一株益生植物乳杆菌及其在饲料添加剂方面的应用制造技术

本发明专利技术涉及一株乳杆菌，特别涉及一株益生植物乳杆菌及其在饲料添加剂方面的应用，属于微生物技术领域。一株植物乳杆菌RGC10，该乳酸菌为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）菌株RGC10，于2019年9月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院，中科院微生物研究所，邮编100101），保藏编号为CGMCC NO.18625。该菌株对常见抗生素敏感，耐受胃肠道环境，能够在4.0mmol/L的过氧化氢环境中增殖。殖。

【技术实现步骤摘要】
一株益生植物乳杆菌及其在饲料添加剂方面的应用


[0001]本专利技术涉及一株乳杆菌，特别涉及一株益生植物乳杆菌及其在饲料添加剂方面的应用，属于微生物


技术介绍

[0002]抗生素在畜牧业中被大量使用，不仅作为疾病的预防、治疗手段，也应用为畜禽的促生长剂。近年来，抗生素滥用导致抗生素抗性病原体的传播和抗生素在食物中残留等生物安全问题得到了越来越多的关注，严重威胁畜禽与人类的健康安全。欧盟、日本等国家自2006年起相继禁止将抗生素用作饲料添加剂。克服抗生素的弊端、寻求抗生素的替代物成为动物营养与健康相关研究的热点。众多研究表明，益生乳酸菌制剂能够调节畜禽肠道菌群结构、物质代谢和肠道免疫稳态，提升其健康状态及生产效率。
[0003]活性氧对动物细胞信号转导具有重要的调节功能，但是过量的活性氧会引起细胞脂质、蛋白质和DNA的氧化损伤，致使畜禽处于亚健康状态。动物肠道氧化损伤会引起肠道屏障功能障碍，降低营养成分的吸收、利用效率。近期的研究成果进一步表明，益生菌的补充能够减少宿主肠道内活性氧的积累、提高动物的抗氧化能力，进而改善动物的健康状态和生产效率，是潜力巨大的候选抗氧化剂。
[0004]尽管益生菌在在药品、保健品、动物饲料等行业中的应用日渐广泛，但FAO/WHO指出，部分益生菌具有感染宿主机体、有害代谢活动、对敏感个体的过度免疫刺激以及基因转移等副作用。而畜用益生菌属于微生物饲料添加剂，在我国国内尚未建立完善的筛选标准和评价规程。畜用益生菌除了直接影响畜禽健康与生产状态，更会随着畜禽活动及动物产品进入到人类生活，与人类健康及安全密切相关。因此，在开发和应用畜用益生菌过程中，对其进行更为全面的安全性评估至关重要，需要借鉴多方人用益生菌的相关规定，应用严格的安全性及有效性筛选标准。自然界中植物表面天然附着有大量的乳酸菌，而其中绝大部分尚未得到充分的开发利用，是个潜力巨大的菌种资源库。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一株益生植物乳杆菌，该菌株对常见抗生素敏感，耐受胃肠道环境，能够在4.0mmol/L的过氧化氢环境中增殖。
[0006]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0007]一株植物乳杆菌RGC10，该乳酸菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)菌株RGC10，于2019年9月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院，中科院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号为CGMCC NO.18625。
[0008]作为优选，该菌株可在4mmol/L以内的过氧化氢环境中增殖。
[0009]一种编码所述植物乳杆菌菌株的植物乳杆菌基因，其16S rDNA核苷酸全序列如SEQ ID No.1所示。
[0010]含有本专利技术所述植物乳杆菌RGC10菌株的菌剂。
[0011]一种所述植物乳杆菌RGC10菌株在抑制大肠杆菌K99或都柏林沙门氏菌方面的应用。
[0012]一种饲料添加剂，所述饲料添加剂包含所述的植物乳杆菌RGC10菌株和/或所述的菌剂。
[0013]一种动物饲料，包含所述的添加剂。所述的动物包括猪、家禽及反刍动物。本专利技术中，植物乳杆菌RGC10能够耐受高浓度过氧化氢环境，能够在4.0mmol/L的过氧化氢环境中增殖，同时能够在体外显著提升牛小肠上皮细胞的抗氧化能力，益生效果突出。
[0014]一种由所述菌株制得的食品或动物药品。
[0015]本专利技术提供的植物乳杆菌Lactobacillus plantarum RGC10，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.18625。该菌株分离自菠萝果废青贮，革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，对常见抗生素敏感，耐受胃肠道环境。在体外能够显著抑制大肠杆菌K99和都柏林沙门氏菌的生长，具有高细胞表面疏水性，并对牛小肠上皮细胞表现出良好的粘附性，够促进幼龄犊牛的肠道健康，降低犊牛断奶前后腹泻发生率，是具有高益生潜力的新型益生乳酸菌菌株。
[0016]此外，植物乳杆菌RGC10能够耐受高浓度过氧化氢环境，能够在4.0mmol/L的过氧化氢环境中增殖，高于已报道的植物乳杆菌MA2和植物乳杆菌AR113，同时能够在体外显著提升牛小肠上皮细胞的抗氧化能力，具有提升犊牛健康状态与生产效率的巨大潜力。该菌株可作为牛用益生菌制剂的备选菌株，适用于开发为饲用益生菌添加剂和具有益生特性的抗氧化剂，应用前景广阔。
附图说明
[0017]图1为植物乳杆菌RGC10革兰氏染色的菌体形态图；
[0018]图2为植物乳杆菌RGC10抗生素敏感性的平板结果；
[0019]图3为植物乳杆菌RGC10无菌上清抑制大肠杆菌K99和都柏林沙门氏菌的平板结果图；
[0020]图4为植物乳杆菌RGC10的粘附细胞图(1000
×
)；
[0021]图5为植物乳杆菌RGC10在不同过氧化氢浓度下的生长曲线；
[0022]图6为植物乳杆菌RGC10减少牛小肠上皮细胞内活性氧(ROS)积累；
[0023]图7为植物乳杆菌RGC10增加牛小肠上皮细胞总抗氧化能力(T
‑
AOC)。
具体实施方式
[0024]下面通过具体实施例，对本专利技术的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本专利技术的实施并不局限于下面的实施例，对本专利技术所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本专利技术保护范围。
[0025]在本专利技术中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
[0026]实施例1：植物乳杆菌的分离和鉴定
[0027]1.1菌株分离和纯化
[0028]本专利技术提供的植物乳杆菌菌株分离自菠萝果废青贮。取10g菠萝果废青贮样品加入90mL灭菌PBS中，置于摇床低速震荡1h充分混匀。取清液，进行梯度稀释(1
×
10
‑3‑1×
10
‑5)后，涂布在MRS固体培养基上，37℃培养24h，挑取边缘整齐、光滑的单菌落进行进一步纯化培养。
[0029]将挑选的得到的菌株进行革兰氏染色、过氧化氢酶测定，保留革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性的菌株，以30％甘油冻存于
‑
80℃。
[0030]植物乳杆菌RGC10革兰氏染色后的菌体形态如图1所示。
[0031]1.2菌株鉴定
[0032]提取细菌DNA，以细菌DNA为模板，使用细菌通用引物27F(5
’‑
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
‑3’
)和1492R(5
’‑
GGTTACCTTGTTACGACTT
‑3’
)对候选菌株DNA进行PCR扩增，应用琼脂糖(1.5％)凝胶电泳对扩增产物进行检测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一株植物乳杆菌RGC10，该乳酸菌为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）菌株RGC10，于2019年9月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.18625。2.根据权利要求1所述的一株植物乳杆菌RGC10，其特征在于：该菌株可在4mmol/L以内的过氧化氢环境中增殖。3.一种编码权利要求1所述植物乳杆菌菌株的植物乳杆菌基因，其特征在于，其16S rDNA核苷酸全序...

【专利技术属性】
技术研发人员：王佳堃，柳娅璐，黄开朗，陈宏伟，杨斌，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：