一种FII-RNApulldown试剂盒和方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种FII

【技术实现步骤摘要】
一种FII
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RNA pulldown试剂盒和方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种FII
‑
RNA pulldown试剂盒和方法及其应用。

技术介绍

[0002]RNA结合蛋白(RBPs)在转录后水平调节基因的表达起着重要的作用，包括mRNA前体的剪接、多腺苷化和稳定性的维持，mRNA从细胞核向细胞质的运输，mRNA的定位和翻译等。有很多RBPs能够识别RNA中的特定核苷酸序列，因此，为了研究RNA与蛋白的相互作用建立了很多方法，包括EMSA、SELEX技术、RNAfootprinting、RNA免疫沉淀(RIP)和RNA pulldown技术。
[0003]探究RNA
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蛋白的相互关系是RNA(尤其是非编码RNA)功能研究的一个重要方向。RNA pulldown，就是用靶RNA调取与之相互作用蛋白质。使用体外转录法标记生物素RNA探针，再与蛋白提取液孵育，形成RNA
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蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从而将靶RNA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种FII标签，其特征在于，所述FII标签为一段短RNA序列，所述FII标签的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种RNA pulldown试剂盒，其特征在于，包括下述试剂：链霉亲和素磁珠，配体，RNA structure buffer，RIPA裂解缓冲液，NT2缓冲液，漂洗液，洗脱缓冲液，磷酸盐缓冲液，蛋白酶抑制剂，RNA酶抑制剂。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述配体为：1)SEQ ID NO.2所示的多肽；2)1)中的氨基酸序列经过替换、缺失或添加一个或几个氨基酸后形成的仍然具有改造前与FII标签高度亲和力的多肽。4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述RIPA裂解缓冲液可应用于多种细胞类型，所述细胞类型包括：Hela，jurkat，A431，A549，MOPC，NIH/3T3，U2OS。5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶抑制剂为PMSF或Cocktail；所述RNA酶抑制剂为Recombinant RNase Inhibitor或SUPERaseIn
TM
RNase Inhibitor。6.一种RNApulldown方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、通过体外转录或体内表达制备目标RNA
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FII；S2、磁珠预处理：向50uL磁珠中加入0.5mLNT2缓冲液，去掉NT2缓冲液，重复洗涤1次；用200μL NT2缓冲液重悬磁珠，并加入20uL配体，混合器孵育，使配体固定在磁珠上；取上述磁珠，加入0.5mL漂洗液，去掉漂洗液，重复操作1次，加入300μLNT2缓冲液重悬磁珠，得到配体磁珠，备用；S3、利用磁珠上的特异性配体捕获目标RNA
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FII：将S1所得的目标RNA
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FII加入到S2所得的配体磁珠中，室温混合孵...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘郁林，张超，屈义，
申请(专利权)人：广州辉骏生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：