一种人组胺受体HRH1mRNA检测引物探针组、试剂盒和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种人组胺受体HRH1 mRNA检测引物探针组、试剂盒和应用，涉及生物检测技术领域。本发明专利技术所述引物探针组包括HRH1

【技术实现步骤摘要】
一种人组胺受体HRH1 mRNA检测引物探针组、试剂盒和应用


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种人组胺受体HRH1 mRNA检测引物探针组、试剂盒和应用。

技术介绍

[0002]组织胺(Histamine)是一种活性胺化合物，是广泛存在于动植物体内的一种生物胺，是由组氨酸脱羧而形成的，通常贮存于组织的肥大细胞中。是身体内的一种重要的化学传导物质，可以影响许多细胞的反应，包括过敏、炎性反应、胃酸分泌等，当机体受到某种刺激引发抗原
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抗体反应时，引起肥大细胞的细胞膜通透性改变，释放出组胺，与组胺受体作用产生病理生理效应。组胺合成过程主要发生在肥大细胞、嗜碱性粒细胞、肺部、皮肤和胃肠粘膜中，和储存组胺的组织相一致。组胺与其他递质一样，先和靶细胞上特异性受体结合，从而改变细胞的生物活性，并发挥广泛的生理或病理作用。组胺的炎症作用，即组胺对体内的免疫动态平衡的影响依赖于现行已知的4个组胺受体的表达和活性。这4个组胺受体按被发现顺序命名为：组胺1型受体(H1)、组胺2型受体(H2)、组胺3型受体(H3)、组胺4型受体(H4)，其中，H1受体在介导过敏性炎症的发生中起着非常重要的作用，包括促进树突细胞成熟，调节Th1/Th2细胞之间平衡。H1受体属于G蛋白偶联受体(Gprotein
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coupled receptors，GPCR)的类视紫红质家族成员，主要在内皮、平滑肌、血管内皮细胞，心脏和中枢神经系统中表达，调节血管舒张和支气管收缩，是变态反应主要的治疗靶位。当组胺作用于H1受体后，细胞内环磷酸鸟苷(C
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GMP)增多，表现心率加快，血管收缩，支气管、小肠平滑肌收缩和微血管通透性增高。一般情况下，H1受体的活化形式与非活化形式处于一种平衡状态。在过敏性疾病中，大量的IgE刺激肥大细胞和嗜碱性粒细胞释放组胺，使组胺受体活化导致过敏性疾病的症状。组胺受体mRNA在过敏患者体内的表达水平高于健康人的表达水平。
[0003]H1抗组胺药物广泛用于季节性和常年过敏性鼻炎、荨麻疹及特应性皮炎等过敏性疾病的治疗，主要通过反向激动H1受体的非活化形式发挥其抗组胺作用。H1抗组胺药物不仅能够下调组胺诱导的H1受体mRNA的表达水平，在没有组胺刺激的情况下，也可以下调H1受体基础表达水平，降低其固有活性。
[0004]大部分过敏性疾病患者的治疗方式都是医生凭经验采用对症治疗，用抗组胺药来减轻过敏症状，但抗组胺治疗并非对所有患者有效，也无法量化治疗效果，但是目前没有相关的研究和记载。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种人组胺受体HRH1 mRNA检测引物探针组、试剂盒和应用，可一步法定量检测HRH1 mRNA的表达水平，为该蛋白的检出提供准确度高、检测范围广及灵敏度高的检测手段。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种人组胺受体HRH1 mRNA检测引物探针组，所述引物探针组包括HRH1
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F、HRH1
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R和探针H1
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Probe；
[0008]所述HRH1
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F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述HRH1
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R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探针H1
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Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0009]优选的，所述引物探针组还包括内参基因GAPDH的引物对和探针，所述GAPDH的引物对包括GAPDH
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F和GAPDH
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R，所述探针包括G
‑
Probe；
[0010]所述GAPDH
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F的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述GAPDH
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R的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述G
‑
Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0011]优选的，在所述探针H1
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Probe和G
‑
Probe的5
’
端各标记不同的荧光标记基团，3
’
端标记相同或不同的淬灭基团。
[0012]优选的，所述荧光标记基团包括FAM或JOE，所述淬灭基团包括BHQ1。
[0013]本专利技术还提供了一种一步法检测人组胺受体HRH1 mRNA表达水平的试剂盒，所述试剂盒包括上述引物探针组的混合液、PCR反应液、酶混合液、人组胺受体HRH1标准品、ROX参比染料和无核酶水。
[0014]优选的，所述混合液中HRH1
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F、HRH1
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R、探针H1
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Probe、GAPDH
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F、GAPDH
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R和G
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Probe的浓度分别为1nM、1nM、1.5nM、2nM、2nM和3nM。
[0015]优选的，所述PCR反应液包括dNTP mix、MgCl2和缓冲液；
[0016]所述酶混合液包括Taq酶、逆转录酶、RNA酶抑制剂和Taq酶抗体；所述Taq酶、逆转录酶、RNA酶抑制剂和Taq酶抗体的质量比为15:6:3:1。
[0017]本专利技术还提供了一种基于上述试剂盒的一步法检测人组胺受体HRH1mRNA表达水平的方法，包括以下步骤：以人组胺受体HRH1标准品为模板，利用所述试剂盒配制反应体系，进行qRT
‑
PCR反应，以拷贝数对数值为横坐标，以Ct值为纵坐标构建标准曲线；
[0018]以样品提取的RNA为模板配制相同的反应体系，进行相同的qRT
‑
PCR反应，利用所述标准曲线，测算人组胺受体HRH1 mRNA的表达水平。
[0019]优选的，所述反应体系以20μL计，包括：无核酶水2.4μL，PCR反应液10μL，酶混合液0.5μL，ROX参比染料0.5μL，引物探针组的混合液2μL和模板5μL。
[0020]优选的，所述qRT
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PCR反应的程序包括：42℃30min；95℃1min；95℃5s，60℃31s，40个循环。
[0021]优选的，所述标准曲线为y＝
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3.177x+34.178，R2＝0.996。
[0022]本专利技术还提供了上述引物探针组或上述试剂盒在制备免疫性疾病治疗用药依据或动态监测治疗效果的工具中的应用。
[0023]本专利技术提供了一种人组胺受体HRH1 mRNA检测引物探针组，并提供了一种包含所述引物探针组的试剂盒，可利用RNA一步法检测人组胺受体HRH1(HRH1)mRNA表达水平，一方面可以判断患者的过敏症状是否由通过组胺途径引起(非组胺途径引起的过敏症状不表达组胺受体)和指导用药量(H1受体表达量高的需要更高剂量的H1抗组胺药物)，另一方面可以动态监测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人组胺受体HRH1 mRNA检测引物探针组，其特征在于，所述引物探针组包括HRH1
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F、HRH1
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R和探针H1
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Probe；所述HRH1
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F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述HRH1
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R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探针H1
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Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。2.根据权利要求1所述引物探针组，其特征在于，所述引物探针组还包括内参基因GAPDH的引物对和探针，所述GAPDH的引物对包括GAPDH
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F和GAPDH
‑
R，所述探针包括G
‑
Probe；所述GAPDH
‑
F的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述GAPDH
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R的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述G
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Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。3.根据权利要求1或2所述引物探针组，其特征在于，在所述探针H1
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Probe和G
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Probe的5
’
端各标记不同的荧光标记基团，3
’
端标记相同或不同的淬灭基团。4.根据权利要求3所述引物探针组，其特征在于，所述荧光标记基团包括FAM或JOE，所述淬灭基团包括BHQ1。5.一种一步法检测人组胺受体HRH1...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴善东，刘奕，吴周杰，蒋学翰，王吉萍，王美杰，杨旭凯，
申请(专利权)人：杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：