一种人SERPINB7基因突变快速分型检测方法技术

本发明专利技术公开了一种人SERPINB7基因突变快速分型检测方法，包括一系列不同位点的引物探针组合物，以及对应的快速分型检测方法。本发明专利技术所设计引物探针组合物可以检测SERPINB7基因c.796C>T、c.522_523insT、c.650_653delCTGT、c.806_818delinsT四个突变位点，具有优异的特异性。通过TaqMan检测方法，本发明专利技术可以特异、准确、快速地检测长岛型掌趾角化症致病性基因，并适用于大规模推广应用。并适用于大规模推广应用。

【技术实现步骤摘要】
member of the serine protease inhibitor superfamily,cause Nagas hima
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type palmoplantar keratosis[J].Am J Hum Genet,2013,93(5):945
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956.
[0010][4]Zhang J,Zhang G,Ni C,et al.Nagashima
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type palmoplantar ker atosis in a Chinese Han population[J].Mol Med Rep,2016,14(5):4049
‑
4054.
[0011][5]戴珊,南栩,赵红珊,等.长岛型掌跖角化病:SERPINB7基因突变位点研究[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志,2017,16(2):108
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112.
[0012][6]一例长岛型掌跖角化症患者SERPINB7基因的突变分析[J].右江医学,2018,46(1):23
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25.

技术实现思路

[0013]本专利技术的主要目的就是针对目前国内外均没有可用于NPPK基因诊断的产品，提供一种SERPINB7基因突变的引物探针组合物，以及快速分型检测方法，同时在上述的引物探针组合物及方法基础上可进一步开发相应的检测试剂盒。在某些具体实施方式中，依据上述引物探针组合物及TaqMan探针法所开发的检测试剂盒，可以特异、准确、快速地检测长岛型掌趾角化症致病性基因，并适用于大规模推广应用。
[0014]为了实现上述目的，本专利技术一方面提供了一种用于检测人SERPINB7基因的引物探针组合物，包括如下至少一个基因位点的引物对及对应探针，
[0015]c.796C>T位点为：序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.2所示的引物，序列如SEQ ID No.3和/或SEQ ID No.4所示探针；
[0016]c.522_523insT位点为：序列如SEQ ID No.5及SEQ ID No.6所示引物，序列如SEQ ID No.7和/或SEQ ID No.8所示探针；
[0017]c.650_653delCTGT位点择一为：序列如SEQ ID No.9及SEQ ID No.10所示引物，序列SEQ ID No.12所示探针；或，序列如SEQ ID No.9及SEQ ID No.11所示引物，序列SEQ ID No.13所示探针；
[0018]c.806_818delinsT位点为：序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.14所示引物，序列如SEQ ID No.15和/或SEQ ID No.16所示探针。
[0019]作为优选，任一所述探针的5
’
端连接荧光基团，任一所述探针的3
’
端连接荧光淬灭基团。
[0020]作为优选，任一所述探针连接的荧光基团独立地选自FAM、VIC、CY5、ROX、HEX、JOE、NED、Texas Red或CY3中的1种。
[0021]作为优选，序列如SEQ ID No.3所示探针所连荧光基团为FAM，
[0022]序列如SEQ ID No.4所示探针所连荧光基团为ROX，
[0023]序列如SEQ ID No.7所示探针所连荧光基团为CY5，
[0024]序列如SEQ ID No.8所示探针所连荧光基团为ROX，
[0025]序列如SEQ ID No.12所示探针所连荧光基团为VIC，
[0026]序列如SEQ ID No.13所示探针所连荧光基团为FAM，
[0027]序列如SEQ ID No.15所示探针所连荧光基团为CY5，
[0028]序列如SEQ ID No.16所示探针所连荧光基团为VIC。
[0029]作为优选，任一所述探针连接的淬灭基团独立地选自MGB、BHQ
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1、BHQ
‑
2、BHQ
‑
3或
TAMRA中1种。
[0030]本专利技术另一方面提供了一种使用上述引物探针组合物的快速分型检测方法。其中，检测的基因突变位点为SERPINB7基因的c.796C>T、c.522_523insT、c.650_653delCTGT、c.806_818delinsT位点，所用的方法为TaqMan探针法。
[0031]所述的TaqMan探针法具体包括如下步骤：
[0032]步骤1：对血样进行处理，EDTA抗凝全血样本采用样本释放剂处理，获得含有待测核酸的混合溶液；
[0033]步骤2：以步骤1所获得的核酸溶液作为模板，用含有上述引物探针组合物的PCR扩增体系，选择性特异性扩增目标核酸序列；其中所述目标序列为各引物对所对应的核酸序列；
[0034]步骤3：用仪器测量步骤2扩增后的荧光强度，进行定量分析，判断待测样本检测范围内的SERPINB7基因上4个致病性突变位点的基因型。
[0035]所述TaqMan探针法的定量检测原理为：当探针完整时检测不到荧光，在PCR延伸过程中，DNA聚合酶水解探针后发出荧光信号，并且荧光增长值和PCR产物的量呈正相关。
[0036]作为优选，所述c.796C>T、c.522_523insT、c.650_653delCTGT、c.806_818delinsT位点需分组检测，所述分组检测至少为2组。在实际操作中，可根据实际需要，分组检测，每次分组可以分别检测一个或者多个位点的野生型和突变型。需要注意的是，实际分组检测需要根据荧光检测仪器的通道数进行调整。当荧光检测通道数为8时，各位点的野生型和突变型可同时检测；当荧光通道数为4时，应该分两组进行检测。
[0037]进一步优选，所述分组检测为2、3、4、5、6、7、8组。
[0038]作为优选，所述分组检测为2组时：
[0039]第一组检测位点包括c.796C>T位点的突变型、c.522_523insT位点的野生型和突变型、c.650_653delCTGT位点的野生型；
[0040]第二组检测位点包括c.796C>T位点的野生型、c.650_653delCTGT位点的突变型、c.806_818delinsT位点的野生型和突变型。
[0041]当采用上述分组的检测方法时，可在减少检测次数的同时，避免了多个引物对及对应的检测探针之间的相互干扰；并经验证，使用上述引物探针组合物检测SERPINB7基因突变，特异性好，灵敏度高。
[0042]作为优选，所述TaqMan探针法中的PCR扩增体系除引物探针组合物外，还包括DNA聚合酶、dNTP、Mg
2+
、ROX Dye。
[0043]作为优选，所述PCR扩增体系还包括Tris、10mM～500mM的KCl、10mM～500mM的(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测人SERPINB7基因突变的引物探针组合物，其特征在于，包括如下至少一个基因位点的引物对及对应探针的序列，或者互补序列：c.796C>T位点为：序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.2所示的引物，序列如SEQ ID No.3和/或SEQ ID No.4所示探针；c.522_523insT位点为：序列如SEQ ID No.5及SEQ ID No.6所示引物，序列如SEQ ID No.7和/或SEQ ID No.8所示探针；c.650_653delCTGT位点择一为：序列如SEQ ID No.9及SEQ ID No.10所示引物，序列SEQ ID No.12所示探针；或，序列如SEQ ID No.9及SEQ ID No.11所示引物，序列SEQ ID No.13所示探针；c.806_818delinsT位点为：序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.14所示引物，序列如SEQ ID No.15和/或SEQ ID No.16所示探针。2.如权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，任一所述探针的5
’
端连接荧光基团，任一所述探针的3
’
端连接荧光淬灭基团。3.如权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于，任一所述探针连接的荧光基团独立地选自FAM、VIC、CY5、ROX、HEX、JOE、NED、Texas Red或CY3中的1种。4.如权利要求3所述的引物探针组合物，其特征在于：序列如SEQ ID No.3所示探针所连荧光基团为FAM，序列如SEQ ID No.4所示探针所连荧光基团为ROX，序列如SEQ ID No.7所示探针所连荧光基团为CY5，序列如SEQ ID No.8所示探针所连荧光基团为ROX，序列如SEQ ID No.12所示探针所连荧光基团为VIC，序列如SEQ ID No.13所示探针所连荧光基团为FAM，序列如SEQ ID No.15所示探针所连荧光基团为CY5，序列如SEQ ID No.16所示探针所连荧光基团为VIC...

【专利技术属性】
技术研发人员：李明，李明阳，方耀东，
申请(专利权)人：上海五色石医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：