本发明专利技术了一种全封闭自动化免疫细胞制备方法。具体地，本发明专利技术提供了一种培养免疫细胞的方法，包括预处理步骤，细胞分选、激活、转染步骤，和细胞培养步骤。本发明专利技术采用Prodigy为主要培养体系进行免疫细胞的培养，以Dynabeads活化细胞，配合封闭化系统进行洗涤灌装，大大提升了免疫细胞的制备效率，提高临床效果，降低了制备成本。低了制备成本。
【技术实现步骤摘要】
一种全封闭一体化免疫细胞制备方法
[0001]本专利技术涉及生物
，更具体地涉及一种全封闭自动化免疫细胞制备方法。
技术介绍
[0002]细胞免疫疗法是一种收集患者免疫细胞，进行基因修饰或选择性扩增培养，进而增强免疫细胞靶向性、杀伤性以及持久性的新型医疗技术。在近年来的肿瘤免疫治疗临床上有着很好的表现，给临床治愈肿瘤带来了希望。但是免疫细胞的制备过程相对复杂，工艺流程、设备设施和试剂选择等任何一个中间环节的不足都会对于细胞制备的质量产生重要的影响，进而影响临床效果，所以一个全自动和全封闭的制备工艺可以最大程度上保证产品的安全性和批次间的稳定性，减少人员和环境带来的影响，提高了免疫细胞治疗产品的制造效率。传统的免疫细胞制备周期在10-14天左右，容易造成培养过程细胞的过度分化衰老，也极大影响了病人的病情进展，而一套快速制备工艺更加符合临床的需求，提高临床疗效，也降低了企业的成本，提高了生产产能。同时，为满足各细胞的特点和需求，培养体系可能是血清，低血清或无血清等需求，
[0003]因此，本领域迫切需要开发新的效率更高的免疫细胞制备方法。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的在于提供一种基于Prodigy的全封闭自动化免疫细胞制备方法。
[0005]在本专利技术的第一方面，提供了一种培养免疫细胞的方法，所述的方法包括步骤：
[0006](a)提供一份包含免疫细胞的样本，
[0007](b)任选地，对所述包含免疫细胞的样本进行洗涤预处理，从而得到经预处理的免疫细胞，
[0008](c)对所述经预处理的免疫细胞进行细胞分选，从而得到经分选的免疫细胞，
[0009](d)对所述经分选的免疫细胞进行激活处理，从而得到激活的免疫细胞，其中，所述的激活处理使用选自下组的激活剂进行：Transact、Dynabeads和OKT3抗体，
[0010](e)对所述激活的免疫细胞进行转染处理，从而获得转染的免疫细胞；
[0011](f)培养所述转染的免疫细胞，从而制得所需免疫细胞。
[0012]在另一优选例中，所述的步骤(c)、(d)、(e)、和(f)在Prodigy设备上进行。
[0013]在另一优选例中，在步骤(d)中，所述的激活剂为Dynabeads，较佳地Dynabeads的使用量为Dynabeads：细胞＝0.1～10，更佳地Dynabeads：细胞＝0.5～5。
[0014]在另一优选例中，在步骤(d)中，所述的激活剂为Transact，较佳地Transact的使用量为0.1ml～30ml，更佳地为1～10ml。
[0015]在另一优选例中，在步骤(d)中，所述的激活剂为OKT3抗体，较佳地OKT3抗体的使用量为10ng/ml～50mg/ml(终浓度)。
[0016]在另一优选例中，在步骤(d)中，进行激活处理的免疫细胞密度为(0.1～20)
×
10 6
细胞/ml，较佳地为(0.5～10)
×
106细胞/ml。
[0017]在另一优选例中，在步骤(d)中，激活处理的时间为4～96h，较佳地为16-48h。
[0018]在另一优选例中，在步骤(d)中，激活的细胞量为1
×
105～20
×
109个。
[0019]在另一优选例中，所述的免疫细胞包括T细胞、NK细胞。
[0020]在另一优选例中，所述的包含免疫细胞的样本选自下组：外周血、免疫细胞、单核细胞采集物、和PBMC。
[0021]在另一优选例中，所述的样本包括新鲜样本和冻存样本。
[0022]在另一优选例中，所述样本的量为5ml～500ml，较佳地为10-100ml。
[0023]在另一优选例中，在步骤(b)中，所述的洗涤预处理在选自下组的设备上进行：Sepax 2、Sepax C-pro、Sefia、Lovo、CS 5+、CS Elite和离心机。
[0024]在另一优选例中，在步骤(b)中，所述的洗涤预处理的离心力为100g～1000g，较佳地为200g～400g。
[0025]在另一优选例中，在步骤(b)中，所述的洗涤预处理的离心时间包括但不限于100s～600s，较佳地为300s～400s。
[0026]在另一优选例中，在步骤(b)中，所述的洗涤预处理的样本稀释比例为0～5倍，较佳地为1～3。
[0027]在另一优选例中，在步骤(b)中，所述的洗涤预处理的洗涤循环次数为1～5次，较佳地为1～3次。
[0028]在另一优选例中，在步骤(b)中，洗涤后样本的输出体积包括但不限于5ml～400ml，较佳地为20～100ml。
[0029]在另一优选例中，在步骤(c)中，进行细胞分选的免疫细胞的量为1
×
105～50
×
109个细胞，较佳地为(1～10)
×
109个细胞。
[0030]在另一优选例中，在步骤(c)中，所述的分选包括正分选和/或负分选。
[0031]在另一优选例中，所述正分选的标记选自下组：CD4
+
、CD8
+
、CD62L
+
,CD3
+
，CD56
+
、或其组合。
[0032]在另一优选例中，所述负分选的标记选自下组：CD14
+
，CD19
+
，CD269
+
、或其组合。
[0033]在另一优选例中，使用CD4
+
抗体试剂和CD8
+
抗体试剂进行分选；所述的CD4
+
抗体试剂为稀释3-5倍的CliniMACS CD4试剂，所述的CD8
+
抗体试剂为稀释3-5倍的CliniMACS CD8试剂。
[0034]在另一优选例中，利用含有0.1-10％HSA的PBS-EDTA进行所述稀释，较佳地，利用含有0.2-1％HSA的PBS-EDTA进行所述稀释，更佳地，利用0.4-0.6％HSA的PBS-EDTA进行所述稀释。
[0035]在另一优选例中，在步骤(c)中，使用的CD4
+
抗体试剂和CD8
+
抗体试剂的体积为1.5～10ml，较佳地为4-6ml。
[0036]在另一优选例中，在步骤(c)中，含CD4
+
抗体和CD8
+
抗体的分选试剂的溶剂为含有0.1～10％HSA的PBS-EDTA。
[0037]在另一优选例中，所述的CD4
+
抗体试剂、CD8
+
抗体试剂与免疫细胞的比例为100
×
106细胞/mL-1000
×
106细胞/mL。
[0038]在另一优选例中，CD4
+
抗体试剂和CD8
+...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种培养免疫细胞的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：(a)提供一包含免疫细胞的样本，(b)任选地，对所述包含免疫细胞的样本进行洗涤预处理，从而得到经预处理的免疫细胞，(c)对所述经预处理的免疫细胞进行细胞分选，从而得到经分选的免疫细胞，(d)利用Dynabeads作为激活剂，对所述经分选的免疫细胞进行激活处理，从而得到激活的免疫细胞，(e)对所述激活的免疫细胞进行转染处理，从而获得转染的免疫细胞；(f)培养所述转染的免疫细胞，从而制得所需免疫细胞。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述的洗涤预处理利用HSA(人血清白蛋白)溶液进行，所述的HSA溶液中HSA的终浓度为0.1％～30％，较佳地为0.1～10％。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的Dynabeads的使用量为Dynabeads：细胞＝0.1～10，更佳地Dynabeads：细胞＝0.5～5。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(c)中，所述的分选采用CD4
+
抗体试剂和CD8
+
抗体试剂进行，所述的CD4
+
抗体试剂为稀释3-5倍的CliniMACS CD4试剂，所述的CD8
+
抗体试剂为稀释3-5倍的CliniMACS CD8试剂，并且，使用的CD4
+
抗...
【专利技术属性】
技术研发人员：王飞，张丹，张丽，任加强，陈国枝，林伟德，吴军峰，张露亿，
申请(专利权)人：西比曼生物科技香港有限公司，
类型：发明
国别省市：
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