一种人SERPINB7基因突变快速分型的检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种人SERPINB7基因突变快速分型的检测试剂盒。该试剂盒的引物探针组合，通过扩增引物对及检测探针的巧妙设计，避免了多个引物对及对应的检测探针之间的相互干扰，并经验证使用上述引物探针组合检测SERPINB7基因突变，特异性好，灵敏度高。此外，本申请试剂盒基于通用荧光定量PCR平台，设备成本低、普及性高，操作简单，结果易判读，全程闭管无污染，更可一次检测4个致病性突变位点。更可一次检测4个致病性突变位点。

【技术实现步骤摘要】
一种人SERPINB7基因突变快速分型的检测试剂盒


[0001]本专利技术属于体外核酸检测
，涉及一种人SERPINB7基因突变快速分型的检测试剂盒，其中包括特异性的引物探针组合物及配套试剂，以及适用于该试剂盒的检测方法。

技术介绍

[0002]长岛型掌跖角化症(Nagashima
‑
type palmoplantar keratosis，NPPK，OMIM 615598)属于弥漫性非残毁性掌跖角化病，是一种常染色体隐性遗传的掌跖角化病(PPK)，属于弥漫性非表皮松解性掌跖角化症，是中国汉族人群最常见的掌跖角化症类型。该病于1977年首次在长岛被报告，其发病率相对较高，在我国汉族人群中发病率约3.1/10000。NPPK的致病基因目前已明确为丝氨酸蛋白酶抑制剂B7(serpinfamilyB，SERPINB7)。
[0003]SERPINB7基因位于18q21.3，共有8个外显子，起始密码子位于2号外显子，终止密码子位于8号外显子，编码380个氨基酸。目前已报道SERPI NB7基因上NPPK致病突变有:c.796C＞T，c.218_219del AGinsTAAACTTTACCT，c.455
‑
1G＞A，c.455G＞T，c.650
‑
653del CTGT，c.522
‑
523insT，c.336+2T＞G，c.122_127delTGGTCC，c.830C＞T，c.382C＞T，c.635delG，c.271delC，c.1136G＞A，其中c.796C＞T突变频率最高，通过千人基因组数据库，c.796C＞T在中国正常人群中的携带频率为6/197。
[0004]NPPK临床表现为皮肤红斑基础上轻度角化，临床特征为手掌、手背、腕部、足底、足背、踝部、跟腱等部位出现红斑、丘疹、斑块、角化、脱屑，伴手足多汗症，易伴发皮肤浅表真菌感染，多数患者伴有掌跖多汗和/或掌跖部位异味
[2
‑
3]。目前尚未找到根治NPPK的治疗方法，维甲酸类药物如维A酸软膏、他扎罗汀或激素软膏如丙酸氯倍他索霜，合并真菌感染联合抗真菌药物，这些治疗方法能缓解该患者的病情，但停药后容易复发
[6]。
[0005]目前，针对SERPINB7基因突变的检测主要依赖于sanger测序。这一方法的基本原理是通过PCR扩增后，将获取的目的基因片段进行sanger测序，根据测序结果，分析是否存在致病性SERPINB7基因突变。该方法的不利之处在于实验操作复杂、时间久、结果分析需要相应的专业知识、检测成本相对较高。因此高效、快速、操作简便的实时荧光定量PCR成为分子诊断领域的主要方法。
[0006]根据NCBI dbSNP数据库数据，本试剂盒所检测4个位点：c.796C>T(rs142859678)、c.522_523insT(rs672601344)、c.650_653delCTGT(rs534014297)、c.806_818delinsT(rs1157759655)在正常东亚人群中的突变型等位基因频率分别为：0.0119、0.0032、0.003、0.0006，据此计算，上述四个位点在人群中的携带率约为3.7/100。
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25.

技术实现思路

[0013]本专利技术的主要目的就是针对目前国内外均没有可用于NPPK基因诊断的产品，提供一种人SERPINB7基因突变快速分型的检测试剂盒。该试剂盒包括了特异性的引物探针组合物，以及其他配套试剂。同时本专利技术还提供了一种人SERPINB7基因突变分型检测方法。本专利技术所提供的试剂盒可以特异、准确、快速检测长岛型掌趾角化症致病性基因，并适用于大规模推广应用。
[0014]为了实现上述目的，本专利技术一方面提供了一种人SERPINB7基因突变快速分型的检测试剂盒，包括引物探针组合物，PCR反应容器，外部质控容器；
[0015]所述引物探针组合物为包括以下序列引物及探针的干粉或溶液：
[0016]c.796C>T位点：序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.2所示的引物，序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示探针；
[0017]c.522_523insT位点：序列如SEQ ID No.5及SEQ ID No.6所示引物，序列如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示探针；
[0018]c.650_653delCTGT位点：序列如SEQ ID No.9、SEQ ID No.10及SEQ ID No.11所示引物，序列如SEQ ID No.12、SEQ ID No.13所示探针；
[0019]c.806_818delinsT位点：序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.14所示引物，序列如SEQ ID No.15和/或SEQ ID No.16所示探针；
[0020]所述PCR反应容器包括DNA聚合酶、dNT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人SERPINB7基因突变快速分型的检测试剂盒，其特征在于，包括引物探针组合物，PCR反应容器，外部质控容器；所述引物探针组合物为包括以下序列引物及探针的干粉或溶液：c.796C>T位点：序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.2所示的引物，序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示探针；c.522_523insT位点：序列如SEQ ID No.5及SEQ ID No.6所示引物，序列如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示探针；c.650_653delCTGT位点：序列如SEQ ID No.9、SEQ ID No.10及SEQ ID No.11所示引物，序列如SEQ ID No.12、SEQ ID No.13所示探针；c.806_818delinsT位点：序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.14所示引物，序列如SEQ ID No.15和/或SEQ ID No.16所示探针；所述PCR反应容器包括DNA聚合酶、dNTP、Mg
2+
、特殊辅助增强剂、PCR缓冲液；所述外部质控容器包括突变对照和正常对照；所述正常对照为如序列SEQ ID No.17、SEQ ID No.18、SEQ ID No.19、SEQ ID No.20所述的核酸组合物，所述突变对照为如序列SEQ ID No.21、SEQ ID No.22、SEQ ID No.23、SEQ ID No.24所示核酸组合物。2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，任一所述探针的5
’
端连接荧光基团，任一所述探针的3
’
端连接荧光淬灭基团；所述荧光基团独立地选自FAM、VIC、CY5、ROX、HEX、JOE、NED、Texas Red或CY3；所述淬灭基团独立地选自MGB、BHQ
‑
1、BHQ
‑
2、BHQ
‑
3或TAMRA。3.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述引物探针组合物分为第一反应剂及第二反应剂；所述第一反应剂为含有如下序列的引物及探针组合物的干粉或溶液：序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.2所示的引物、序列如SEQ ID No.3所示探针，序列如SEQ ID No.5及SEQ ID No.6所示引物、序列如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示探针，序列如SEQ ID No.9、SEQ ID No.10所示引物，序列如SEQ ID No.12所示探针；所述第二反应剂含有如下序列的引物及探针组合物的干粉或溶液：序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.2所示的引物、序列如SEQ ID No.4所示探针，序列如S...

【专利技术属性】
技术研发人员：李明，李明阳，方耀东，
申请(专利权)人：上海五色石医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：