培养同种异体免疫细胞的方法、用该方法获得的免疫细胞培养物和包含其的免疫细胞治疗剂技术

本发明专利技术涉及一种培养应用于免疫疗法的自然杀伤细胞(NK细胞)的方法。更具体地，本发明专利技术涉及一种培养同种异体免疫细胞的方法，其中，培养源自健康供体(而不是要施用免疫细胞治疗剂的患者)的血液的淋巴细胞，以有效地扩增和激活对治疗恶性肿瘤效果优异的NK细胞；还涉及使用该方法获得的免疫细胞培养物和包含其的免疫细胞治疗剂。免疫细胞治疗剂。免疫细胞治疗剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】培养同种异体免疫细胞的方法、用该方法获得的免疫细胞培养物和包含其的免疫细胞治疗剂


[0001]本专利技术涉及一种培养应用于免疫疗法的自然杀伤细胞(NK细胞)的方法。更具体地，本专利技术涉及一种通过培养源自健康供体(而不是要施用免疫细胞治疗剂的患者)的血液的淋巴细胞来培养同种异体免疫细胞的方法，所述免疫细胞高效地扩增和活化对治疗恶性肿瘤有效的NK细胞，还涉及使用该方法获得的免疫细胞培养物和包含其的免疫细胞治疗剂。

技术介绍

[0002]NK细胞是一种淋巴细胞，更具体地说是大颗粒淋巴细胞。NK细胞能够有效杀死病毒感染的细胞和肿瘤细胞，但不杀死大多数正常细胞。其抗肿瘤作用是通过坏死和/或凋亡的作用机制来实现的。NK细胞对诸如IL
‑
2、IL
‑
12和干扰素等细胞因子产生响应，从而增加细胞毒性、分泌和增殖功能。在人类中NK细胞的表型是CD16(FcγRIII)或CD56，由于细胞表面没有T细胞受体复合物(TRC)，所以CD16和CD56被用作NK细胞的标志物。
[0003]已知此类NK细胞在人体的初始生物防御机制和肿瘤免疫中起重要作用。也就是说，NK细胞可以杀死特定的自体细胞、同质细胞甚至异质癌细胞，而无需根据主要组织相容性复合体(MHC)的表达来获得免疫性的过程。特别是，NK细胞能够更好地杀死几乎不表达或不表达I类MHC的靶细胞。因此，NK细胞可以有效杀死多数不表达MHC的癌细胞，也可以杀死一些病毒感染的细胞和细菌，例如伤寒沙门氏菌(almonella typhi)。然而，具有如此优异杀伤癌细胞作用的NK细胞，即使在正常人中也仅占外周血淋巴细胞的5％～15％。特别而言，由于在癌症患者中其比率或细胞毒性大幅降低，因此在不进行单独扩增过程的情况下通过免疫疗法有效攻击癌细胞是受限的。
[0004]这种免疫疗法是包括以下步骤的方法：从患者血液中提取对于治疗癌症而言最重要的免疫细胞，例如自然杀伤细胞(NK细胞)、树突细胞(DC)、B细胞和T细胞，使用几种类型的刺激物使其生长为对癌症有强烈作用的免疫细胞，然后将所产生的免疫细胞注射回患者体内。由于使用的是患者自己的血液，与典型的化疗相比，其副作用少，施用方法简单，因此近年来正在积极研究这种方法。
[0005]对于抗癌免疫细胞治疗剂来说，自身免疫细胞治疗剂是重要的药剂，其用于通过从自身血液中分离和培养免疫细胞来进行治疗。但是，对于重度晚期癌症患者，由于细胞数量少且活性极低，因此有时难以培养细胞，存在例如必须等待培养期等许多困难。因此，如果能通过培养其他健康人的免疫细胞来进行治疗，就可以有效地用于不易进行细胞培养的重度晚期癌症患者。
[0006]即，当开发出这种同种异体免疫细胞治疗剂时，可以预先培养大量的健康人免疫细胞并冷冻保存，然后在患者需要时在短时间内直接施用于患者，从而增加其效果。为了使用其他人的免疫细胞，必须使用纯NK细胞，因为其他人的Tc细胞会攻击患者的身体。在制造纯NK细胞的典型方法中，培养过程非常复杂且昂贵，因为使用饲养细胞(例如经历肿瘤发生
的细胞系)或需要进行伽马射线治疗。
[0007]因此，需要一种消除这些缺点的开发同种异体免疫细胞治疗剂的技术。

技术实现思路

[0008]技术问题
[0009]本专利技术人进行了研究和努力来解决上述问题，结果，本专利技术人开发了一种培养免疫细胞的方法，在将要施用健康供体T细胞的患者中引起免疫耐受，从而导致转变为没有攻击性的细胞，由此完成了本专利技术。
[0010]因此，本专利技术的一个目的是提供一种培养同种异体免疫细胞的方法，其中，健康人的T细胞在要施用免疫细胞的患者中出现免疫耐受，从而将该T细胞变为没有攻击性的细胞、提高细胞增殖并延长细胞寿命，还提供使用该方法获得的免疫细胞培养物以及包含其的免疫细胞治疗剂。
[0011]本专利技术的另一个目的是提供一种培养同种异体免疫细胞的方法，其中，当培养来自从健康供体血液中分离出的淋巴细胞外周血单个核细胞(PBMC)的免疫细胞时，即使不使用抗CD3抗体，也能刺激免疫细胞，从而有利于进行培养并诱导免疫耐受，由此使与T细胞混合的他人的免疫细胞可用于免疫治疗，还提供用该方法获得的免疫细胞培养物以及包含其的免疫细胞治疗剂。
[0012]本专利技术的目的不仅限于上述目的，即使没有明确提及，其中也自然可以包括本领域普通技术人员从下文对本专利技术的详细描述中能够认识到的本专利技术的目的。
[0013]技术方案
[0014]为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术提供了一种培养同种异体免疫细胞的方法。该方法包括：将分离自健康供体血液的外周血单个核细胞(PBMC)培养9至12天，从而获得第一供体细胞培养物；从将要施用免疫细胞治疗剂的患者的血液制备患者源PBMC；将患者源PBMC加入第一供体细胞培养物中，由此得到第一混合培养物；和培养第一混合培养物的混合培养步骤。
[0015]此外，本专利技术提供了一种培养同种异体免疫细胞的方法。该方法包括：将分离自健康供体血液的外周血单个核细胞(PBMC)培养1至2天，从而获得第二供体细胞培养物；从将要施用免疫细胞治疗剂的患者的血液制备患者源PBMC；将患者源PBMC加入第二供体细胞培养物中，由此得到第二混合培养物；和培养第二混合培养物的混合培养步骤。
[0016]在一个优选实施方式中，患者源PBMC是从患者血液中分离出且未经培养的PBMC、将从患者血液中分离出的PBMC培养1至2天而获得的患者细胞培养物、以及将从患者血液中分离出的PBMC培养7至14天而获得的患者细胞培养物中的任一种。
[0017]在一个优选实施方式中，包括第一混合培养物或第二混合培养物，使得在第一供体细胞培养物或第二供体细胞培养物中包含的每100个免疫细胞中，患者源PBMC中的免疫细胞数为30至200个。
[0018]在一个优选实施方式中，混合培养步骤进行30天以上，同时进行更换和收获多种培养基组合物的步骤。
[0019]在一个优选实施方式中，在以3至4天的间隔改变细胞因子浓度的同时进行更换和收获多种培养基组合物的步骤。
[0020]此外，本专利技术提供了一种同种异体免疫细胞培养物质，其包含：通过使用上述任一种培养方法进行培养而获得的培养基组合物，和增殖的免疫细胞。
[0021]此外，本专利技术提供了一种培养基组合物，其中从同种异体免疫细胞培养物质中去除了增殖的免疫细胞。
[0022]此外，本专利技术提供了一种免疫细胞治疗剂，其包含从同种异体免疫细胞培养物质中去除了培养基组合物后获得的免疫细胞作为活性成分。
[0023]在一个优选实施方式中，免疫细胞包括NK细胞和T细胞，所述T细胞对要施用免疫细胞治疗剂的特定患者具有免疫耐受性。
[0024]在一个优选实施方式中，具有免疫耐受性的T细胞包括NKT细胞、辅助T细胞(Th)、细胞毒性T细胞(Tc)和γδT细胞。
[0025]在一个优选实施方式中，通过培养从健康供体血液中分离出的外周血单个核细胞(PBMC)并且还培养源自特定患者的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种培养同种异体免疫细胞的方法，该方法包括：将分离自健康供体血液的外周血单个核细胞(PBMC)培养9至12天，从而获得第一供体细胞培养物；从将要施用免疫细胞治疗剂的患者的血液制备患者源PBMC；将所述患者源PBMC加入所述第一供体细胞培养物中，由此得到第一混合培养物；和培养第一混合培养物的混合培养步骤。2.一种培养同种异体免疫细胞的方法，该方法包括：将分离自健康供体血液的外周血单个核细胞(PBMC)培养1至2天，从而获得第二供体细胞培养物；从将要施用免疫细胞治疗剂的患者的血液制备患者源PBMC；将所述患者源PBMC加入所述第二供体细胞培养物中，由此得到第二混合培养物；和培养第二混合培养物的混合培养步骤。3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述患者源PBMC是从所述患者的血液中分离出且未经培养的PBMC，或者是通过将从所述患者的血液中分离出的PBMC培养7至14天而获得的患者细胞培养物。4.如权利要求1或2所述的方法，其中，包括所述第一混合培养物或所述第二混合培养物，使得在所述第一供体细胞培养物或所述第二供体细胞培养物中包含的每100个免疫细胞中，所述患者源PBMC中包含的免疫细胞数为30至200个。5.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述混合培养步骤进行30天以上，同时进行更换和收获多种培养基组合物的步骤。6.如权利要求5所述的方法，其中，在以3至4天的间隔改变细胞因子浓度的同时进行...

【专利技术属性】
技术研发人员：申志燮，申禹燮，长民智，申东赫，
申请(专利权)人：申禹燮，
类型：发明
国别省市：