增出747bp条带且fhb1
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4不能扩增出753bp条带，则该样品为含有赤霉病主效抗病等位基因Fhb1
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R的纯合样品；若引物对Fhb1
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4能扩增出747bp条带...

【专利技术属性】
技术研发人员：张善磊，崔小平，王卫军，刘晓飞，赖上坤，田胜营，赖尚科，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院宿迁农科所，
类型：发明
国别省市：