鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术涉及一种鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条、试剂盒及检测方法，包括：样品垫、检测膜、吸水垫及底板；所述检测膜上分别设有包被鼠伤寒沙门氏菌抗体的检测线以及包被有羊抗鼠IgG抗体或兔抗鼠IgG抗体的质控线；所述检测膜设置在所述底板上，所述样品垫与所述检测膜靠近所述检测线一端连接，所述吸水垫与所述检测膜靠近所述质控线一端连接。本发明专利技术提供的鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条、试剂盒及检测方法能有效区分死活菌，消除死菌带来的假阳性干扰，还能有效缩短检测时间，降低成本，实现现场快速检测，提高检测精度。提高检测精度。提高检测精度。

【技术实现步骤摘要】
鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条、试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及微生物检测
，特别是涉及一种鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条、试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]沙门氏菌是常见的食源性致病菌，是引发食源性疾病的主要致病菌之一，常在蛋及其制品、肉类、乳制品等食品中检出。鼠伤寒沙门氏菌在沙门氏菌感染中占主要地位，是引起小儿结肠炎的罪魁祸首。
[0003]传统的微生物检测方法通常是用国标检测方法，是检验的“金标准”，但费时费力、成本高、专业性强，无法实现及时有效的检测。而分子生物学，如基于DNA聚合酶链式反应(PCR)检测方法，具有准确性高、较为快速的特点，但是依赖于PCR仪和昂贵的耗材，并且需要专业的操作技术避免假阳性、假阴性和气溶胶污染，难以满足沙门氏菌检测快速准确和操作简便的要求。而免疫检测技术，尽管ELISA因其高灵敏度和准确性被誉为免疫检测的金标准，但其实施对检测仪器、环境条件和人员的操作要求高，并不适用于突发食品安全和公共卫生事件即时有效检测。

技术实现思路

[0004]基于此，有必要针对鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测中常见的检测方法耗时长，检测精度低，容易出现漏检情况，或检测精度高，但成本高，仪器操作复杂，不适合现场快速检测的问题，提供一种鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条、试剂盒及检测方法，从而能有效缩短检测时间，降低成本，实现现场快速检测。该试纸条所使用的荧光染料能有效区分死活菌，消除死菌带来的假阳性干扰，提高检测精度。
[0005]一种鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条，包括：样品垫、检测膜、吸水垫及底板；所述检测膜上分别设有包被鼠伤寒沙门氏菌抗体的检测线以及包被有羊抗鼠IgG抗体或兔抗鼠IgG抗体的质控线；所述检测膜设置在所述底板上，所述样品垫与所述检测膜靠近所述检测线一端连接，所述吸水垫与所述检测膜靠近所述质控线一端连接。
[0006]在其中一个实施例中，所述样品垫的制备步骤如下：制备样品垫预处理液，所述样品垫预处理液为含tween
‑
20和BSA的TBS缓冲液；将所述样品垫预处理液滴加至样品垫上，45℃烘干3～4小时，获得所述样品垫。
[0007]在其中一个实施例中，所述检测线的制备步骤如下：将PBS溶液稀释后的鼠伤寒沙门氏菌抗体在室温且湿度为30％～60％的环境中平衡后，划线于所述检测膜上，包被量为0.5～1.0μL/cm膜，置于37℃烘箱过夜。
[0008]在其中一个实施例中，所述质控线的制备步骤如下：将PBS溶液稀释后的羊抗鼠IgG抗体或兔抗鼠IgG抗体在室温且湿度为30％～60％的环境中平衡后，划线于所述检测膜上，包被量为0.5～1.0μL/cm膜，置于37℃烘箱过夜。
[0009]在其中一个实施例中，所述检测线与所述质控线之间的间隔为3～8mm。
[0010]一种鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试剂盒，包括：样品标记液、时间分辨荧光微球标记小鼠IgG抗体、检测卡以及前述任一一项的鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条，所述检测卡具有检测腔，并设有与所述检测腔连通的加样槽和观察窗，所述鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条安装在所述检测腔内。
[0011]在其中一个实施例中，所述样品标记液的制备步骤如下：将SYTO
‑
9和PI两种核酸荧光染料储液各取1～5μL于1mL无菌超纯水中，混匀，得到SYTO
‑
9与PI混合工作液，获得所述样品标记液。
[0012]在其中一个实施例中，所述时间分辨荧光微球标记小鼠IgG抗体的制备步骤如下：
[0013]将时间分辨荧光微球加入到HEPES偶联缓冲液中，再加入待标记的小鼠IgG抗体，所述小鼠IgG抗体与时间分辨荧光微球的比例为10～100μg/100μL微球，超声偶联5～30min，加入封闭液进行封闭，高速离心5～30min，用保存液洗涤重悬2～4次，4℃冰箱中保存。
[0014]一种鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测方法，包括如下步骤：
[0015]将待测样品与样品标记液按比例混匀，避光染色；
[0016]用稀释液将时间分辨荧光微球标记的小鼠IgG抗体进行稀释，加入待测样品中；
[0017]开启免疫荧光分析仪，读取标准曲线；
[0018]向所述鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条加入所述经时间分辨荧光微球标记的小鼠IgG抗体标记的待测样品，反应5～20min；
[0019]将所述鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条插入免疫荧光分析仪中，读取检测线和质控线的荧光强度，给出T值、C值以及T/C值，通过标准曲线可获取样品中鼠伤寒沙门氏菌活菌的浓度，并进行判断。
[0020]在其中一个实施例中，所述将待测样品与样品标记液按比例混匀，所述待测样品与样品标记液的体积比为0.5:1～2:1，所述避光染色时间为5～20min。
[0021]在其中一个实施例中，所述用稀释液将时间分辨荧光微球标记的小鼠IgG抗体进行稀释，稀释倍数为50～200倍，加样量为待测样品体积的2％～10％。
[0022]在其中一个实施例中，所述向所述鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条加入所述经时间分辨荧光微球标记的小鼠IgG抗体标记的待测样品，滴加待测样品的体积为50～100μL。
[0023]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
[0024](一)、本专利技术采用的荧光染料PI和SYTO
‑
9是核酸染料，两种染料同时对细菌染色，荧光照射下有完整质膜结构的细胞呈绿色，细胞膜结构被损坏的细胞呈红色，而且两种染料的激发光谱和发射光谱不同，其中SYTO
‑
9激发波长为485nm，发射波长为530nm，在合适的波段下可以有效区分细菌的死活性；
[0025](二)、本专利技术制备的荧光免疫层析试剂条能进行定量检测，具有灵敏度高、检测方便、快捷、价格便宜、无需专业人员操作等优势，有利于基层的现场快速检测，并且能消除死菌带来的假阳性干扰。
附图说明
[0026]图1为本专利技术所述鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条的结构示意图；
[0027]图2为本专利技术所述鼠伤寒沙门氏菌活菌检测标准曲线图。
[0028]1、底板；2、样品垫；3、检测膜；4吸水垫；5、检测线；6、质控线。
具体实施方式
[0029]为了能够更清楚地理解本专利技术的上述目的、特征和优点，下面结合附图和具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0030]在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术，但是，本专利技术还可以采用其他不同于在此描述的其他方式来实施，因此，本专利技术的保护范围并不受下面公开的具体实施例的限制。
[0031]下面参照附图描述本专利技术一些实施例所述一种鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条、试剂盒及检测方法。
[0032]实施例一：
[0033]本实施例提供了一种鼠伤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条，其特征在于，包括：样品垫(2)、检测膜(3)、吸水垫(4)及底板(1)；所述检测膜(3)上分别设有包被鼠伤寒沙门氏菌抗体的检测线(5)以及包被有羊抗鼠IgG抗体或兔抗鼠IgG抗体的质控线(6)；所述检测膜(3)设置在所述底板(1)上，所述样品垫(2)与所述检测膜(3)靠近所述检测线(5)一端连接，所述吸水垫(4)与所述检测膜(3)靠近所述质控线(6)一端连接。2.根据权利要求1所述的鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条，其特征在于，所述样品垫(2)的制备步骤如下：制备样品垫预处理液，所述样品垫预处理液为含tween
‑
20和BSA的TBS缓冲液；将所述样品垫预处理液滴加至所述样品垫(2)上，45℃烘干3～4小时，获得所述样品垫。3.根据权利要求1所述的鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条，其特征在于，所述检测线(5)的制备步骤如下：将PBS溶液稀释后的鼠伤寒沙门氏菌抗体在室温且湿度为30％～60％的环境中平衡后，划线于所述检测膜(3)上，包被量为0.5～1.0μL/cm膜，置于37℃烘箱过夜。4.根据权利要求1所述的鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条，其特征在于，所述质控线(6)的制备步骤如下：将PBS溶液稀释后的羊抗鼠IgG抗体或兔抗鼠IgG抗体在室温且湿度为30％～60％的环境中平衡后，划线于所述检测膜(3)上，包被量为0.5～1.0μL/cm膜，置于37℃烘箱过夜。5.根据权利要求1所述的鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条，其特征在于，所述检测线(5)与所述质控线(6)之间的间隔为3～8mm。6.一种鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试剂盒，其特征在于，包括：样品标记液、时间分辨荧光微球标记小鼠IgG抗体、检测卡以及如权利要求1～5所述任一一项的鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条，所述检测卡具有检测腔，并设有与所述检测腔连通的加样槽和观察窗，所述鼠伤寒沙门氏菌活菌定量检测试纸条安装在所述检测腔内。7.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭有将，林丽，漆彦斌，赵力超，梁德智，文媛怡，
申请(专利权)人：佛山墨赛生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：