一种白细胞分离液及白细胞分离方法技术

本发明专利技术公开了一种白细胞分离液及白细胞分离方法，涉及细胞工程领域，白细胞分离液配方按照质量份数包括：阿司匹林20

【技术实现步骤摘要】
一种白细胞分离液及白细胞分离方法


[0001]本专利技术涉及细胞工程领域，特别是一种白细胞分离液及白细胞分离方法。

技术介绍

[0002]血液中红细胞与白细胞比例约600～1000：1，两者的比重不同其沉降速度亦异，通常用两种方法加以分离；市场上的白细胞分离通常是采集血液后先及时抗凝，通常选用肝素抗凝法，肝素能阻止凝血酶原转化为凝血酶，从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白而防止血液凝固。再将含抗凝血的试管直立静置室温30～60min后，血液分成明显三层，上层为淡黄色血浆，底层为红细胞，紧贴红细胞层上面的灰白层为白细胞，轻轻吸取即得富含白细胞的细胞群，离心洗涤后加入少量蒸馏水或含氯化铵的Gey溶液，经短时间的低渗处理，使红细胞裂解，经过反复洗涤可得纯度较高的白细胞悬液；现有技术的方法不仅操作繁琐，凝血和分离需要分两步操作，而且白细胞的分离效果也差，分离率低。

技术实现思路

[0003]为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种白细胞分离液及白细胞分离方法，分离液配方能够使得抗凝、红细胞分裂同步进行，且得到的白细胞分离率高，分离效果好。
[0004]为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：
[0005]一种白细胞分离液，配方按照质量份数包括：阿司匹林20
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24份，柠檬酸钠8
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12份，聚二烯丙基二甲基氯化铵16
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20份，氯化铵46
‑
50份，重碳酸钾6
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10份，EDTA 0.6
>‑
1.2份。
[0006]前述的一种白细胞分离液，配方按照质量份数为：阿司匹林22.3份，柠檬酸钠9.4份，聚二烯丙基二甲基氯化铵18.6份，氯化铵48.4份，重碳酸钾8.5份，EDTA 0.8份。
[0007]前述的一种白细胞分离液，配方为：阿司匹林22.3g，柠檬酸钠9.4g，聚二烯丙基二甲基氯化铵18.6g，氯化铵48.4g，重碳酸钾8.5g，EDTA0.8g，加水至1L。
[0008]一种白细胞分离方法，包括如下步骤：
[0009]步骤一，配置白细胞分离液，将分离液倒入离心管中；
[0010]配方按照质量份数包括：阿司匹林20
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24份，柠檬酸钠8
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12份，聚二烯丙基二甲基氯化铵16
‑
20份，氯化铵46
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50份，重碳酸钾6
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10份，EDTA 0.6
‑
1.2份；
[0011]步骤二，采集血液后将新鲜血液，放入倒有白细胞分离液的离心管中，再加与白细胞分离液等体积的PBS稀释；
[0012]步骤三，室温离心；
[0013]步骤四，取出离心管，吸出白色的一层，重悬于4
‑
6倍体积的PBS中，混匀；
[0014]步骤五，重复室温离心、吸弃上清、再加不完全培养液、混匀一套动作；
[0015]步骤六，淋巴细胞记数；
[0016]步骤七，按所需浓度及实验目的稀释细胞，种板。
[0017]前述的一种白细胞分离方法，不完全培养液为不完全DMEM培养液。
[0018]前述的一种白细胞分离方法，DMEM培养液为DMEM 12.67g，碳酸氢钠2.8g，双抗溶液10ml，100
ⅹ
L.G溶液10ml，加入盐酸直至pH 7.2
‑
7.4，加超纯水到1L。
[0019]前述的一种白细胞分离方法，步骤五中重复室温离心、吸弃上清、再加不完全培养液、混匀一套动作重复两到三次。
[0020]本专利技术的有益之处在于：
[0021]本专利技术的分离液配方能够使得抗凝、红细胞分裂同步进行，且分离率还高，相比现有的白细胞的分离方法具有实质性的进步；
[0022]本专利技术发现阿司匹林、柠檬酸钠、聚二烯丙基二甲基氯化铵三者配合能够提高分离率。
具体实施方式
[0023]以下结合具体实施例对本专利技术作具体的介绍。
[0024]一种白细胞分离方法，包括如下步骤：
[0025]步骤一，配置白细胞分离液，将分离液倒入离心管中；
[0026]配方为：阿司匹林20
‑
24份，柠檬酸钠8
‑
12份，聚二烯丙基二甲基氯化铵16
‑
20份，氯化铵46
‑
50份，重碳酸钾6
‑
10份，EDTA 0.6
‑
1.2份；
[0027]步骤二，采集血液后将新鲜血液，放入倒有白细胞分离液的离心管中，再加与白细胞分离液等体积的PBS稀释；
[0028]步骤三，室温离心；
[0029]步骤四，取出离心管，吸出白色的一层，重悬于4
‑
6倍体积的PBS中，混匀；
[0030]步骤五，重复室温离心、吸弃上清、再加不完全培养液、混匀一套动作；作为一种实施例，不完全培养液为不完全DMEM培养液；DMEM培养液为DMEM 12.67g，碳酸氢钠2.8g，双抗溶液10ml，100
ⅹ
L.G溶液10ml，加入盐酸直至pH 7.2
‑
7.4，加超纯水到1L。不完全培养液不受限制，只要是能够培养白细胞的无血清培养液都能够应用于本专利技术。作为一种优选，这套动作重复两到三次，也可以是两次。
[0031]步骤六，淋巴细胞记数；
[0032]步骤七，按所需浓度及实验目的稀释细胞，种板。
[0033]按照如下实施例进行分离白细胞实验，通过测试白细胞分离率说明本专利技术的有益效果：
[0034]实施例1：
[0035]分别取同一份样本中的20ml血液作为样本1，样本2；
[0036]用样本1做如下实验：
[0037]步骤一，配置白细胞分离液，将分离液倒入离心管中；
[0038]配方为：阿司匹林20g，柠檬酸钠8g，聚二烯丙基二甲基氯化铵16g份，氯化铵46g，重碳酸钾6g，EDTA 0.6g，加水到1L；
[0039]步骤二，采集血液后将新鲜血液，放入倒有白细胞分离液的离心管中，再加与白细胞分离液等体积的PBS稀释；
[0040]步骤三，室温2600rpm离心20分钟；
[0041]步骤四，取出离心管，吸出白色的一层，重悬于4
‑
6倍体积的PBS中，混匀后用血细
胞分析仪计数。
[0042]用样本2用肝素抗凝后，立刻用血细胞分析仪计数。
[0043]实施例2：
[0044]配方为：阿司匹林22.3g，柠檬酸钠9.4g，聚二烯丙基二甲基氯化铵18.6g，氯化铵48.4g；重碳酸钾8.5g；EDTA 0.8g，加水至1L；
[0045]方法同实施例1。
[0046]实施例3：
[0047]配方为：阿司匹林24g，柠檬酸钠12g，聚二烯丙基二甲基氯化铵20g，氯化铵50g；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种白细胞分离液，其特征在于，配方按照质量份数包括：阿司匹林20
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24份，柠檬酸钠8
‑
12份，聚二烯丙基二甲基氯化铵16
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20份，氯化铵46
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50份，重碳酸钾6
‑
10份，EDTA 0.6
‑
1.2份。2.根据权利要求1所述的一种白细胞分离液，其特征在于，配方按照质量份数为：阿司匹林22.3份，柠檬酸钠9.4份，聚二烯丙基二甲基氯化铵18.6份，氯化铵48.4份；重碳酸钾8.5份；EDTA 0.8份。3.根据权利要求1所述的一种白细胞分离液，其特征在于，配方为：阿司匹林22.3g，柠檬酸钠9.4g，聚二烯丙基二甲基氯化铵18.6g，氯化铵48.4g；重碳酸钾8.5g；EDTA 0.8g，加水至1L。4.一种白细胞分离方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，配置白细胞分离液，将分离液倒入离心管中；配方按照质量份数包括：阿司匹林20
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24份，柠檬酸钠8
‑
12份，聚二烯丙基二甲基氯化铵16
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【专利技术属性】
技术研发人员：杨罕闻，
申请(专利权)人：蓝莲杭州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：