本发明专利技术提出一种结直肠癌筛查标志组合物及其选取方法、结直肠癌筛查试剂盒，该结直肠癌筛查标志组合物在结直肠癌中高甲基化，白细胞中低甲基化，且具有甲基化敏感内切酶酶切位点，利用甲基化敏感内切酶不能切割甲基化位点的特性，降解非肿瘤来源cfDNA，特异扩增肿瘤来源ctDNA，极大提升检查灵敏度。并且ctDNA的检测是非侵入性的，具有迅速，便捷，无创的特点，可以提高患者对于结直肠癌筛选的接受度。通过更精准有效的检测排查早期结直肠癌，进而降低结直肠癌的死亡率，减少结直肠癌的伤害。减少结直肠癌的伤害。减少结直肠癌的伤害。
【技术实现步骤摘要】
一种结直肠癌筛查标志组合物及其选取方法、结直肠癌筛查试剂盒
[0001]本专利技术涉及体外诊断
，特别涉及一种结直肠癌筛查标志组合物及其选取方法、结直肠癌筛查试剂盒。
技术介绍
[0002]结直肠癌(Colorectal Cancer, CRC) 是全球第四大男性常见癌症，是全球第二大女性常见癌症，在发达国家的发病率最高。近年来，随着我国人民生活水平的提高，生活习惯与饮食结构的改变，环境污染日益严重，我国结直肠癌的发病率不断增加。国家癌症早诊早治项目专家委员会2013年的研究报告指出，我国40岁以上的高危人群患进展期腺瘤和早期肠癌的比率为6% 。据2015年《中国肿瘤登记年报》统计，结直肠癌的发病率近年来仍在增长，每年死亡患者多达23万人。
[0003]结直肠癌主要包括结肠癌与直肠癌两大类，其发展是一个渐进过程：增生＞小腺瘤＞大腺瘤＞重度非典型增生＞早期腺癌＞晚期腺瘤。大多数肠癌形成之前以息肉（异常突起）或腺瘤（腺上皮良性肿瘤）的形式在发病部位缓慢发展多年，在此期间患者无任何不适。随着时间的推移，部分腺瘤可转变为癌症。在癌变过程中，肿瘤细胞侵入肠壁，与血管或淋巴管融合，通过吸收患者养分迅速扩增。后期，癌细胞通过淋巴管侵入附近的淋巴结或身体的其它器官，形成癌扩散。结直肠癌在早期并没有明显症状，通常发展至晚期才有明显症状显现，如腹痛，便血等。
[0004]我国大多数患者缺乏癌症早期筛查的意识，由于疾病早期症状不明显，发现明显症状后才到医院进行检查，至被确诊为结直肠癌时，癌细胞已经扩散，错失最佳的治疗时间。中晚期患者所需治疗费用高、疗效差、五年生存率低。如果能够在早期发现结直肠癌，不仅治疗费用降低，还能早期筛查甚至治愈，因此亟待开发更好的结直肠癌筛查方法。
[0005]结直肠癌的筛查方法主要包括粪便隐血检测与肠镜检查。其中，粪便隐血检测敏感性与特异性较低；肠镜检查虽然准确度高，但属于侵入性检测，患者依从性低。随着人类基因组计划的完成以及高通最测序技术的发展，基因筛查技术已成为一种新的结直肠癌诊断方法，在结直肠癌的早期诊断中有显著的优势。
技术实现思路
[0006]本专利技术的主要目的是提供一种结直肠癌筛查标志组合物，旨在解决现有结直肠癌诊断方法对于早期病变检测灵敏度低，肠镜检查难以接受的问题。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提出一种结直肠癌筛查标志组合物，其特征在于，包括：第一靶标：所述第一靶标的位置包括chr5:100,238,835
‑
100,239,200；第二靶标：所述第二靶标的位置包括chr15:79,383,462
‑
79,383,827；第三靶标：所述第三靶标的位置包括chr5:100,238,840
‑
100,239,205；第四靶标：所述第四靶标的位置包括chr7:45,018,729
‑
45,018,908；
第五靶标：所述第五靶标的位置包括chr11:60,738,950
‑
60,739,349；第六靶标：所述第六靶标的位置包括chr17:75,369,779
‑
75,370,053。
[0008]本申请还提出一种结直肠癌筛查标志组合物的选取方法，包括：筛选结直肠癌人群早期基因组超甲基化区域，并与白细胞基因组对应区域进行比对；选取在白细胞中低甲基化，结直肠癌中高甲基化，且含有CCGC，CCGG，GCGC，ACGT，GCGG中至少一个位点的区域作为靶标。
[0009]优选地，选取在白细胞中低甲基化，结直肠癌中高甲基化，且含有CCGC，CCGG，GCGC，ACGT，GCGG中至少两个位点的区域作为靶标。
[0010]优选地，所述标志组合物包括：第一靶标：所述第一靶标的位置包括chr5:100,238,835
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100,239,200；第二靶标：所述第二靶标的位置包括chr15:79,383,462
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79,383,827；第三靶标：所述第三靶标的位置包括chr5:100,238,840
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100,239,205；第四靶标：所述第四靶标的位置包括chr7:45,018,729
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45,018,908；第五靶标：所述第五靶标的位置包括chr11:60,738,950
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60,739,349；第六靶标：所述第六靶标的位置包括chr17:75,369,779
‑
75,370,053。
[0011]本专利技术还提出一种结直肠癌筛查试剂盒，包括用于检测上述的结直肠癌筛查标志组合物的引物和探针。
[0012]优选地，所述结直肠癌筛查试剂盒包括：用于检测所述第一靶标的上游引物序列为Seq ID NO.1，下游引物序列为Seq ID NO.2，探针序列为Seq ID NO.3；用于检测所述第二靶标的上游引物序列为Seq ID NO.4，下游引物序列为Seq ID NO.5，探针序列为Seq ID NO.6；用于检测所述第三靶标的上游引物序列为Seq ID NO.7，下游引物序列为Seq ID NO.8，探针序列为Seq ID NO.9；用于检测所述第四靶标的上游引物序列为Seq ID NO.10，下游引物序列为Seq ID NO.11，探针序列为Seq ID NO.12；用于检测所述第五靶标的上游引物序列为Seq ID NO.13，下游引物序列为Seq ID NO.14，探针序列为Seq ID NO.15；用于检测所述第六靶标的上游引物序列为Seq ID NO.16，下游引物序列为Seq ID NO.17，探针序列为Seq ID NO.18。
[0013]优选地，所述结直肠癌筛查试剂盒使用的内参基因为β
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actin。
[0014]可选地，用于检测所述β
‑
actin的上游引物序列为Seq ID NO.19，下游引物序列为Seq ID NO.20，探针序列为Seq ID NO.21。
[0015]可选地，所述结直肠癌筛查试剂盒还包括甲基化敏感内切酶，所述甲基化敏感内切酶包括HinP1I、HpaII、AciI和HpyCH4IV。
[0016]本专利技术还提出上述的引物和探针在制备结直肠癌筛查试剂盒的应用。
[0017]本专利技术技术方案的结直肠癌筛查标志组合物在结直肠癌中高甲基化，白细胞中低甲基化，且具有甲基化敏感内切酶酶切位点，利用甲基化敏感内切酶不能切割甲基化位点
的特性，降解非肿瘤来源cfDNA，特异扩增肿瘤来源ctDNA，极大提升检查灵敏度。并且ctDNA的检测是非侵入性的，具有迅速，便捷，无创的特点，可以提高患者对于结直肠癌筛选的接受度。通过更精准有效的检测排查早期结直肠癌，进而降低结直肠癌的死亡率，减少结直肠癌的伤害。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种结直肠癌筛查标志组合物，其特征在于，包括：第一靶标：所述第一靶标的位置包括chr5:100,238,835
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100,239,200；第二靶标：所述第二靶标的位置包括chr15:79,383,462
‑
79,383,827；第三靶标：所述第三靶标的位置包括chr5:100,238,840
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100,239,205；第四靶标：所述第四靶标的位置包括chr7:45,018,729
‑
45,018,908；第五靶标：所述第五靶标的位置包括chr11:60,738,950
‑
60,739,349；第六靶标：所述第六靶标的位置包括chr17:75,369,779
‑
75,370,053。2.一种结直肠癌筛查标志组合物的选取方法，其特征在于，包括：筛选结直肠癌人群早期基因组超甲基化区域，并与白细胞基因组对应区域进行比对；选取在白细胞中低甲基化，结直肠癌中高甲基化，且含有CCGC，CCGG，GCGC，ACGT，GCGG中至少一个位点的区域作为靶标。3.如权利要求2所述的结直肠癌筛查标志组合物的选取方法，其特征在于，选取在白细胞中低甲基化，结直肠癌中高甲基化，且含有CCGC，CCGG，GCGC，ACGT，GCGG中至少两个位点的区域作为靶标。4.如权利要求3所述的结直肠癌筛查标志组合物的选取方法，其特征在于，所述标志组合物包括：第一靶标：所述第一靶标的位置包括chr5:100,238,835
‑
100,239,200；第二靶标：所述第二靶标的位置包括chr15:79,383,462
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79,383,827；第三靶标：所述第三靶标的位置包括chr5:100,238,840
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100,239,205；第四靶标：所述第四靶标的位置包括chr7:45,018,729
‑
45,018,908；...
【专利技术属性】
技术研发人员：段小红，张怡然，王冰，杨春燕，邵茗泽，王天阳，
申请(专利权)人：南京求臻基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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