用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板的制作方法技术

本发明专利技术提供了一种用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板的制作方法，包括以下步骤：制备纸质微孔板，纸质微孔板的表面形成多个疏水区，每一疏水区环绕一亲水区；将制备得到的纸质微孔板浸入至高碘酸钠溶液中，取出后向纸质微孔板上的每一亲水区滴加壳聚糖溶液，形成高碘酸钠

【技术实现步骤摘要】
用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板的制作方法


[0001]本专利技术涉及酶联免疫吸附
，特别涉及一种用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板的制作方法。

技术介绍

[0002]酶联免疫吸附测定法(简写为ELISA法)的起始步骤是将包被抗体附着于微孔板的反应孔表面，称为包被，包被的效率即最终结合于微孔板表面的包被抗体密度及其稳定性决定了其随后结合抗原的数量，也就是说决定了酶联免疫吸附测定法的敏感度。近年来，随着纸质微流控技术的诸多优点，2010年Whitesides团队首次提出将纸作为固相载体运用于酶联免疫吸附试验，并且评价了纸质ELISA(简写为p
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ELISA)法的三个主要优势：标本量少，成本低，检测迅速，但p
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ELISA法的灵敏度不如传统ELISA法，限制了p
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ELISA法的应用范围。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供了一种用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板的制作方法，以解决现有技术中p
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ELISA法的灵敏度比传统ELISA法低的技术问题。
[0004]为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0005]本专利技术提供了一种用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板的制作方法，包括以下步骤：S1、制备纸质微孔板，所述纸质微孔板的表面形成多个疏水区，每一所述疏水区环绕一亲水区；S2、将所述步骤S1制备得到的所述纸质微孔板浸入至高碘酸钠溶液中，取出后向所述纸质微孔板上的每一所述亲水区滴加壳聚糖溶液，形成高碘酸钠
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壳聚糖修饰层；再向每一所述亲水区滴加包被抗体溶液，然后向每一所述亲水区滴加牛血清白蛋白溶液形成封闭层，即可得到所述用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板。
[0006]进一步地，所述步骤S2还包括：向每一所述亲水区滴加包被抗体溶液之前，先向每一所述亲水区滴加还原剂以还原所述高碘酸钠
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壳聚糖修饰层中的碳氮双键。
[0007]进一步地，所述步骤S2还包括：将所述纸质微孔板从高碘酸钠溶液中取出，浸泡于多元醇溶液中充分反应后，用水洗涤再滴加所述壳聚糖溶液。
[0008]进一步地，所述步骤S1中采用印章法制备所述纸质微孔板，制备方法包括以下步骤：将印章上沾染疏水剂后压于滤纸表面形成所述疏水区，所述疏水剂渗透所述滤纸后，干燥固化，得到所述纸质微孔板。
[0009]进一步地，所述疏水剂包括聚二甲基硅氧烷、环甲基硅氧烷、氨基硅氧烷、聚甲基苯基硅氧烷、聚醚聚硅氧烷共聚物中的一种或几种。
[0010]进一步地，所述印章上形成有多个环状的凸起，所述环状的凸起沾染所述疏水剂后压于滤纸的表面。
[0011]进一步地，所述印章法的步骤还包括：将所述疏水剂涂抹于纸表面，并使所述环状的凸起在纸表面上沾染所述疏水剂；其中，所述疏水剂的涂抹厚度为0.2mm～0.6mm，所述环状的凸起的高度为0.8mm～1.4mm。
[0012]进一步地，所述干燥固化的步骤中，干燥温度为50℃～85℃，干燥时间为20min～40min。
[0013]本专利技术提供的用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板的制作方法，通过印章法制作纸质微孔板，其制作的纸质微孔板表面包括多个疏水区及被疏水区环绕的亲水区，亲水区大小均一性好，且没有渗漏现象，能够很好地保持亲水区的均一性和密闭性；并在纸质微孔板的每一亲水区形成高碘酸钠
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壳聚糖修饰层，然后将包被抗体溶液滴加在亲水区形成的高碘酸钠
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壳聚糖修饰层上，并滴加牛血清白蛋白溶液形成封闭层，制得纸质酶联免疫吸附测定用的酶标板，使包被抗体溶液通过化学交联的方式与高碘酸钠
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壳聚糖修饰层连接，形成包被抗体层固定于纸质微孔板的亲水区表面，增强了包被抗体层固定的稳定性和有效性，提高了p
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ELISA法的灵敏度并且重复性好。
附图说明
[0014]图1为本专利技术实施例提供的用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板的制作方法制作的酶标板的结构示意图；
[0015]图2为为未修饰的纸质微孔板(图a)和高碘酸钠
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壳聚糖修饰后的纸质微孔板(图b)的扫描电镜图；
[0016]图3为为纸质微孔板的红外光谱图，a线为未修饰的纸质微孔板，b线为高碘酸钠氧化后的纸质微孔板，c线为高碘酸钠
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壳聚糖修饰的纸质微孔板；
[0017]图4为未修饰的纸质微孔板(图a)与印章法制作的纸质微孔板(图b)的扫描电镜图；
[0018]图5为基于高碘酸钠
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壳聚糖修饰层化学交联固定包被抗体的p
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ELISA法检测的标准曲线；
[0019]图6为本专利技术实施例提供的用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板的制作方法的反应及检测原理图。
[0020]附图标记说明：
[0021]1、纸质微孔板；2、亲水区。
具体实施方式
[0022]下面结合附图及具体实施例对本专利技术再作进一步详细的说明。
[0023]本申请实施例提供了一种用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板的制作方法，包括以下步骤：S1、制备纸质微孔板1，纸质微孔板1的表面形成多个疏水区，每一疏水区环绕一亲水区2；S2、将步骤S1制备得到的纸质微孔板1浸入至高碘酸钠溶液中，取出后向纸质微孔板1上的每一亲水区2滴加壳聚糖溶液，形成高碘酸钠
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壳聚糖修饰层；再向每一亲水区2滴加包被抗体溶液，然后向每一亲水区2滴加牛血清白蛋白溶液形成封闭层，即可得到用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板。本申请实施例制作的酶标板参照图1所示，酶标板包括设置有多个疏水区的纸质微孔板1和附着在每一亲水区2表面的包被层。
[0024]在常规的p
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ELISA法中，包被抗体主要通过静电吸附于纸质微孔板1表面，固定不牢固的包被抗体容易在洗涤过程中被洗脱，容易导致生物分子的随机固定，影响包被抗体的稳定性和有效性，降低了p
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ELISA法的灵敏度。包被抗体含有大量的氨基和羧基，我们在
研究中发现，可以通过化学交联的方式与固相载体即纸质微孔板1表面的醛基、羧基、氨基等基团进行化学偶联，增强p
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ELISA法的免疫分析性能。
[0025]可以理解地，生物分子固定于纸质微孔板1上的方式多样，不同的固定方式对生物分子活性的影响也不同。壳聚糖是甲壳素脱N
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乙酰基的产物，含有大量的氨基，一方面可以直接通过静电吸附作用固定于纸质微孔板1表面，但这种固定方式不稳定，容易被洗脱；另一方面也可以与经氧化剂氧化后的纸质微孔板1表面的醛基或者羧基结合，将壳聚糖牢固的结合于纸质微孔板1表面，此方式不需要任何化学交联剂，能良好地保持滤纸的物理和化学性能。而高碘酸钠作为一种滤纸的氧化剂，其浓度、氧化液pH值、氧化时间和温度将影响滤纸的物理性质及醛基量，因此氧化过程必须得到良好的控制。
[0026]本申请实施例中，通本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、制备纸质微孔板，所述纸质微孔板的表面形成多个疏水区，每一所述疏水区环绕一亲水区；S2、将所述步骤S1制备得到的所述纸质微孔板浸入至高碘酸钠溶液中，取出后向所述纸质微孔板上的每一所述亲水区滴加壳聚糖溶液，形成高碘酸钠
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壳聚糖修饰层；再向每一所述亲水区滴加包被抗体溶液，然后向每一所述亲水区滴加牛血清白蛋白溶液形成封闭层，即可得到所述用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板。2.根据权利要求1所述的用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板的制作方法，其特征在于，所述步骤S2还包括：向每一所述亲水区滴加包被抗体溶液之前，先向每一所述亲水区滴加还原剂以还原所述高碘酸钠
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壳聚糖修饰层中的碳氮双键。3.根据权利要求1所述的用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板的制作方法，其特征在于，所述步骤S2还包括：将所述纸质微孔板从高碘酸钠溶液中取出，浸泡于多元醇溶液中充分反应后，用水洗涤再滴加所述壳聚糖溶液。4.根据权利要求1至3任意一项所述的用于纸质酶联免疫吸附测定的酶标板的...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊诗丹，刘卓，丁建军，
申请(专利权)人：株洲市中医伤科医院，
类型：发明
国别省市：