用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液及其制备方法与应用，用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液包括溶剂和溶质，所述溶剂为缓冲液Tris

【技术实现步骤摘要】
用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及属于微流控免疫荧光检测
，更具体地说，它涉及一种用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]微流控技术是一种在微米尺度空间对流体进行操控为主要特征的科学技术，其技术核心是微流控芯片。微流控芯片具有检测速度快、高通量、灵敏度高、试剂消耗少等优势，近年来迅速发展。20世纪90年代，A.Mans等采用芯片提出了微全分析系统(微流控芯片)的概念，在该系统中，分析样品的进样、预处理、化学反应、分离和检测等功能实现了装备的微型化、自动化和一体化。
[0003]微流控免疫荧光检测芯片的检测原理为：全血通过检测卡上的过滤膜，将血细胞与血浆分离后，血浆流入检测卡中的混合区，其中血浆中的抗原或抗体通过与混合区中荧光标记抗体发生免疫反应，随后荧光抗体与血浆中的抗原或抗体随反应液流入微结构的流道中被固定在流道中的另一抗体捕获，通过测定其荧光强度计算待测物质的浓度。进样和对过滤膜前处理是微流控芯片工作的前两个环节。
[0004]高灵敏度是微流控芯片的主要优势之一，但也是最大的挑战之一。市面上对许多项目的检测都有极高的灵敏度需求，如BNP检测下限为5pg，cTnI检测下限为50pg等，这对微流控芯片工作的每个环节都有极高要求。为提高检测微流控检测的灵敏度，研究者们主要从改变抗体交联体系和荧光材料等方面入手。过滤膜承担着对样本前处理这一重要环节，目前普遍所用过滤膜仅发挥着从过滤红细胞和促进血浆流动两个作用。实验室前期的研究表明，过滤膜前处理的配方对项目的检测灵敏度起关键影响，对于检测阈值较高的项目如MYO的检测，通过优化交联体系等方法使用普通过滤膜仅能达到要求，但对于检测灵敏度较高的项目使用普通过滤膜则稍显不佳，因此，研制其处理配方至关重要。

技术实现思路

[0005]为了提高微流控芯片检测的灵敏度，本专利技术提供一种用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液。
[0006]一种用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液，包括溶剂和溶质，所述溶剂为缓冲液Tris
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HCL，所述Tris
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HCL的浓度为50Mm/L
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100Mm/L，所述溶质包括2g/L
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6g/L的表面活性剂，1g/L
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5g/L的PVP，3g/L
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6g/L的PEG6000，20g/L
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60g/L的糖类，30g/L
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60g/L的惰性蛋白，1mg/L
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5mg/L的异噬性抗体，1mg/L
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5mg/L抗红细胞抗体，0.5g/L
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1g/L的防腐剂。
[0007]通过采用上述技术方案，缓冲液Tris
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HCL提供血浆中的抗原抗体与芯片底板上包被的抗体抗原抗体免疫反应最佳的PH,离子强度；表面活性剂和PVP促进血浆流动，有利于荧光物质分散；PEG6000和糖类物质均能增强抗原抗体反应灵敏度；惰性蛋白能够对过滤膜起到封闭作用，减少非特异性吸附，增强抗原抗体反应灵敏度；异噬性抗体减少对非特异性
抗原产生的反应；抗红细胞抗体提高红细胞过滤效率，减少红细胞破裂后物质对检测产生的干扰；防腐剂可提高前处理液各种成分的保存时间。
[0008]优选的，所述表面活性剂为Triton X
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100、Tween20、S10、S11中的一种或者多种。
[0009]通过采用上述技术方案，Triton X
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100、Tween20、S10、S11中的一种或者多种都能控制血浆流动速度，但是Triton X
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100的效果最佳。
[0010]优选的，所述糖类物质为葡萄糖、蔗糖、果糖、海藻糖的一种或多种。
[0011]通过采用上述技术方案，葡萄糖、蔗糖、果糖、海藻糖的一种或多种都能增强抗原抗体反应灵敏度，但是葡萄糖的使用效果最佳。
[0012]优选的，所述惰性蛋白为BSA、酪蛋白、脱脂奶粉等的一种或多种。
[0013]通过采用上述技术方案，BSA、酪蛋白、脱脂奶粉等的一种或多种都能对过滤膜起到封闭作用，减少非特异性吸附，增强抗原抗体反应灵敏度，但是BSA的使用效果最佳。
[0014]优选的，所述防腐剂为PC300、叠氮化钠中的一种或者多种。
[0015]通过采用上述技术方案，PC300、叠氮化钠中的一种或者多种都能起到防腐剂的作用，但是PC300的使用效果最佳。
[0016]优选的，所述糖类为葡萄糖，所述惰性蛋白为BSA，所述葡萄糖：PEG6000：BSA的比值为10：1：10。
[0017]通过采用上述技术方案，BSA、PEG6000和葡萄糖三种物质的组合能够显著提高对血浆中的抗原抗体检测灵敏度，当海藻糖：PEG6000：BSA的比值为10：1：10时，效果最佳。
[0018]优选的，所述溶质包括：6g/L的Triton X
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100，5g/L的PVP,6g/L的PEG6000，60g/L的葡萄糖糖，60g/L的BSA，5mg/L的异噬性抗体,5mg/L抗红细胞抗体,1g/L的PC300。
[0019]通过采用上述技术方案，当各种溶质的浓度是上述浓度时，此时对血浆中的抗原抗体的检测结果最佳。
[0020]一种用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液的制备方法，包括以下步骤：调节Tris的PH使得PH值为7.8
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8.2，将溶质表面活性剂PVP,PEG6000，糖类，惰性蛋白，异噬性抗体,抗红细胞抗体与Tris混合搅拌，直至溶解。
[0021]通过采用上述技术方案，先将Tris的PH值进行调节，PH过高或过低都会降低检测信号，然后通过混合搅拌制备出前处理液。
[0022]一种用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液的应用，包括以下步骤：在前处理液中放入过滤膜，浸泡5min
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10min，取出平置干燥，20
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40℃烘干12h
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24h后取出，密封保存备用。
[0023]通过采用上述技术方案，过滤膜在前处理液中进行浸泡，浸泡时间小于5min，过滤膜未完全均匀吸收溶液，导致同批次过滤膜间差异较大，影响检测重复性；浸泡时间大于10min过滤膜过分吸收溶液膨胀，部分溶解于溶液中，影响过滤膜形状，使其形状不适用于底板；烘干后进行保存，经过前处理液的过滤膜的增强了微流控芯片检测的灵敏度，使得血浆中的抗原抗体的检测更加精准。
[0024]综上所述，本专利技术具有以下有益效果：
[0025]1.本专利技术通过采用Tris
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HCL为溶剂，溶质包括：表面活性剂，PVP，PEG6000，糖类，惰性蛋白，异噬性抗体，抗红细胞抗体防腐剂；缓冲液Tris
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液，其特征在于：包括溶剂和溶质，所述溶剂为缓冲液Tris
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HCL，所述Tris
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HCL的浓度为50Mm/L
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100Mm/L，所述溶质包括2g/L
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6g/L的表面活性剂，1g/L
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5g/L的PVP，3g/L
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6g/L的PEG6000，20g/L
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60g/L的糖类，30g/L
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60g/L的惰性蛋白，1mg/L
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5mg/L的异噬性抗体，1mg/L
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5mg/L抗红细胞抗体，0.5g/L
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1g/L的防腐剂。2.根据权利要求1所述的用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液，其特征在于：所述表面活性剂为Triton X
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100、Tween20、S10、S11中的一种或者多种。3.根据权利要求2所述的用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液，其特征在于：所述糖类为葡萄糖、蔗糖、果糖、海藻糖中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液，其特征在于：所述惰性蛋白为BSA、酪蛋白、脱脂奶粉中的一种或多种。5.根据权利要求4所述的用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐海燕，钟越，杨燕斌，于梦露，赵朝辉，
申请(专利权)人：重庆创芯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：