一种荧光芯片定量检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种荧光芯片定量检测试剂盒，属于蛋白检测技术领域。本发明专利技术所述试剂盒包括检测板和荧光微球偶联的检测抗体；所述检测板设有多个反应槽，反应槽设有开口，所述反应槽的内底面沿所述反应槽的长度方向并排间隔设置有多个检测位点。本发明专利技术所述试剂盒能够高灵敏地检测细胞因子或过敏原蛋白特异性IgE、IgG和IgA，并且能够快速定量检测人血清或血浆中的细胞因子浓度，可一次检测十几种细胞因子，也可快速定量检测人血清或血浆中的过敏原蛋白特异性抗体IgE、IgG和IgA的浓度，并可一次筛查几十种过敏原。查几十种过敏原。查几十种过敏原。

A fluorescent chip quantitative detection kit

【技术实现步骤摘要】
一种荧光芯片定量检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及蛋白检测
，具体涉及一种高灵敏、荧光芯片定量检测人血清或血浆中多种细胞因子水平和过敏原特异性IgE、IgG和IgA浓度，IgG包括IgG4的试剂盒。

技术介绍

[0002]细胞因子风暴(高细胞因子血症)这一术语首次在1993作为移植物抗宿主病(GVHD)的发病机制被提出。该术语在传染病研究中的使用始于2000年初，在有关巨细胞病毒、噬血细胞性淋巴组织细胞增生症、流感病毒、严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(SARS
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CoV)等报道中被使用。细胞因子风暴是引起急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和多器官衰竭的重要原因，其浓度与疾病的严重程度和预后相关。
[0003]细胞因子是免疫原、丝裂原或其他刺激剂诱导多种细胞产生的低分子量可溶性蛋白质，具有调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长以及损伤组织修复等多种功能。细胞因子可分为白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)、趋化因子和生长因子等。众多细胞因子在机体内相互促进或相互制约，形成极其复杂的细胞因子免疫调节网络。特定的细胞因子以自分泌、旁分泌或内分泌3种方式发挥生物学作用，具有多效性、重叠性、拮抗性和协同性等多种特性。作为一把“双刃剑”，细胞因子和其他免疫分子一样，既可发挥免疫调节作用，在一定条件下也可参与多种疾病的发生，甚至引发细胞因子风暴及细胞因子风暴综合征，导致多器官损伤、功能衰竭而死亡。
[0004]细胞因子风暴与多种传染性和非传染性疾病有关，是由感染、药物等多种因素诱发的全身系统性炎症反应。与细胞因子风暴有关的炎症始于局部组织，并通过循环波及全身，具体表现为血流量增加升高局部温度(发热)、肌肉痛/关节痛、恶心、皮疹、精神不振等轻度类似流感的急性炎症症状，动员机体免疫系统抵抗病原体感染。急性炎症反应也以促炎细胞因子或趋化因子释放为特征。炎症开始后不久即开始了补偿性修复过程，在许多情况下，修复过程可以完全恢复组织和器官功能。病原体在感染状态下试图扰乱精密的免疫调节系统以逃避免疫反应，并演化出多种逃避策略以实现大量复制。有些情况下，病原体可以逃脱免疫应答进而不会诱导有效的免疫反应；而在其他情况下，某些病原体能过度地刺激免疫系统，当局部组织结构遭到破坏时，失调的炎性细胞因子/趋化因子可能溢出到循环系统中，引起大规模的炎症级联反应。当风暴来袭时，单器官或多器官系统炎症反应过度表现，如肺部症状(低氧血症、血管渗漏引起的肺水肿，甚至ARDS)、心血管症状(低血压、心律失常、心肌损害、休克)、血液系统症状(血细胞持续降低、凝血障碍、弥漫性血管内凝血)、急性肾损伤、多器官功能衰竭，甚至危及生命。这种不受控制的全身性炎症反应是由初次免疫细胞过度激活和扩增所致的极端炎症反应介质释放所引起。
[0005]过敏性疾病包括过敏性哮喘、过敏性鼻炎、过敏结膜炎，、特应性皮炎、荨麻疹、血管性水肿、严重过敏反应等。过敏性疾病是患者吸入或摄食入含有致敏成分的物质(称为过敏原或变应原，Allergen)后触发机体的B细胞产生过量的免疫球蛋白E(Immunoglobulin E，IgE)，当IgE抗体在体内再次接触过敏原时就与过敏原交联结合到肥大细胞和嗜碱性粒
细胞表面上的高亲和受体FcεR1上，导致FcεR1受体的聚集，使肥大细胞和嗜碱性粒细胞活化。肥大细胞在活化过程中脱颗粒并释放储存在细胞浆颗粒里的炎性介质：组胺，与通过花生四烯酸途径合成的白三烯、免疫反应性前列腺素和IL4、IL5等细胞因子及趋化因子，引发过敏反应的疾病症状。过敏性疾病的发生，IgE抗体起关键作用，称为IgE介导的过敏反应(即Gell
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Coombs I型超敏反应，或称IgE介导的速发性超敏反应)。IgE介导的过敏性疾病的特征是患者体内循环血液中的过敏原特异性IgE(sIgE)抗体浓度较正常状况下高，且病症越严重，sIgE抗体浓度越高。
[0006]过敏性疾病的临床诊断在美国临床医师实用指南中指出，根据患者病史结合点刺或血液检测过敏原特异性IgE(sIgE)抗体浓度，筛查致病过敏原(Siles R I，Hsieh F H.Allergy blood testing：A practical guide for clinicians.Am Clin J Medicine.2011；78：585
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592.)。目前，检测血液中过敏原特异性IgE(sIgE)抗体浓度，筛查致病过敏原的方法有酶免疫法(EIA)、免疫印迹法(Immunoblotting Assay)、胶体金侧流层析法(LFA)、蛋白芯片法(Proteins microarray)等，符合发展趋势和市场要求的是：自动化、快速、准确、样品用量少，一次筛查几十种过敏原。市场上产品不少，其中，ThermoFisher公司Phadia品牌产品ImmunoCAP 250系统是酶免疫法的代表，ImmunoCAP Rapid是胶体金侧流层析法的代表，ImmunoCAP ISAC是蛋白芯片法的代表，开创了过敏原分子诊断；而德国Mediwiss
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analytic公司的AllergyScreen则是免疫印迹法的代表(Immunoblot for analysing specific IgE in human serum)。因人血液中IgE抗体平均浓度～0.005ug/ml，是总免疫球蛋白平均浓度的0.002％，sIgE抗体浓度更低，为满足自动化、快速、准确、样品用量少，一次筛查几十种过敏原，半定量或定量检测样品中的过敏原特异性IgE(sIgE)抗体浓度的要求，必须配置光电信号放大的检测仪，或生物化学方法的信号放大系统。如ImmunoCAP Rapid一次只能筛查十来种过敏原，不配阅读仪，肉眼判读sIgE抗体浓度的灵敏度只有1.0IU/ml(1IU IgE＝2.44ng IgE)，用1.49IU/ml区分阴性和阳性结果。
[0007]细胞因子与炎症高度相关，检测细胞因子能尽早进行炎症调控，临床指导抗生素的使用，辅助诊断病毒感染等。目前检测细胞因子的方法有流式荧光和酶联免疫法，流式荧光的成本较高，仪器成本高，酶联免疫法只能单项检测，血清用量较大。而目前市场上测过敏特异性IgE大多是定性，定量的需要较大型的仪器，实验时间长，需要的样本量大。
[0008]细胞因子，过敏原蛋白特异性IgE、IgG(包括IgG4)、IgA等项目都是指标较多的项目，目前市场上能检测的方法存在仪器较大、检测成本高或者实验时间长、样本量大等问题。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的在于提供一种荧光芯片定量检测试剂盒。本专利技术所述试剂盒通量较高、反应成本低、准确率高且重复性好，能够高灵敏地检测细胞因子或过敏原蛋白特异性IgE、IgG和IgA，IgG包括IgG4。
[0010]本专利技术提供了一种荧光芯片定量检测试剂盒，所述试剂盒包括检测板和荧光微球偶联的检测抗体；所述检测板设有多个反应槽，反应槽设有开口，所述反本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荧光芯片定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测板和荧光微球偶联的检测抗体；所述检测板设有多个反应槽，反应槽设有开口，所述反应槽的内底面沿所述反应槽的长度方向并排间隔设置有多个检测位点。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述检测板的材质包括聚苯乙烯；所述反应槽的上端设有开口，所述反应槽的内底面上沿所述反应槽的长度方向并排间隔设置有多个检测位点；所述检测位点为凹槽或凸起柱。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述检测板中反应槽的数量为5～20个，每个反应槽的底部设置的检测位点的数量为20～50个。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的待测物包括细胞因子或过敏原蛋白特异性IgE、IgG和IgA，IgG包括IgG4。5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，当所述试剂盒的待测物为细胞因子时，所述检测板的检测位点上固定有待测细胞因子特异性单抗，所述荧光微球偶联的检测抗体为荧光微球偶联的待测细胞因子配对抗体；所述待测细胞因子包括IL
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1beta、IL
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2、IL
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4、IL
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5、IL
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6、IL
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8、IL
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10、IL
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12P70、IL
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17A、TNF
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a、IFN
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γ和IFN
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α。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，固定有待测细胞因子特异性单抗的检测板的制备方法包括以下步骤：使用链霉亲和素对检测板的每个检测位点进行包被，得到包被后的检测板；将待测细胞因子特异性单抗分别使用生物素进行标记，得到生物素标记的待测细胞因子特异性单抗；将生物素标记的待测细胞因子特异性单...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴周杰，刘奕，吴善东，沈华浩，陈姗姗，吴绍长，王溢飞，朱明芝，王美杰，陈初含，
申请(专利权)人：杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：