一株短乳杆菌及循环利用其全细胞制备γ-氨基丁酸的方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一株短乳杆菌及循环利用其全细胞制备γ

【技术实现步骤摘要】
No.23487，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
[0006]本专利技术还提供以上所述短乳杆菌的发酵培养基，所述发酵培养基为：葡萄糖20.0
‑
200.0g/L，玉米浆干粉3.0
‑
35.0 g/L，蛋白胨5.0
‑
30.0g/L，牛肉浸粉3.0
‑
35.0g/L，酵母浸粉2.0
‑
25.0g/L，磷酸氢二钾1.0
‑
18.0 g/L，柠檬酸氢二铵1.0
‑
15.0 g/L，乙酸钠3.0
‑
20.0 g/L，硫酸镁0.2
‑
10.0 g/L，硫酸锰0.01
‑
5.00 g/L，吐温80 0.2
‑
3.0 g/L。
[0007]进一步地，所述发酵培养基为：葡萄糖20.0
‑
80.0g/L，玉米浆干粉10
‑
35.0 g/L，蛋白胨5.0
‑
10.0g/L，牛肉浸粉3.0
‑
8.0g/L，酵母浸粉2.0
‑
5.0g/L，磷酸氢二钾1.0
‑
18.0 g/L，柠檬酸氢二铵1.0
‑
5.0 g/L，乙酸钠3.0
‑
5.0 g/L，硫酸镁0.2
‑
1.0 g/L，硫酸锰0.01
‑
0.05 g/L，吐温80 0.2
‑
1.0 g/L。
[0008]本专利技术还提供以上所述短乳杆菌的发酵方法，包括以下步骤：将以上所述短乳杆菌进行活化、制备种子液；将种子液接入到发酵培养基中；在25℃
‑
37℃，pH值为5.0
‑
7.5条件下发酵。
[0009]所述发酵培养基为：葡萄糖20.0
‑
200.0g/L，玉米浆干粉3.0
‑
35.0 g/L，蛋白胨5.0
‑
30.0g/L，牛肉浸粉3.0
‑
35.0g/L，酵母浸粉2.0
‑
25.0g/L，磷酸氢二钾1.0
‑
18.0 g/L，柠檬酸氢二铵1.0
‑
15.0 g/L，乙酸钠3.0
‑
20.0 g/L，硫酸镁0.2
‑
10.0 g/L，硫酸锰0.01
‑
5.00 g/L，吐温80 0.2
‑
3.0 g/L。
[0010]本专利技术还提供以上所述短乳杆菌产谷氨酸脱羧酶的方法，将以上所述短乳杆菌进行活化、制备种子液；将种子液接入到发酵培养基中；向发酵培养基中加入5
‑
60 g/L的L
‑
谷氨酸钠，在0
‑
50rpm，25℃
‑
37℃，pH值为5.0
‑
7.5条件下发酵24
‑
48h；所述发酵培养基为：葡萄糖20
‑
80.0g/L，玉米浆干粉10
‑
35.0 g/L，蛋白胨5.0
‑
10.0g/L，牛肉浸粉3.0
‑
8.0g/L，酵母浸粉2.0
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5.0g/L，磷酸氢二钾1.0
‑
18.0 g/L，柠檬酸氢二铵1.0
‑
5.0 g/L，乙酸钠3.0
‑
5.0 g/L，硫酸镁0.2
‑
1.0 g/L，硫酸锰0.01
‑
0.05 g/L，吐温80 0.2
‑
1.0 g/L。
[0011]本专利技术还提供循环利用以上所述短乳杆菌全细胞制备γ
‑
氨基丁酸的方法，包括以下步骤：将所述短乳杆菌进行活化、制备种子液；将种子液接入到发酵培养基中；加入L
‑
谷氨酸钠，进行发酵；发酵结束后收集发酵液，离心收集全细胞；所述发酵培养基为：葡萄糖20
‑
80.0g/L，玉米浆干粉10
‑
35.0 g/L，蛋白胨5.0
‑
10.0g/L，牛肉浸粉3.0
‑
8.0g/L，酵母浸粉2.0
‑
5.0g/L，磷酸氢二钾1.0
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18.0 g/L，柠檬酸氢二铵1.0
‑
5.0 g/L，乙酸钠3.0
‑
5.0 g/L，硫酸镁0.2
‑
1.0 g/L，硫酸锰0.01
‑
0.05 g/L，吐温80 0.2
‑
1.0 g/L；将收集所得全细胞加入到转化液中进行转化；转化结束后收集转化液，离心收集所述短乳杆菌全细胞，将其加入到新的转化液中，进行循环利用制备γ
‑
氨基丁酸。
[0012]进一步地，将收集所得菌体按照湿重25
‑
200g/L的添加量加入到转化液中，35
‑
50℃，pH值为4.0
‑
5.0条件下转化120
‑
200h。
[0013]更进一步地，所述转化液包括以下组分：硫酸镁1
‑
10g/L，磷酸吡哆醛0.1
‑
1.5g/L，L
‑
谷氨酸100
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800g/L。
[0014]更进一步地，转化条件为：在温度为35
‑
50℃，pH值为4.0
‑
5.0条件下转化。循环转化时间可达120
‑
200h。
[0015]进一步地，所述方法还包括γ
‑
氨基丁酸提取纯化步骤：将转化液进行离心收集上清液，将上清夜进行超滤膜、纳滤膜过滤；收集滤液，向滤液中加入活性炭在55
‑
80℃温度下进行吸附，吸附后进行抽滤得脱色液；将脱色液进行浓缩、降温析晶、重结晶，即得。
[0016]进一步地，所述方法还包括使用高效液相色谱分析法对转化液中的γ
‑
氨基丁酸浓度进行测定：高效液相色谱分析条件为：色谱柱为C18色谱柱，4.6mm
×
250mm，5μm；检测波长为190
‑
235nm；流动相：质量浓度为0.1
‑
0.5%高氯酸用氢氧化钠调节pH至2.5
‑
5.0的溶液，与乙腈以5
‑
9:1的比例混合；流速为0.5
‑
1mL/min，柱温为25
‑
35℃；进样量为10
‑
30μL；分析时间10
‑
20min。
[0017]L
‑
谷氨酸与γ
‑
氨基丁酸混标HPLC检测图谱见图2。
[0018]进一步地，所述含有谷氨酸脱羧本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株短乳杆菌，其特征在于，所述短乳杆菌（Lactobacillus brevis）已于2021年09月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.23487，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。2.权利要求1所述短乳杆菌的发酵用培养基，其特征在于，所述培养基为：葡萄糖20.0
‑
200.0g/L，玉米浆干粉3.0
‑
35.0 g/L，蛋白胨5.0
‑
30.0g/L，牛肉浸粉3.0
‑
35.0g/L，酵母浸粉2.0
‑
25.0g/L，磷酸氢二钾1.0
‑
18.0 g/L，柠檬酸氢二铵1.0
‑
15.0 g/L，乙酸钠3.0
‑
20.0 g/L，硫酸镁0.2
‑
10.0 g/L，硫酸锰0.01
‑
5.00 g/L，吐温80 0.2
‑
3.0 g/L。3.根据权利要求2所述的发酵用培养基，其特征在于，所述发酵培养基为：葡萄糖20.0
‑
80.0g/L，玉米浆干粉10
‑
35.0 g/L，蛋白胨5.0
‑
10.0g/L，牛肉浸粉3.0
‑
8.0g/L，酵母浸粉2.0
‑
5.0g/L，磷酸氢二钾1.0
‑
18.0 g/L，柠檬酸氢二铵1.0
‑
5.0 g/L，乙酸钠3.0
‑
5.0 g/L，硫酸镁0.2
‑
1.0 g/L，硫酸锰0.01
‑
0.05 g/L，吐温80 0.2
‑
1.0 g/L。4.权利要求1所述短乳杆菌的发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1所述短乳杆菌进行活化、制备种子液；将种子液接入到权利要求2所述发酵用培养中；在25℃
‑
37℃，pH值为5.0
‑
7.5条件下发酵。5.权利要求1所述短乳杆菌产谷氨酸脱羧酶的方法，其特征在于，所述方法包括摇瓶发酵培养产谷氨酸脱羧酶和发酵罐发酵培养产谷氨酸脱羧酶；摇瓶发酵培养和发酵罐发酵培养产谷氨酸脱羧酶的方法包括：将权利要求1所述短乳杆菌进行活化、制备种子液；将种子液接入到权利要求3所述发酵用培养基中；加入5
...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁建国，张言慧，高艳华，
申请(专利权)人：山东国力生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：