基因组甲基化文库及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种基因组甲基化文库及其制备方法和应用，包括以下步骤：提供转座酶复合体，所述转座酶复合体由转座接头和转座酶组成，所述转座接头含有转座子序列；使用所述转座酶复合体对基因组DNA进行片段化，得到加上了所述转座接头的片段化产物；使用以mdCTP替代了dCTP的dNTPs对所述片段化产物进行缺口补齐；将经所述缺口补齐后的片段化产物进行转化处理，使未被甲基化修饰的胞嘧啶转化为尿嘧啶；将经所述转化处理后的片段化产物进行PCR扩增，得到所述基因组甲基化文库。本发明专利技术可以解决甲基化文库比对分析的问题，实现更准确的甲基化位点分析，可以进行基因突变位点分析，也可大大提高文库碱基平衡性，大幅提高测序质量。量。量。

【技术实现步骤摘要】
基因组甲基化文库及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因检测
，特别是涉及一种基因组甲基化文库及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]DNA甲基化是DNA化学修饰的一种形式，能够在不改变DNA序列的前提下，改变遗传表现。所谓DNA甲基化是指在DNA甲基化转移酶的作用下，在基因组CpG二核苷酸的胞嘧啶5号碳位共价键结合一个甲基基团。大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。甲基化异常是癌症中一种常见的表观遗传学改变，大量研究表明甲基化异常与肿瘤的发生、发展、细胞癌变有着密切的联系。
[0003]目前的甲基化研究方法中，主要包含甲基化特异性PCR、高分辨率溶解曲线法、重亚硫酸盐测序法、基因组直接测序法等。最常用的方法是基于重亚硫酸盐的方法，该方法中，在重亚硫酸盐的作用下，DNA中未被甲基化修饰的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U)，通过高通量测序检测出未被转化的胞嘧啶(C)，即为被甲基化修饰的胞嘧啶。随着高通量测序技术的发展，DNA甲基化检测也由单本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因组甲基化文库的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：提供转座酶复合体，所述转座酶复合体由转座接头和转座酶组成，所述转座接头含有转座子序列；使用所述转座酶复合体对基因组DNA进行片段化，得到加上了所述转座接头的片段化产物；使用以mdCTP替代了dCTP的dNTPs对所述片段化产物进行缺口补齐；将经所述缺口补齐后的片段化产物进行转化处理，使未被甲基化修饰的胞嘧啶转化为尿嘧啶；将经所述转化处理后的片段化产物进行PCR扩增，得到所述基因组甲基化文库。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述转座接头为单链接头、双链接头和茎环接头中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述转座接头含有甲基化修饰的胞嘧啶。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述转座接头包括序列如SEQ ID NO：1所示的第一接头和序列如SEQ ID NO：2所示的第二接头，以及序列如SEQ ID NO：3所示的第三接头或序列如SEQ ID NO：4所示的第四接头。5.根据权利要求1～4任一项所述的制备方法，其特征在于，在所述缺口补齐的步骤之前还包括以下步骤：使用具有3
’
端到5
’
端核酸外切功能的酶对所述片段化产物进行酶切处理以扩大所述转座酶复合体形成的缺口。6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：阳卫超，
申请(专利权)人：广州滴纳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：